罗红霉素的质量研究

1、 CENTRAL SOUTH UNIVERSITY 本科生毕业论文（设计）题 目 罗红霉素的质量研究 学生姓名 王晓鹏 指导教师 饶万兵 学 院 中南大学药学院 专业班级 药学一班 完成时间 2010年6月 30目录摘要1Abstract：11.前言21.1研究背景21.2 罗红霉素分析方法研究进展51.3 罗红霉素的质量研究内容61.4 本论文的主要内容82实验部分82.1 仪器82.2 试剂82.3 实验内容92.3.1罗红霉素的比旋度测定92.3.2罗红霉素引湿性的测定92.3.3罗红霉素的水分测定102.3.4罗红霉素的炽灼残渣和重金属检查112.3.5 罗红霉素有关物质测定122.3

2、.6 罗红霉素含量测定152.3.7 溶液稳定性162.3.8 影响因素实验172.3.9 加速实验202.3.10 溶剂残留考察213. 小结274. 致谢28参考文献28罗红霉素的质量研究摘要罗红霉素是经红霉素结构改造得到的新一代大环内酯类抗生素，为保证临床试验的用药安全及药品生产过程中的质控，该文根据中国药典及欧洲药典要求，对三批罗红霉素原料药进行了比旋度、引湿性、水分、炽灼残渣及重金属检查；分别采用HPLC和GC对其进行了有关物质、含量及溶剂残留测定；通过影响因素试验、加速试验及溶液稳定性试验考察了罗红霉素原料药在温度、湿度、光线等的影响下随时间变化的规律。通过以上项目的全面考察，为其

3、生产以及保存提供科学依据。关键词：罗红霉素；HPLC；有关物质；含量；稳定性；溶剂残留；系统适应性 Study on the quality of roxithromycinAbstract：Roxithromycin was a new generation of macrolide antibiotics which was obtained by modifying the structure of erythromycin, to ensure clinical medication safety and pharmaceutical quality control during pr

4、oduction, the specific optical rotation, the hygroscopicity, the water, the sulphated ash and the heavy metal of three batches roxithromycin drug substances were checked in this study; the content of roxithromycin and its related substances and residual solvent were determined by HPLC and GC; the va

5、riation laws with the time of the roxithromycin drug substances which were influenced by temperature, humidity level and the illumination were observed by stress testing, accelerated testing and stability testing. These compreh- ensive investigations can provide scientific proof for its production a

6、nd preservation.Keywords: Roxithromycin; HPLC; related substances; content; residual solvent; system adaptability1.前言1.1研究背景大环内酯类抗生素是一类具有共同化学结构和相近抗菌作用的抗菌药。按其大环结构含碳母核的不同，可分为14，15和16元环大环内酯类抗生素，是一组庞大的抑制蛋白质合成的快速抑菌药1。自1952年第一个大环内酯类药物红霉素A应用于临床以来，迄今为止已经发现的大环内酯类抗生素已逾百种。红霉素A作为临床一线用药，其优越性相当明显，成本低、口服方便、抗菌谱广、体内

7、组织分布好、组织浓度高。作为耐药的金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌感染治疗首选药物，临床应用甚多，对呼吸系统疾病、儿科、内科、其他系统的感染治疗发挥了重要的作用2。但是红霉素A具有生物利用度低、抗菌谱窄、胃肠道刺激等不良反应。在胃酸中红霉素降解成无活性的副产物，直接导致生物利用度低、胃肠道刺激。针对红霉素A酸性失活的化学修饰，产生了第二代大环内酯类抗生素，第二代大环内酯类抗生素的代表药物有罗红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素和氟红霉素等。与红霉素相比，第二代大环内酯类抗生素克服了酸不稳定性，改善了药动学性质，增加组织浓度，延长半衰期，拓宽了抗菌谱，增强了抗菌活性，胃肠道刺激等副作用得到明显降低，

8、因而获得了广泛的临床应用3。如今，以第二代红霉素如阿奇霉素、克拉霉素和罗红霉素等领军的大环内酯类抗生素在国际市场上所占份额近几年正稳步上升，从2000年的5%上升至2008年的11%。据悉，在国际市场上阿奇霉素、克拉霉素和罗红霉素等三支第二代红霉素产品的单品种销售额均为15亿美元。据悉，我国基本上已能生产几乎全部国际市场上销售的红霉素类原料药产品。从八十年代以来风行世界市场的琥乙红霉素到现在畅销国际市场的阿奇霉素，国内均已做到规模化生产程度4。罗红霉素(roxithromycin)是法国罗赛尔尤克拉夫公司于1987年从红霉素C9位羰基的一系列改造中获得的一个对胃酸稳定性高，生物活性较好的引入含

9、氮及含氧基团的衍生物（大环内酯类药物的分析）。罗红霉素是该公司于1987年开发上市的新型大环内酯类抗生素，其体外抗菌谱与红霉素相似。对葡萄球菌、链球菌、淋球菌、衣原体等有抗菌活性，临床上用于呼吸道、皮肤软组织及口腔感染。罗红霉素具有口服吸收好，生物利用度高，半衰期长，抗菌作用强，稳定性好等优点5。所以其在实际中的应用也越来越广泛。其结构式如下：罗红霉素在临床上的应用主要包括以下几个方面：一、治疗泌尿生殖感染罗红霉素对由支原体和衣原体引起的尿道炎、阴道炎和宫颈炎治疗是非常有效的。高锡霞6用罗红霉素治疗非淋菌性宫颈炎、尿道炎88例，总有效率达92. 1%。王绍钧7采用罗红霉素治疗尿道非淋菌性炎13

10、2例，痊愈率为80.88%，总有效率为91.18%，病原体清除率为82.35%，达到了良好的治疗效果，且不良反应均比较轻微，不影响治疗。周德惠8采用罗红霉素联合维生素C阴道片治疗解脲支原体所致阴道炎103例，结果治愈93例，显效7例，无效3例，总有效率为97.1%。停药1个月后进行随访，复发7例，复发率为8.5%。结果表明联合用药具有一定的优越性。二、治疗呼吸道感染作为大环内酯类药物的罗红霉素，通过抑制细菌蛋白质合成，且细胞膜的穿透性强，极易渗入肝、肺等组织，起抑菌作用。对呼吸道感染的主要致病菌-流感嗜血杆菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌，尤其对某些特殊的制病菌如肺炎衣原体、支原体、军团菌等有很好

11、的抗菌作用。因此临床上用于治疗敏感菌引起的呼吸道感染效果显著。段敏超9采用罗红霉索治疗支气管哮喘，疗效肯定。对患者给予常规吸氧、支气管扩张剂、糖皮质激素等治疗的基础上加用罗红霉索150mg，2次/d，疗程2周。研究结果表明，用罗红霉素配合糖皮质激素和支气管扩张剂的治疗方法能较快消除体征和症状，提高肺功能，并能有效地降低患者EOS水平，治疗前后对照有显著差异。因此，对经支气管扩张剂或糖皮质激素治疗效果不理想的哮喘患者，加用罗红霉素治疗有确切的效果。欧阳喜雷10应用罗红霉素联合雷米封治疗肺炎支原体感染，疗效总有效率为92.7%。研究表明由于两者联合应用的双重协同作用，更有利于促进炎症渗出的消散和吸

12、收，从而提高疗效。尤其对缓解重而持久的咳嗽，效果较单用罗红霉素理想。三、治疗五官感染吴炳光11采用小剂量罗红霉素治疗慢性鼻窦炎、鼻息肉患者，结果表明症状改善81.0%，鼻内窥镜检查治愈33例，好转20例，无效5例，总有效率91.4%。治疗前后平均STT分别为( 43.6±10.2) min和( 23.5±5.8)min。通过本组观察，长期小剂量罗红霉素治疗慢性鼻窦炎和鼻息肉，确实可改善慢性鼻窦炎的临床症状，使鼻息肉缩小，且服药剂量小、不良反应少。李健鹰12应用小剂量长时间口服罗红霉素治疗常年性变应性鼻炎患者60例，治疗12周后，总有效率为80% ，鼻分泌物嗜酸性粒细胞(EO

13、S)计数，血清细胞因子IL-5、IL-8浓度均较治疗前明显降低。研究表明小剂量长时间口服罗红霉素治疗常年性变应性鼻炎有效，可能通过减少机体细胞因子IL-5、IL-8，抑制EOS在鼻黏膜的聚集而发挥其抗炎、调节免疫的作用。刘瑞清13应用香菊片加罗红霉素治疗慢性副鼻窦炎280 例，获得较好疗效。治愈203例，显效31例，好转27例，无效19例，总有效率93.3%。四、治疗其他疾病近年来有研究结果表明，罗红霉素具有对胃酸稳定，发挥强大的幽门螺杆菌作用。王道福14采用罗红霉素、奥美拉唑合并羟氨苄青霉素三联疗法治疗有幽门螺杆菌感染的消化溃疡患者。罗红霉素、奥美拉唑合并羟氨苄青霉素的三联疗法幽门螺杆菌根除

14、率达到93. 5%。这表明以罗红霉素为主的三联疗法具有对除幽门螺杆菌很高的根除率。同时近年来发现罗红霉素是胃动素受体激动剂，在餐后诱导胃产生类似于消化期间移行性复合运动(MMC) 相，引起胃窦强大收缩，降低幽门压力，从而引起消化道反应，这种作用与罗红霉素化学结构密切相关。因此用该药治疗原发性胃轻瘫是让其激动胃动素受体，促进胃的排空，及时降低胃内压力，改善症状15。但随着罗红霉素的广泛应用，其不良反应发生情况呈现多样化，罗红霉素其不良反应以腹痛、腹泻、恶心、呕吐等胃肠道反应为主，偶见皮疹、皮肤瘙痒、头昏、头痛、肝功能异常、外周血细胞下降等16。1.2 罗红霉素分析方法研究进展目前检测罗红霉素含量

15、和有关物质的文献中描述的方法主要是HPLC法，还很少有文献报道有使用别的方法检测罗红霉素含量和有关物质的方法。罗红霉素收录在2005版中国药典中，在该版药典方法中，采用十八烷基硅烷键合硅胶固定相为填充剂，以0.067mol/L磷酸二氢铵溶液（用三乙胺调节pH到6.5）-乙腈（65：35）为流动相，检测波长为210nm，罗红霉素的保留时间不少于9min，其与前相邻的杂志峰的分离度不得小于1.0，与后相邻杂质峰的分离度应不少于2.0，理论塔板数按罗红霉素峰计算不得小于2500。中国药典应用该方法测定罗红霉素的含量和有关物质。在2010版药典沿用了2005版药典中的检测方法和检测项，不过增加了溶剂残

16、留的检测项目。在该检测项目下要检测甲醇、丙酮和N,N-二甲基甲酰胺的溶剂残留情况，限度符合指导原则规定的限度。同时罗红霉素在EP6.0中也有收录，也是采用HPLC法测定罗红霉素的含量和有关物质。在该版药典中采用150mm*4.6mm，5umC-18色谱柱，检测波长205nm；柱温150；采用梯度洗脱，流动相配置及洗脱程序如表1所示：表1 罗红霉素EP6.0色谱条件色谱条件流动相配置A相：59.7g/LNH4H2PO4用稀NaOH调节pH到4.3，量取上述buffer740mL，加入260mL乙腈，混匀即得流动相AB相：乙腈:水=70:30(V/V)色谱柱150mm*4.6mm，5um C-18

17、色谱柱流速1.1mL/min洗脱程序Time (min)Mobile phase A(percent V/V) Mobile phase B(percent V/V)0-5050-5151-8080-8181-1001001009090901001000010101000检测波长205nm柱温150EP采用上述方法测定罗红霉素的含量和有关物质，并对罗红霉素含量做了规定，同时对其有关物质中的已知杂质的限度做了规定。在该版药典中定义了A、B、C、D、E、F、G、H、K、J、I；杂质G的限度为1.0%，其余杂质的限度为0.5%，总杂为3.0%。该方法专属性较好。近年来，由于液质联用技术具有高灵敏度和

18、高选择性的特点，因此它已广泛应用于生物药物分析中，成为定量测定复杂基质中小分子化合物的重要技术。但是随着研究的深入发现，以电喷雾作为电离源的液质联用技术存在一个致命的弱点基质效应。基质效应主要是由共提物存在影响了待测物的离子化效率而引起的，这种效应直接会影响分析方法的准确度和精密度。在色谱定量分析中主要由两种校正方法：内标法和外标法。本研究在建立血浆中罗红霉素的测定方法时分别采用了上述两种定量校正方法，通过比较两种方法的校正曲线的线性、准确度和精密度等参数来确定一种可靠的定量方法。张丽芳17等建立一种准确可靠的测定血浆中罗红霉素的液质联用方法。通过比较两种定量方法（内标法和外标法） 的校正曲线

19、的线性、方法的准确度和精密度等参数最终确定选用内标法更能获得可靠的测定结果。陈鹭颖18等建立测定人血浆中罗红霉素浓度的反相高效液相色谱法。方法：采用Agilent C18分析柱（150mm*4.6mm，3.6um），以甲醇-0.02mol/l乙酸胺（68：32，用氨水调pH至7.4）为流动相，流速0.8mL/min，紫外检测波长210nm，柱温55，血浆样品碱化后用乙醚提取两次，以克拉霉素为内标。结果：罗红霉素的保留时间为6.2min，线性范围为0.25-33ug/mL（r=0.997），最低检测限为4ng，方法回收率为96.2%-100.1%之间，日内，日间RSD均小于4%。该法简便快速、准

20、确灵敏、重现性好，适用于罗红霉素血药浓度测定。1.3 罗红霉素的质量研究内容 药物的质量研究与质量标准的制订是药物研发的主要内容之一。在药物的研发过程中需对其质量进行系统、深入的研究，制订出科学、合理、可行的质量标准，并不断地修订和完善，以控制药物的质量，保证其在有效期内安全有效。 药物质量研究是制定质量标准的基础，为保证药品的安全有效，目前国际与国内均对药物的质量研究提出更高的要求，尤其是杂质限度要求更加严格。罗红霉素为具顺反异构体的化合物，顺式光学手性化合物为药用构型，由于各异构体可能表现出不同的活性，为了用药的安全有效，需对顺反异构体进行考察。原料药的质量研究应在确证化学结构或组份的基础

21、上进行。原料药的一般研究项目包括性状、鉴别、检查、含量测定和稳定性等几个方面。 稳定性主要包括：影响因素实验，加速实验，破坏性实验和长期实验。影响因素试验是在剧烈条件下进行的，目的是了解影响稳定性的因素及可能的降解途径和降解产物，为制剂工艺筛选、包装材料和容器的选择、贮存条件的确定等提供依据。同时为加速试验和长期试验应采用的温度和湿度等条件提供依据，还可为分析方法的选择提供依据。 影响因素试验一般包括高温、高湿、光照试验。一般将原料药供试品置适宜的容器中（如称量瓶或培养皿），摊成5mm厚的薄层，疏松原料药摊成10mm厚的薄层进行试验。对于口服固体制剂产品，一般采用除去内包装的最小制剂单位，分散

22、为单层置适宜的条件下进行。加速试验是在超常条件下进行的，目的是通过加快市售包装中药品的化学或物理变化速度来考察药品稳定性，对药品在运输、保存过程中可能会遇到的短暂的超常条件下的稳定性进行模拟考察，并初步预测样品在规定的贮存条件下的长期稳定性。 长期试验是在上市药品规定的贮存条件下进行，目的是考察药品在运输、保存、使用过程中的稳定性，能直接地反映药品稳定性特征，是确定有效期和贮存条件的最终依据。 残留溶剂作为已知的毒性杂质，在一定合理范围内使用，并需进行严格的控制，本文主要采用气相色谱法，一个色谱条件对多个溶剂进行测定，并参照中国药典和ICH相关的技术要求和限度进行研究。药品的有效期应综合加速试

23、验和长期试验的结果，进行适当的统计分析得到，最终有效期的确定一般以长期试验的结果来确定。通过以上数据的分析，可以最终确定药物的包装条件和储存条件，保证药物的质量。1.4 本论文的主要内容按现有药典的标准，采用高效液相色谱法和气相色谱法测定罗红霉素的有关物质、含量和溶剂残留；并测定了其炽灼残渣，水分和重金属等；在稳定性方面，进行原料药影响因素试验和加速试验，以考察罗红霉素原料药在温度，湿度，光线等的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供科学依据。2实验部分2.1 仪器Agilent 1200高效液相色谱仪（Agilent，美国），配置有以下组件：高压四元泵、在线真空脱气机

24、、自动进样器、二极管阵列检测器。由化学工作站软件控制各组件的运行。Agilent7890A气相色谱仪pH由Mettler Toledo DELTA 320 pH计测定。Mettler Toledo 电子分析天平。梅特勒公司卡尔费休水分滴定仪。W22-1型自动指示旋光仪。WiseTherm马弗炉永生400C恒温恒湿箱，永生光照稳定性实验箱，永生600C恒温恒湿箱。2.2 试剂乙腈：色谱纯；甲醇；磷酸二氢铵；盐酸；氢氧化钠；磷酸；罗红霉素标CRS准对照品（购于EP）。没有特别说明，所有的试剂均为分析纯，实验所用水为Miliq 超纯水。试验样品：罗红霉素三批：HCS09160-13-2-3，RXM0

25、0170，RXM00171，由宜昌长江药业提供。2.3 实验内容2.3.1罗红霉素的比旋度测定2.3.1.1仪器准备打开W22-1型自动指示旋光仪的电源开关，将电源开关置于""交流挡上，预热20min后，扳至直流"-"挡，准备测定。2.3.1.2供试液准备精密称取20mg样品于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解。在20±5温度(或各药品项下规定的温度)下，恒温，定容。2.3.1.3测定旋光度先做空白校正，用空白溶剂（无水乙醇）冲洗测定管数次，缓缓注入溶剂适量（注意勿使发生气泡），置于旋度计内读数，调零旋钮调零。同法测定供试液。表盘读数右旋者为右

26、旋以"+"表示，反之为左旋以"-"表示。重复读数三次，取平均值计算。测定后，再次用空白溶剂调零，以确定测定时零点有无变动，如有零点变动，应重新测定旋光度。测定过程中，须保证测定温度在20±5。测定结果：HCS09160-13-2-3，RXM00170，RXM00171三批样品的旋光度分别为-83.675°，-83.632°，-83.332°。均在药典规定的-82°-87°范围内。2.3.2罗红霉素引湿性的测定 药物的引湿性是指在一定温度和湿度条件下该物质吸收水分多少的特性。本法仅作为表述药品引湿

27、性的一种指征，适用于中国药典收载且满足该品种正文项下干燥失重或水分限度要求的药品。同时亦可作为药品选择适宜的包装和贮存条件的参考。具体测定方法如下：2.3.2.1 取一定量供试品置已精密称重（m1）的具塞玻璃称量瓶，精密称重（m2）。2.3.2.2 把称量瓶敞口置于25±1的恒温干燥器（下部放置氯化铵或硫酸铵饱和溶液），相对湿度为80±2%。2.3.2.3 放置24h。2.3.2.4 盖好称量瓶盖子，精密称重（m3）。计算：增重百分率=×100% (1)测定结果经公式（1）计算后，得到HCS09160-13-2-3，RXM00170，RXM00171三批样品的增重

28、率分别为0.225%，0.709%，0.668%，均在0.2%2%之间，因此定义罗红霉素略有引湿性。2.3.3罗红霉素的水分测定用卡尔费休水分滴定仪测定罗红霉素原料药的水分，其操作步骤如下所示2.3.3.1卡尔费休氏滴定液的标定取纯化水5-6mg，称重，用卡尔费休氏液滴定至终点，记录卡尔费休氏液消耗体积，计算F值，计算公式为：F= （2）表2 卡氏液水分标定123F均值(mg/mL)RSD纯化水称重W（mg）5.795.745.625.28560.46%消耗卡氏液体积V(mL)1.1001.0911.054F(mg/mL)5.26365.26125.33212.3.3.2样品测定 分别取三批样

29、品适量，称重，用卡尔费休氏液滴定至终点，记录卡氏液消耗体积，计算样品的水分，计算公式如下所示：水分%=×100 （3）表3 样品HCS09160-13-2-3卡尔费休水分滴定结果称重(mg)体积(mL)水分%1 92.10.3612.072%2141.50.5592.088%均值2.080% 所测得的罗红霉素原料药HCS09160-13-2-3的水分为2.080%，符合药典的要求含水量小于3.0%。表4 样品RXM00170卡尔费休水分滴定结果称重(mg)体积(mL)水分%1317.21.2992.165%2326.21.3272.150%均值2.158%所测得的罗红霉素原料药RXM

30、00170的水分为2.158%，符合药典的要求含水量小于3.0%。表5 样品RXM00171卡尔费休水分滴定结果称重(mg)体积(mL)水分%1251.11.0082.122%2244.00.9882.140%均值2.131%所测得的罗红霉素原料药RXM00171的水分为2.131%，符合药典的要求含水量小于3.0%。综上所得，此三批罗红霉素原料药的水分含量均符合药典要求。2.3.4罗红霉素的炽灼残渣和重金属检查为控制原料药中残渣和重金属含量，须对其进行炽灼残渣和重金属检查，现取三批样品中的一批样品按美国药典的要求进行检查，操作如下： 炽灼残渣：在600±50下，30min灼烧三个瓷

31、坩埚，于干燥器中放凉后精密称定至恒重后（记m1），精密称定1g罗红霉素样品(记m2)于坩埚中，。用少量硫酸（通常是1mL）润湿样品，然后用可行的尽可能低的温度缓缓加热直到样品完全炭化。放冷，然后除另有规定外，用少量硫酸（通常是1mL）润湿残渣，缓缓加热直到不再冒白烟，于600±50灼烧直到残渣完全灰化。将坩埚于干燥器中放凉后准确称量至恒重后(记m3)，计算残渣的百分含量，结果如下：m1 ：52.0585g 52.0586g ：50.4391g 50.4391g m2： 1.0220g ：1.0101gm3 ：52.0588g 52.0588 ：50.4394 50.4395计算公式：

32、炽灼残渣%=(×100 （4） 经公式（4）计算得平行两组结果的平均值为0.034%，符合药典要求的小于0.1%。重金属检查硫代乙酰胺法取上述残渣，加6N盐酸4mL，加盖，置蒸气浴上加热15min，去盖，在蒸气浴上慢慢蒸至干，用1滴盐酸润湿残渣，加热水10mL，蒸煮2min，加盖放冷后，滴加6N氢氧化铵直到溶液对石蕊试纸呈碱性，用水稀释至25mL，以短程pH试纸作为外指示剂，用1N醋酸调pH至3.0-4.0。必要时过滤，用10mL水洗涤坩埚和滤器，合并滤液和洗液，置50mL纳氏比色管中，用水稀释至40mL，摇匀。在上述两试管中分别加pH=3.5的醋酸盐缓冲液2mL后加硫代乙酰胺-甘油

33、试剂1.2mL，用水稀释至50mL。摇匀，放置2min，在白色背景下自上而下观察，供试品产生的颜色与标准品的相比，不得更深。标准品溶液的配置：向纳氏比色管中加入1.0mL标准铅溶液（10ug/mL），再加入pH=3.5的醋酸盐缓冲液2mL后加硫代乙酰胺-甘油试剂1.2mL，用水稀释至50mL即得。检查结果：供试品产生的颜色比标准品的颜色浅，符合要求。2.3.5 罗红霉素有关物质测定2.3.5.1 色谱条件仪器：HPLC色谱柱：Waters Symmetry C18 4.6×250mm，5m波长：205nm运行时间：90min进样体积：20µL流速：1.1mL/min柱温：2

34、02.3.5.2 流动相配置流动相A：用超纯水将磷酸二氢铵配置成59.7g/L的溶液，用稀氢氧化钠调节pH到4.3；利用上述BUFFER与乙腈混合，BUFFER：乙腈=74：26（V/V）即得流动相A。流动相B：乙腈:水=70:30（V/V）梯度洗脱，梯度程序如表6所示：表6 罗红霉素EP梯度洗脱程序Time (min)Mobile phase A(percent V/V) Mobile phase B (percent V/V)0-5050-5151-8080-8181-10010010090909010010000101010002.3.5.3 溶液配置稀释液配置：用超纯水将磷酸二氢铵配置

35、成59.7g/L的溶液，用稀氢氧化钠调节pH到5.3；利用上述BUFFER配置与乙腈混合，BUFFER：乙腈=70：30（V/V）；空白溶液：稀释液系统适应性溶液：准确称取罗红霉素工作标准品CRS 10mg置于5mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释到刻度，摇匀即得。供试品溶液：准确称取10mg供试品置于5mL容量瓶中，用稀释液溶解并稀释到刻度，摇匀即得。2.3.5.4 实验步骤取系统适用性溶液，进样20uL，记录色谱图，罗红霉素主峰与杂质G的分离度应不小于1.5。取空白溶液，进样一针，进样20uL，记录色谱图。取供试品溶液，进样20uL，记录色谱图，按照面积归一化法计算各杂质的含量。2.3.5.5 结果与讨论得到的系统适用性溶液的色谱图如图1所示，得到的系统适用性较好，罗红霉素与杂质G的分离