《有机磷检测》PPT课件

1、；酶抑制法 原理 酶抑制法是目前最常见的蔬菜中农药残留快速检测方法。有机磷和氨基甲酸酯农药能抑制昆虫神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，呵斥神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响昆虫正常的神经传导，使其中毒致死。有机磷和氨基甲酸酯类农药对酯酶的抑制率与其浓度称正相关。 酶样与样品进展反响，如样品中没有农药残留或残留量极少，酶的活性不被抑制，可以水解底物；反之，如农药的残留量比较高，酶的活性被抑制，底物就不被水解或水解速度较慢。 水解产物可以经过光度法或电化学的方法进展检测，经过抑制率判别出样品中能否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在及其含量的多少。；酶抑制法 酶的选择 酶抑制法中酶最为关键，酶的种类决议着

2、检测的灵敏度。常用的酶有两种：乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶。 底物和显色剂 酶抑制显色反响可以运用的底物和显色剂很多，大致可分为以下几种类型：乙酰胆碱-修百里酚蓝显色法 乙酸-萘酯-固蓝B盐显色法 乙酸羟基吲哚显色法乙酸靛酯显色法；酶抑制法 方法速测卡纸法 农药速测卡是55mm*22mm的形纸条，上面贴有直径15mm的白色、红色圆形药片各一片。 2,6-二氯靛酚乙酸酯在白色药片上胆碱酯酶的催化下能迅速发生水解反响，生成2,6-二氯靛酚蓝色和乙酸，反响一段时间后，翻开速测卡，假设白色药片变成蓝色，为阴性，假设不变色或显浅蓝色， 表示有有机磷、氨基甲酸酯类农药 的存在，其抑制了胆碱酯酶的活性 ，即抑

3、制了水解反响。胆碱酯酶乙酰胆碱类似物2,6-二氯靛酚乙酸酯；酶抑制法 方法速测卡纸法(实验步骤) 1、选取有代表性是蔬菜样品，擦去外表泥土，剪成1cm左右见方的碎片，取5g放入带盖瓶中，参与10ml缓冲液振摇50次，静置2min以上。 2、取一片测速卡，用白色药片蘸取提取液，放置10min以上进展预反响，有条件时在37C恒温箱中反响。 3、将速测卡对折，用手捏3min或恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反响。 4、测定一个缓冲液的空白对照卡。 结果断定 白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果高于检出限。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡一样，为阴性结果低于检出限。；酶抑制法 方法分析 该

4、方法抗干扰性强，操作简便，检测速度快，不需求配制试剂，携带方便，检测本钱低，可以实如今普通农户中广泛推行运用，是现场检测的最正确方法，但此方法存在以下一些严重的缺陷： 该方法只能定性不能定量。它只能显示样品中能否有农药，而无法确定其种类和大致含量。 该方法对大部分农药的检测灵敏度低，检出限远高于蔬菜中农药的国家规范，也就是说，该方法对农药残量超越限量规范而低于方法检出限的蔬菜无能为力，导致测定结果假阴性。 除了有机磷和氨基甲酸酯农药外，其它要素如重金属离子、反响温度、酶的来源及活性等问题也会影响测定结果。因此该方法容易遭到干扰而导致误检。 测定葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白等样品时，由于

5、其中含有对酶有影响的植物次生质，容易产生假阳性的检测结果。；气相色谱法 方法原理 色谱法也叫层析法，是一种高效能的物理 分别技术，将它用于分析化学并配适宜当的检 测手段，就成为了色谱分析法。 在色谱法中存在两相，一是固定不动的， 叫做固定相；另一相那么不断流过固定相外表。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与股定向发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和构造上的差别，与固定相之间产生的作用力大小，强弱不同，随着流动想的挪动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，各组分被固定相保管的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检验方法结合，实现混合物各组分的分别和检测

6、。；气相色谱法 方法优点高灵敏度：可检出10-10 克的物质，可作超纯气体、高分子单体的痕迹量杂质分析和空气中微量毒物的分析。高选择性：可有效地分别性质极为相近的各种同分异构体和各种同位素。高效能：可把组分复杂的样品分别成单组分。速度快：普通分析、只需几分钟即可完成，有利于指点和控制消费。 运用范围广：即可分析低含量的气、液体，亦可分析高含量的气、液体，可不受组分含量的限制。所需试样量少：普通气体样用几毫升，液体样用几微升或几十微升。；气相色谱法 样例分析从右边的图便可一对所丈量的结果进展比对，从而确定农药的组成及含量，只得留意的是a图的曲线不平坦，峰比较多，下面的那么相对比较平坦，峰比较少，

7、这是由于GC/FPDb系统相对于GC/NPDa系统，对干扰的限制比较多，相对比较准确。；气相色谱法；气相色谱法；分光光度法 丁酰胆碱酯酶法以碘化硫代丁酰胆碱为底物，在丁酰胆碱酯酶的作用下底物水解成碘化硫代和丁酸，碘化硫代胆碱和显色剂二硫代二硝基苯甲酸DTNB产生显色反响，反响液呈黄色，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。经过抑制率可以判别出样品中能否有高剂量有机磷农药的存在。 抑制率%=(A0-A) / A0100% 式中 A0对照溶液3min吸光度的变化值；A样品溶液3min吸光度的变化值。；分光光度法 实验步骤 样品处置选取有代表性的蔬菜样品，洗掉外表泥土，剪

8、成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，参与5mL缓冲溶液，振荡12min，倒出提取液，静置35min，待用。 对照溶液测试先于试管中参与2.5mL缓冲溶液，再参与0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后与于37C放置15min以上每批样品的控制时间应一致。参与0.1mL底物摇匀，此时检液开场显色反响，应立刻放入仪器比色池中，记录反响3min的吸光度变化A0 。 样品溶液测试先于试管中参与2.5mL样品提取液，其他操作与对照溶液测试一样，记录反响3min的吸光度变化A0 。；分光光度法 结果断定与检出限 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需求反复检验2次以上。 对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定详细农药种类和含量。农药名