沙眼衣原体核酸检测试剂盒

1、沙眼衣原体核酸检测试剂盒（pcr荧光探针法）【名称】通用名称：沙眼衣原体核酸检测（pcr-荧光探针法）英文名称：diagnostic for chlamydia trachomatis dna （pcr fluoresecence probing）【包装规格】20人份/盒【预期用途】本产品川于丿來道或女性阴道分泌物标本屮的沙眼衣原体核酸定性检测，适用于沙眼衣 原体（ct）感染的辅助诊断，不能用于沙眼衣原体感染的筛杏，仅限用于经卫生行政机构 认可的医疗单位的试验室。【检验原理】本产品用一対沙眼衣原体特界性引物和沙眼衣原体特界性荧光探针，配以pcr反应液、 耐热dna聚合酶（taq酶）、核昔酸单体

2、（dntps）等成分，用pcr体外扩增法检测沙眼衣 原体dna。【主要组成成份】组份部分数量主要组成成份dna提取液（500u 1/管）2管naoh、trishc1(ph8. 0)、tritonx100. np40、edta(p118.0)、chelex100pcr反应管/盖（耒贴标签）20管ct-pcr反应液、taq酶系和固体封盖剂阴性质控品（250 u 1/管）1管无菌生理氯化钠溶液临界阳性质控品（50» 1/管）1管灭活的ct培养液（25个ct颗粒/ u 1）强阳性质控品（50111/管）1管灭活的ct培养液（2500个ct颗粒5 1）【储存条件及有效期】于-20°c

3、，避免反复冻融；有效期6个月。【适用仪器】da620 荧光检测仪，abi prism 7000, abi geneamp 5700, rochelightcycler> mx3000p 荧光定量 pcr 仪等。【样本要求】男性：取尿道分泌物或细小棉拭子伸入尿道约24厘米，略捻动拭子取出分泌物（应略带 黏膜）。将分泌物或棉拭子置入无菌玻璃管，用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。女性：阴道-用无菌生理氯化钠溶液棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内， 停5秒钟示旋动棉拭了采集宫颈分泌物，将棉拭了置入无菌玻璃管，用无菌棉球将试 管塞紧后，密闭送检。尿道一用无菌生理氯化钠溶液棉球洗净尿道口

4、，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米, 略捻拭了取出分泌物，将棉拭了置入无菌玻璃管（应略带黏膜）。川无菌棉球将试管 塞紧后，密闭送检。标本可立即用于测试，也可保存于一20°c待测，保存期为6个月。标本运送应采用0°c冰壶。 并于48小时内送达。【检验方法】标木及对照品的处理标本试管中加入1ml无菌生理氯化钠溶液1ml打匀，12,000转/分离心5分钟，再重复 洗涤一次。沉淀直接加50 p 1dna提取液充分混匀，（提取液内含不溶于水的物质，取样时盂 用加样器充分混匀后吸取。如出现因吸头嘴部太细不能吸取或取样后堵塞吸头的现象，可先 用洁净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截。）沸水浴1

5、0分钟（误差不超过1分钟），转至4°c 静置68小时以保证充分裂解。12,000转/分离心2分钟，取上清液2 u1做pcr反应。另 取阴性质控品、阴性质控品各5（） n 1加等彊dna提取液充分混匀，沸水浴10分钟示同上处 理。2 pcr扩增2. 1da-620仪器荧光检测操作取单管单人份pcr反应管若干管，直接加入处理后样品（或阴性质控品、阳 性质控品）2叮，6,00（）转/分离心数秒。将反应管放入pcr仪，按下列条 件扩增：93°c预变性2分钟，然后按93°c 45秒一55°c 120秒，反应10个循环后置 33°c保温，迅速逐个将反应管放

6、入荧光检测仪，读取并记录读数a0。荧光激 发波长为487nm,检测波长为525nmo最后按93°c 45秒->55°c 120秒，共 做30个循环后置33°c保温。使用pe 9600, 9700, 2400仪器循环参数为93°c 30秒->55°c 60秒，其它仪器循环参数为93°c 45秒->55°c 120秒。pcr反应后荧光检测，待各pcr管充分冷却至33°c后，迅速逐个将反应管放 入荧光检测仪，读収并记录读数ato荧光激发波长为487nm,检测波长为 525nm。2.2abi prism

7、7000, abi geneamp 570（）操作将反应管放入pcr仪器的孔反应槽内，按对应顺序设置阴性质控品、阳性 质控品以及未知标本，并设置样品名称、标记荧光基团种类和循环条件：abi prism 7000, abi geneamp 5700的循环条件：93°c预变性2分钟，然后按 93°c 45秒一55°c 60秒，先做10个循坏，最后按93°c 30秒一55°c 45秒, 做30个循环。3 roche lightcycler 操作将处理后的样品（或阴性质控品、阳性质控品）2u1加入专用毛细管中，盖 上pcr反应盖&000转/分离

8、心2分钟，插入関形卡盘倒置10秒钟后放入仪 器中设置循环条件:93°c预变性2分钟,然后按93°c 5秒->57°c 45秒,做 40个循环.所有设置全部完成后保持稳健，最后运行程序。4 结果分析条件的设定da-620的条件设置：计算：ax=al-a0o将阴性质控品管的ax称为n,临界阳性质控品 的ax值称为p1,强阳性质控品的ax称为p2oabi prism 7000、abi geneamp 5700的条件设进：反应结束后自动保存检测数据文 件。根据分析后图像调节baseline的start值（24）, stop值（79）以及threshold 值,使阴性

9、质控品ct值为30,临界阳性质控品ct值为2224,强阳性质控品ct值为8 10,最后记录reporter窗口下记录仪器白动分析计算出的ct值。roche lightcycler的的条件设置：反应结朿后自动保存检测数据文件，调整荧光记数值 （fluorescence）为f1/f2，点击quantification读取结果。调节噪声容限,使阴性质控 品ct值为40,临界阳性质控品ct值为3234,强阳性质控品ct值,1820,最后记录仪 器自动分析计算出的ct值。【检验结果的解释】da-620仪器：在试验有效的前提下,样品ax值n=0. 6x （pl-n） 3ax2n+0.4x （pl-n） 则

10、属于试验灰度区，需重复试验一次，若重复试验结果ax值>n+o.4x（p1-n） 判为阴性。abi prism 7000, abi geneamp 5700, roche lightcycler 仪器：阴性结果判定：abi prism 7000, abi geneamp 5700仪器：如果c(值=30,则实验结果为阴 性。roche lightcycler仪器：如果ct值二40,则实验结果为阳性。abi prism 7000, abi geneamp 5700 仪器：如果 27wct 值30,则为试验灰度区，需重复试验一次，若重复试验结果ct值30判为阳性，否则判为阴性；roche lightcy