EZH2在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

1、EZH2在食管鳞癌组织中的表达及临床意义摘要：目的 研究EZH2在食管鳞癌组织中的表达情况，探讨其与食管鳞癌临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化EnVision 二步法检测48 例食管鳞癌组织中EZH2和MEL-18 的表达情况。结果 食管鳞癌组织及相应癌旁组织中EZH2蛋白阳性表达率分别为79.2%（38/48）和16.6%（8/48），MEL-18蛋白阳性表达率分别为18.7%（9/48）和83.3%（40/48），两组间相比差异均具有统计学意义(P <0.05)，食管鳞癌组织中EZH2蛋白的表达与患者的性别、年龄及肿瘤大小无关（P >0.05），而与肿瘤的淋巴结转移及分化程

2、度有关（P <0.05），EZH2和MEL-18蛋白的表达呈显著负关联（R=-0.674，P <0.05）。结论 从蛋白水平证明EZH2的异常表达可促进食管癌的发生发展，并可能为食管癌的早期诊断提供新的手段。关键词：食管癌；EZH2；免疫组化染色Expression of EZH2 in esophageal squamous cell carcinoma tissue and its clinical significanceAbstractAim： To investigate the expressions of EZH2 proteins in esophageal squ

3、amous cell carcinoma(ESCC) tissue, and analyze the clinicopathological characteristics of both proteins in ESCC Methods The expressions of EZH2 and MEL-18 proteins were detected by immunohistochemistry in 48 ESCC tissue and 48 normal esophageal mucosa specimens. Results The positive expression rate

4、of EZH2 in ESCC and normal esophageal mucosa tissue was79.2 and16.6，and that of MEL-18 was 18.7 and 83.3, and there were significant differences(P<0.05). The expressions of EZH2 proteins were associated with tumor lymph node metastasis and differentiation of esophageal carcinoma(P<0.05), but n

5、ot with age, sex, and tumor size .A negative association was noted between the expression of EZH2 and that of MEL-18 in ESCC（R=-0.674，P <0.05） Conclusion：The abnormal expressions of EZH2 may play an important role in the carcinogenesis and development of ESCC, which provides some new ways on earl

6、y diagnosis for ESCCKey words: esophageal squamous cell carcinoma; EZH2;immunohistochemistry 食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，是严重危害人类生命和健康的疾病，发病率近年来有上升的趋势1。食管癌的病因和发病机制目前仍不明确，包括一些癌基因、抑癌基因、细胞凋亡相关基因的异常表达等。EZH2和MEL-18基因属于多梳基因家族(polycomb of genes，PcG)，PcG在造血干细胞、神经干细胞及肿瘤干细胞的增殖、分化和肿瘤的发生中都发挥着关键的作用2。本研究采用免疫组织化学法检测EZH2和MEL-

7、18蛋白在48 例食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达，探讨两者在食管鳞癌发生发展中的作用。1 材料和方法1.1 材料本研究病理资料取自我院2008-2010 年间住院手术的食管鳞癌患者，每例手术标本分别在食管鳞癌组织及对应癌旁5cm 组织取材，全部病例术前均未做化疗、放疗；其中男30 例，女18例，年龄40-70( 平均65.3) 岁，高、中、低分化分别为12、23、13例；有无区域淋巴结转移分别为36、12例。所有病例均经病理确诊。SP 试剂盒及DAB显色剂由福州迈新公司提供，兔抗人EZH2多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，兔抗人MEL-18单抗购自Santa Cruz Biotech

8、nology公司。1.2 免疫组织化学染色标本经4% 中性甲醛固定，石蜡包埋，切片厚34m，免疫组织化学采用EnVision 二步法。抗原修复采用微波炉热修复，其余染色步骤按试剂盒说明进行，DAB显色，苏木精复染。阳性对照用已知阳性片，阴性对照用PBS代替一抗。结果判断：染色阳性信号呈棕黄色颗料，均定位于细胞核，判定方法为在高倍镜下观察至少10个有代表性的高倍视野，肿瘤细胞中有10%以上阳性细胞被判定为表达阳性。1.3 统计学处理实验数据采用SPSS13.0 统计分析软件分析，食管鳞癌临床病理参数与EZH2和MEL-18蛋白表达率之间的比较采用 2 检验，采用列联系数分析食管癌组织中两种蛋白表

9、达的关系，P<0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1食管鳞癌及癌旁正常黏膜组织中EZH2和MEL-18 蛋白的表达免疫组织化学结果显示，在食管鳞癌中EZH2蛋白呈高表达，癌旁组织中无表达或低表达，MEL-18 蛋白在食管鳞癌中无表达或低表达，癌旁组织中高表达( 见图1)。食管鳞癌组织及相应癌旁组织中EZH2蛋白阳性表达率分别为79.2%（38/48）和16.6%（8/48），MEL-18蛋白阳性表达率分别为18.7%（9/48）和83.3%（40/48），两组间相比差异均具有统计学意义(P<0.05)， 图1：A:EZH2蛋白在食管鳞癌组织中的免疫组化染色（´200

10、） B:MEL-18蛋白在食管鳞癌组织中的免疫组化染色（´200）Fig 1 Immunohistochemixal staining showing EZH2 and MEL-18 protein expression in ESCC tissues(´200) 2.2 EZH2 蛋白表达率与食管鳞癌的临床病理特征关系EZH2蛋白在食管鳞癌组织的表达与患者的性别、年龄及肿瘤大小无关（P >0.05），而与肿瘤的淋巴结转移及分化程度有关（P <0.05），见表1。表1食管鳞癌组织中EZH2蛋白的表达与临床病理特征的关系 Tab 1 Relation betwee

11、n EZH1 protein expression and clinical characteristics of ESCC(n,%)Clinical pathologic characteristicsnExpression of EZH2 proteinPpositive negative positive rate(%) SexMale30246800.854Female1814477.8Age（year）<6035287800.816601310376.9Size<5cm3830878.90.9425cm108280Lymph node metastasisNo126750

12、0.002Yes3632488.8Degree of differentiationHigh125741.6Middle2320386.90.001Low131301002.3 食管癌中EZH2和MEL-18 蛋白表达的关系48例食管癌组织中EZH2 蛋白阳性表达率为79.2%，MEL-18 蛋白在48例食管癌中阳性表达率为18.7%，EZH2蛋白表达与MEL-18蛋白的表达呈显著负关联（R=-0.674，P <0.05）3. 讨论EZH2和MEL-18基因都属于多梳基因家族中的一员，EZH2基因定位于人类染色体7q35，参与转录抑制，调控细胞的生长增殖和细胞周期。大量研究表明其高表达可

13、促进癌细胞增殖，与恶性肿瘤的发生密切相关，曹相玫等3研究发现EZH2在原发性肝癌组织中的表达率显著高于正常肝组织，随着原发性肝癌分化程度的降低，EZH2阳性表达的强度和范围明显增强。也有研究发现EZH2在胃癌中的表达水平高于正常组织，并认EZH2基因可以促进胃癌的发生发展4。国外的研究则表明EZH2高表达的结直肠癌患者预后比低表达患者差5。MEL-18基因定位于染色质17q12，与其他多梳基因家族成员一样，MEL-18也参与了胚胎发育，干细胞和肿瘤细胞的增殖、自我更新和分化过程。目前认为MEL-18是一种新的抑癌基因，可能通过抑制cyclin D2活性，阻滞细胞由G，向S期转化，导致DNA合成

14、受阻，进而抑制肿瘤的发生6。田永等7研究发现，MEL-18 在大肠癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常大肠黏膜组织，其阳性表达率随肿瘤浸润程度加深、淋巴结转移及分化程度的降低而下降，甚至出现表达缺失，提示了MEL-18可能在大肠癌的发生发展中发挥了抑制作用，也有研究提示MEL-18阴性表达的前列腺癌患者生存期更差8。我们的研究发现48 例食管鳞癌组织中有38例EZH2阳性表达，阳性率为79.2% ；而癌旁组织中仅8 例表达，阳性率为16.6%，提示了在食管癌中存在EZH2基因表达的增高，从蛋白水平证明了EZH2基因与食管癌的发生有关，同时我们发现癌旁组织中MEL-18有40例表达，阳性率为83.3

15、%，而48 例食管鳞癌组织中仅有9例MEL-18阳性表达，阳性率为18.7% ，这也进一步提示MEL-18基因具备抑癌基因功能。我们的研究结果还提示EZH2阳性表达率与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤大小无关，与组织分化程度有关，组织分化程度越低，EZH2阳性表达率越高，说明检测其蛋白表达对判断食管癌的恶性分化程度有一定意义。同时伴有淋巴结转移的患者，阳性表达率也增高，这表明EZH2蛋白的高表达促进食管癌淋巴结转移，预示着较差的预后，这与王浩然等9研究结果也是一致的。本研究还发现EZH2 与MEL-18蛋白在食管癌组织中的表达呈负关联，推测EZH2 可能通过某种调控机制或信号传导通路抑制MEL-1

16、8的表达，从而参与食管癌的进展。总之，本实验表明EZH2可能成为提示食管癌分化程度和转移能力的分子标志物，对食管癌的早期诊断及治疗靶点的选择具有一定参考价值。 参考文献1) 明帮春，骆志国，胡江等，放疗联合紫杉醇奈达铂同期化疗治疗食管癌的临床分析，现代肿瘤医学，2013,21（3）：559-5622) 李辉，刘媛，龚燕华. 肿瘤干细胞与多梳家族，武警医学院学报，2010,19(9):746-7523) 曹相玫，王映梅，谷雨等，EZH2在原发性肝癌中的表达及与分化和增殖的关系 现代肿瘤医学，2013，21（3）：453-4564) He LJ, Cai MY, Xu GL, et al. Pro

17、gnostic significance of overexpression of EZH2 and H3k27me3 proteins in gastric cancer. AsianPac J Cancer Prev, 2012, 13(7):3173-3178.5) Mimofi K，Ogawa K，Okamoto M，et a1Clinical significance of enhancer of zeste homolog 2 expression in colorectal cancer cases Eur J Surg Oncol2005，31：376-3806) Chun T，Rho S B，Byun H J，et a1The polycomb groupgene product Mel-18 interacts with cyclin D2 and modulates its activity. FEBS Lett，2005，579：527552807) 田永，邹艳芳，徐峰,大肠癌组织中Min