活禽市场鸡源大肠杆菌的分离与鉴定

1、活禽市场鸡大肠杆菌的分离与鉴定【摘要】：p ：从山东聊城地区活禽市场鸡粪便中通过无菌操作分离、纯化得到纯种菌种34株，并进行革兰氏染色、镜检、生化鉴定试验。结果表明，34株菌均符合大肠杆菌（Escherichia coli）的培养特性。【关键词】：p ：鸡；大肠杆菌（Escherichia coli）；分离纯化；生化鉴定中图分类号：S858.312.6 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（20_）02-0428-03DOI：10.14088/jki.issn0439-8114.20_.02.041鸡大肠杆菌病是由大肠杆菌（Escherichia coli）中的某些致病性菌株引起的鸡感

2、染性疾病的总称，其中包括大肠杆菌性腹膜炎、输卵管炎、脐炎、滑膜炎、气囊炎、肉芽肿、眼炎等多种疾病，也有可能在心脏、胰脏、肠道出现黄白色肉芽肿，主要表现为败血型、气囊炎、心包炎、肝周炎和肠类型1，是养鸡生产中常见的一种传染病，该病可增加其他病原体感染的机会，对养殖业及食品安全有较大影响。为了解大肠杆菌的特性，并为防治该病提供科学依据，本试验从鸡粪便中通过无菌操作获取大肠杆菌，经过菌种的分离、纯化得到纯种菌种，并进行了革兰氏染色、镜检、生化鉴定试验。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样本 粪便无菌采于山东省聊城地区活禽市场的健康鸡，置于冰箱-4 保存，备用。1.1.2 菌种来 CVCC1551

3、、CVCC1553购于中国兽医药品监察所。1.1.3 试剂 伊红美蓝培养基、麦康凯琼脂培养基、营养肉汤培养基、普通营养琼脂、糖发酵培养基、三糖铁琼脂、生化试验鉴定管、各种生物化学试剂均购自青岛海博生物技术有限公司。1.2 方法1.2.1 细菌的分离培养与纯化 无菌条件下将样本分别接种于伊红美蓝培养基置37 恒温箱培养24 h后，挑取紫黑色带金属光泽的菌落，连续两次接种于麦康凯琼脂平板，继续培养24 h。观察麦康凯琼脂平板上的菌落，选红色菌落进行抹片、革兰氏染色镜检2-5。1.2.2 生化试验 取细菌纯培养物分别接种在吲哚试验管、M-R试验管、V-P试验管、枸橼酸盐试验管中，并做三糖铁试验、尿素

4、酶试验、触酶试验、半固体营养琼脂穿刺试验、淀粉试验，其中触酶试验立刻观察，其他试验分别置37 温箱摇床培养。吲哚试验、M-R试验、尿素酶试验、半固体营养琼脂穿刺试验、淀粉试验于24 h观察，V-P试验于48 h滴加试剂观察，枸橼酸盐试验于96 h观察试验结果6-8。1.2.3 糖发酵试验 取细菌纯培养物接种6种糖类微量发酵管（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘(原文来自：wWW.bDFqy. 千叶 帆文摘:活禽市场鸡大肠杆菌的分离与鉴定)露醇、蔗糖、木糖发酵管），置37 培养2448 h后进行观察。2 结果与分析p 2.1 细菌培养特征细菌培养结果可见，在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色带金属光泽的菌落；在麦康

5、凯琼脂上形成圆形、大小均一、直径约为2.53.0 mm、表面光滑湿润、中央轻微隆起、边缘整齐的红色菌落；在营养琼脂上形成中等大小、圆形微凸起、表面光滑湿润、边缘整齐、半透明灰白色菌落，直径约23 mm；在肉汤中培养1824 h呈现混浊，管底有灰白色黏性沉淀，轻摇试管时沉淀物呈絮状慢慢升起，部分菌株可在肉汤表面形成菌环；在SS琼脂上生长较差，呈红色。2.2 细菌革兰氏染色结果分离的菌种培养物经涂片、革兰氏染色镜检观察，均可见两端钝圆、多数散在排列、不运动、偶尔有23个连在一起的革兰氏阴性短杆菌。2.3 生化鉴定结果对分离到的34株菌分别进行了15项生化试验，结果菌株对葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、

6、甘露醇、三糖铁试验均产酸产气，三糖铁试验均未产生硫化氢；M-P试验、吲哚试验、触酶试验、动力试验呈阳性；枸橼酸盐试验、尿酶试验、V-P试验、淀粉试验呈阴性；不同菌株的蔗糖发酵试验结果有差异，其余14项生化试验结果与CVCC1551、CVCC1553一致。结果符合大肠杆菌的生化特征（表1）。3 讨论从健康鸡粪便中分离到34株大肠杆菌，经过分离培养、生化鉴定结果显示，在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色带金属光泽的菌落；麦康凯琼脂上为表面光滑湿润、中央轻微隆起、边缘整齐菌落；在SS琼脂上呈红色，出现了弱利用现象；生化试验中，34株菌均对葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、甘露醇、三糖铁试验产酸产气，没有硫化氢产生；

7、M-P试验、吲哚试验、触酶试验、动力试验呈阳性；枸橼酸盐试验、尿酶试验、V-P试验、淀粉试验呈阴性；只有不同菌株的蔗糖试验结果稍有不同，其原因主要与大肠杆菌的菌型有关，菌型不同利用蔗糖的能力也不同。周伦江等9对分离的52株细菌中蔗糖发酵试验阳性率为59.6%，即31株菌利用蔗糖。陈晓浪等10在鸡大肠杆菌毒力因子的流行病学及药物敏感性分析p 试验中，在硫化氢试验中15株菌有2株产生硫化氢；蔗糖试验中有3株产酸产气，12株既不产酸也不产气。王选年等1的试验结果表明，分离的10株菌在蔗糖试验中有7株产酸产气，3株既不产酸也不产气；在甘露醇试验中9株产酸产气，1株既不产酸也不产气。党岩等11在大肠杆菌

8、的分离鉴定试验中，分离的69株致病性大肠杆菌中35株在蔗糖试验中产酸。戴建君等12在不同来鸡大肠杆菌致病性比较研究试验中，分离的90株菌的蔗糖试验结果中阳性率为10%。姜秀鹏等13在鸡地方性病原大肠杆菌的分离与鉴定试验中，对16株大肠杆菌进行生化鉴定试验，其中甘露醇试验中2株只产酸未产气，14株产酸产气；蔗糖试验中5株只产酸未产气，2株既不产酸也不产气，9株产酸产气。王宝杰等14在潍坊地区肉鸡致病性大肠杆菌的血清型鉴定试验中，乳糖试验阳性率为92%。秦四海15在临沂市鸡致病性大肠杆菌的优势血清型监测及其致病性试验中，乳糖试验阳性率为92.5%；三糖铁试验阳性率为97.2%。刘国华等16在鸡致病性大肠杆菌的分离与血清型鉴定试验中，乳糖和甘露醇试验阳性率均为90%。研究表明，大肠杆菌利用蔗糖、甘露醇、乳糖