三聚氰胺检测方法

1、三聚氰胺检测方法mars-hplc 测定不同基质中的三聚氰胺摘要:mars(multi-adsorption reverse spe) 样品前处理方法是一种快速、简便、安全、成本低廉的样品前处理分析方法，将该方法用于奶制品、鸡蛋和鱼肉等不同样本中的三聚氰胺的提取，主要步骤是使用0.1m 的盐酸、 6% 的磺基水杨酸和混合型阴离子交换树脂 (cleanert pax)在离心管中同时进行蛋白沉淀和基质分散固相萃取，取离心上清液过滤后用于hplc 测定。本文对 mars 方法用于不同样品前处理的稳定性和可靠性进行了分析和评价，结果表明mars-hplc 方法用于不同样品中三聚氰胺的检测具有简便、快捷

2、、准确的优点，适合大批量样品的测定。关键词 :三聚氰胺 ;mars; 混合型阴离子交换树脂 ; 强阳离子交换色谱柱 1 实验部分1.1 仪器与试剂仪器:l6-1 系列高效液相色谱仪 (北京普析通用公司 ) ，三聚氰胺检测样品前处理方法包 :( 包括盐酸 0.1 mol/l ，6% 磺基水杨酸，混合型阴离子交换填料cleanert pax ，(北京艾杰尔科技有限公司);venusil scx-m ，5m,4.6250mm 强阳离子交换色谱柱 (科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司)及保护柱 ; 针式过滤器 (agela clarify，0.22/0.45 m ，尼龙 ); 三

3、聚氰胺标准品(99%)，均质器 (t25 basic ，ika) 。试剂: 所用乙腈为色谱纯 ; 磷酸二氢钾为分析纯 ; 水为超纯水。1.2 色谱条件色谱柱 :venusil scx-m 色谱柱， 4.6250mm,5 m,300 ?;( 科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司); 流动相 : 磷酸二氢钾 (0.050mol/l):乙腈=70:30; 流速:1.5ml/min; 柱温: 室温; 波长:240 nm; 实验中若非特别注明，进样量均为 20l。1.3 三聚氰胺标准曲线工作液的配制1.3.1 三聚氰胺标准贮备溶液 :1.00 103 mg/l。称取 100 mg 三

4、聚氰胺标准物质 ( 准确至 0.1 mg) ，用水完全溶解后，用水定容至 100 ml，混匀。1.3.2 标准工作溶液1.3.2.1 标准溶液 a:2.00 102 mg/l。准确移取 20.0 ml 三聚氰胺标准贮备溶液 (1.3.1)，置于 100 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。1.3.2.2 标准溶液 b:0.50 mg/l 。准确移取 0.25 ml 标准溶液 a(1.3.2.1)，置于 100 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。1.3.2.3 标准工作液的配制按表 1 分别移取不同体积的标准溶液a(1.3.2.1)于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀， 0.45m

5、滤膜过滤，待测。按表2 分别移取不同体积的标准溶液b(1.3.2.2)于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45m滤膜过滤，待测。表 1 标准工作液配制 ( 高浓度 ) 标准溶液 a体积(ml) 0.1 0.25 1.00 1.25 5.00 12.5 定容体积 (ml) 100 100 100 50 50 50 标准工作液浓度 (mg/ l) 0.20 0.50 2.00 5.00 20.0 50.0 表 2 标准工作液配制 ( 低浓度 ) 标准溶液 b体积(ml) 1.00 2.00 4.00 20.0 40.0 定容体积 (ml) 100 100 100 100 100 标准工作液浓度

6、(mg/l) 0.005 0.01 0.02 0.10 0.20 1.4 试样的制备1.4.1 牛奶样品取 15.0g 牛奶置于 25ml容量瓶中，加入 0.1mol/l 盐酸 10ml ，加入 6% 磺基水杨酸 3.0 ml， 混合型阴离子交换树脂1.0g(cleanert pax)，用 0.1mol/l 盐酸定容至 25ml ，涡旋振荡 2min，8000 r/min离心 5min，取上清液过 0.45m的滤膜后进液相分析。1.4.3 鸡蛋样品取 10.0g 混合均匀的鸡蛋置于25ml容量瓶中，加入 0.1mol/l 盐酸 10ml ，均质后全部转入 25ml容量瓶，加入 6% 磺基水杨酸

7、 3.0ml，混合型阴离子交换树脂1.0g(cleanert pax)，用 0.1mol/l 盐酸定容至 25ml ，涡旋振荡 2min，8000 r/min 离心 5min，取上清液过 0.45m的滤膜后进液相分析。 1.4.4 鱼肉样品取 5.0g 剁碎的鱼脊背肉，加入0.1mol/l 盐酸 10ml ，均质后全部转入25ml容量瓶，加入 6% 磺基水杨酸 3.0 ml，混合型阴离子交换树脂1.0g(cleanert pax)，用 0.1mol/l 盐酸定容至 25ml ，涡旋振荡 2min，8000 r/min离心 5min，取上清液过 0.45m的滤膜后进液相分析。2、结果与讨论2.1

8、 线性范围低浓度曲线取 0.005mg/l, 0.01mg/l, 0.02mg/l, 0.1mg/l, 0.2mg/l 5 个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图: 图 1 低浓度标样线性高浓度曲线取 0.2mg/l, 0.5mg/l, 2mg/l, 5mg/l, 20mg/l, 50mg/l 6 个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图: 图 2 高浓度标样线性结果表明 : 本方法在 0.005mg/l 50.0mg/l 和范围内，三聚氰胺峰面积和浓度有良好的线性关系2.2 重复性取浓度为 5mg/l 的标准品溶液，分别进样20l，进样 6 次，计算保留时间及峰面积的 rsd( 相对标准偏

9、差 )。结果列于表 3 中表 3 保留时间和峰面积的重现性( 精密度 ) rs 平均值 1# 2# 3# 4# 5# 6# d% 保留0.2 时间 6.817 6.833 6.817 6.817 6.858 6.808 6.825 6 min 峰面积 571357445698572157455755572990.3 60 92 13 87 25 93 5 9 au?s 图 3 重复性谱图从表 3 和图 3 看出，该方法结果重复性良好。 2.3 检出限以曲线最低点 0.005mg/l 的谱图 (见图 4) 为准，以噪声对应峰高估算检出限为 0.0032mg/l (s/n=3) 。图 4 检出限谱

10、图2.4 实际样品测试2.4.1 牛奶样品2.4.1.1空白牛奶样品测试谱图如图5: 图 5 空白牛奶样品谱图2.4.1.2 牛奶加标回收率分别在空白牛奶样品中加入相当于1.0mg/kg，5.0mg/ kg 和 10.0mg/ kg 的三聚氰胺标准品，测试谱图如图6 所示。图 6 牛奶中添加不同浓度的三聚氰胺谱图根据此谱图测得三聚氰胺的加标回收率如表4 所示 表 4 牛奶中三聚氰胺加标回收率试验结果样品名称加标量 (mg/kg) 测得量 (mg/ kg) 回收率 (%) 牛奶空白 0.00 - - 1# 1.00 1.05 105.0% 2# 5.00 5.18 103.6% 3# 10.00

11、 9.04 90.4% 结果表明， mars 前处理方法对牛奶中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好 ;hplc分析中三聚氰胺和杂质分离良好。2.4.2 鱼肉样品2.4.2.1 空白鱼肉样品测试谱图如图7: 图 7 空白鱼肉样品谱图2.4.2.2 鱼肉样品加标回收率分别在空白鱼肉样品中加入相当于1.0mg/kg 、5.0mg/kg 和 10.0mg/kg 的三聚氰胺标准品，测试谱图如图8 和图 9 所示。图 8 鱼肉中添加三聚氰胺1.0 mg/kg 谱图图 9 鱼肉中添加三聚氰胺10.0 mg/kg 谱图根据此谱图测得鱼肉中三聚氰胺加标回收率如表4 所示表 5 鱼肉中三聚氰胺样品加标回

12、收率试验结果样品名称 加标量 (mg/kg) 测得量(mg/kg) 回收率 (%) 鱼肉空白 0.00 - - 1# 1 0.98 98.0% 3# 5 5.81 116.2% 5# 10 9.67 96.7% 结果表明， mars 前处理方法对鱼肉中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好 ;hplc分析中三聚氰胺和杂质分离良好。2.4.3 鸡蛋2.4.3.1空白鸡蛋样品测试谱图如图10 所示: 图 10 空白鸡蛋样品谱图2.4.1.2 鸡蛋加标回收率分别在样品中加入相当于1.0mg/kg，5.0mg/ kg 和 10.0mg/ kg 的三聚氰胺标准品，测试谱图如图11 所示。图 11

13、鸡蛋中添加三聚氰胺5.0 mg/kg 鸡蛋中三聚氰胺的加标回收率如表6 所示表 6 鸡蛋中三聚氰胺加标回收率试验结果样品名称加标量 (mg/kg) 测得量 (mg/kg) 回收率 (%) 鸡蛋空白 0.00 - - 1# 1 0.89 89.0% 3# 5 5.55 111.0% 5# 10 10.48 104.8% 结果表明， mars 前处理方法对鸡蛋中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好 ;hplc分析中三聚氰胺和杂质分离良好。3 结论上述实验结果表明，采用mars 样品前处理方法，以混合型阴离子交换填料cleanert pax 作为萃取介质，可以快速准确的处理牛奶、鱼肉和鸡蛋样

14、本，同时使用阳离子交换色谱柱进行hplc 分析，整个分析方法应用于不同样品中三聚氰胺的检测，具有检测限低，精密度高，线性范围宽和回收率高等优点，完全可以满足三聚氰胺的快速检测要求。三聚氰胺标准贮备溶液 :1.00 10 mg/l。 称取 100mg 三聚氰胺标准物质 ( 准确至 0.1mg)，用水完全溶解后， 100 ml 容量瓶中定容至刻度， 混匀， 4?条件下避光保存，有效期为1 个月。 标准工作溶液 : 使用时配制。标准溶液 a:2.00 10 mg/l。 准确移取 20.0 ml 三聚氰胺标准贮备溶液 (4.5) ，置于 100ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 标准溶液 b:0.50mg/l 。 准确移取 0.25ml 标准溶液a(4.6.1) ，置于 100ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。按表 1 分别移取不同体积的标准溶液 a(4.6.1) 于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。按表2 分别移取不同体积的标准溶液b(4.6.2) 于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。磷酸盐缓冲液:0.05 mol/l。 称取 6.8g