第十章、维生素测定

1、LOGO食食 品品 分分 析与析与检验检验LOGO维生素的测定维生素的测定LOGO一、概述一、概述 维生素是维持人体正常生命活动所必维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天然有机化合物。其种类很多，目需的一类天然有机化合物。其种类很多，目前已确认的有前已确认的有3030余种，其中被认为对维持人余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有体健康和促进发育至关重要的有2020余种。这余种。这些维生素结构复杂，理化性质及生理功能各些维生素结构复杂，理化性质及生理功能各异，有的属于醇类，有的属于胺类，有的属异，有的属于醇类，有的属于胺类，有的属于酯类，还有的属于酚或醌类化台物。于酯类，还有的

2、属于酚或醌类化台物。LOGO维生素都具有以下共同特点：维生素都具有以下共同特点： 这些化合物或其前体化合物都在天然食物这些化合物或其前体化合物都在天然食物中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程，需要量极小；它们一般在成份调节代谢过程，需要量极小；它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。生素都会导致相应的疾病

3、。LOGO 我们在评价食品的营养价值，开发利我们在评价食品的营养价值，开发利用高含量维生素的食品资源，指导人们合理用高含量维生素的食品资源，指导人们合理调整膳食结构，指导制定加工工艺或贮存条调整膳食结构，指导制定加工工艺或贮存条件，最大限量地保留各种维生素，还要控制件，最大限量地保留各种维生素，还要控制强化食品中加入量，防中毒，都离不开分析强化食品中加入量，防中毒，都离不开分析检测工作。检测工作。维生素分类：脂溶性（维生素分类：脂溶性（A A、D D、E E、K K） 水溶性（水溶性（B B族、族、C C）LOGOLOGO二、脂溶性二、脂溶性V V的测定的测定 V VA A、V VD D、V

4、VE E、V VK K与类脂物一起存于食物中，摄食时与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收，可在体内积贮。可吸收，可在体内积贮。 脂溶性维生素具有以下理化性质：脂溶性维生素具有以下理化性质： 1 1. .溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。 2 2. .耐酸碱性：维生素耐酸碱性：维生素A A、D D对酸不稳定，对酸不稳定， 对对碱稳定，维生素碱稳定，维生素E E对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。或惰性气体保护下，

5、也能经受碱的煮沸。LOGO耐热性、耐氧化性耐热性、耐氧化性 耐热性耐热性 氧化性氧化性V VA A 好，能经受煮沸好，能经受煮沸 易被氧化（光、热促进其氧化）易被氧化（光、热促进其氧化）V VD D 好，能经受煮沸好，能经受煮沸 不易被氧化不易被氧化V VE E 好，能经受煮沸好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被氧化在空气中能慢慢被氧化 （光、热、碱促进其氧化）（光、热、碱促进其氧化）V VK K 好，能经受煮沸好，能经受煮沸 易被光、氧化剂及醇破坏易被光、氧化剂及醇破坏LOGO根据上述性质。测定脂溶性维生素时，根据上述性质。测定脂溶性维生素时，通常：通常： 皂化样品皂化样品 水洗去除类脂物水洗去

6、除类脂物 有机溶剂提有机溶剂提取脂溶性维生素取脂溶性维生素( (不皂化物不皂化物) ) 浓缩浓缩 测定。测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂加入抗氧化剂( (如焦性没食子酸、维生素如焦性没食子酸、维生素C C等等) )。 对于对于A A、D D、E E共存的样品，或杂质含量高的样品，共存的样品，或杂质含量高的样品，在皂化提取后，还需进行层析分离。在皂化提取后，还需进行层析分离。LOGO 维生素维生素A A存在于动物性脂肪中，主要来存在于动物性脂肪中，主要来源于肝脏、鱼肝油、蛋类、乳类等动物性食品源于肝脏、鱼肝油、蛋类、乳类等动

7、物性食品中。植物性食品中不含中。植物性食品中不含V VA A，但在深色果蔬中含但在深色果蔬中含有胡萝卜素，它在人体内可转变为有胡萝卜素，它在人体内可转变为V VA A，故称为故称为V VA A原。原。 ( (一一) )维生素维生素A A的测定的测定LOGOCH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :两个异戊二烯结构两个异戊二烯结构LOGOLOGO比色法测定比色法测定V VA A的含量的含量（GB/T 5009.822003GB/T 5009.822003中第二法）中第二法）（一）（一） 原理原理 在氯仿溶液中，在

8、氯仿溶液中，V VA A与三氯化锑可生成蓝色与三氯化锑可生成蓝色可溶性络合物，在可溶性络合物，在 620 620 nm nm 波长处有最大吸收峰，波长处有最大吸收峰，其吸光度与其吸光度与V VA A的含量在一定的范围内成正比，故可的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。比色测定。LOGO适用范围及特点适用范围及特点本法适用于维生素本法适用于维生素A A含量较高的各种样品含量较高的各种样品( (高于高于 5 5-10 g -10 g g )g )，对低含量样品，因对低含量样品，因受其他脂溶性物质的干扰不易比色测定：受其他脂溶性物质的干扰不易比色测定：该法的主要缺点是生成的蓝色络合物的稳该法的主

9、要缺点是生成的蓝色络合物的稳定性差。比色测定必须在定性差。比色测定必须在6 6秒钟秒钟内完成，否则内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差。蓝色会迅速消退，将造成极大误差。LOGO注意：注意：1. 1. 维生素维生素A A见光易分解，整个实验应在暗处进见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。2. 2. 三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色沉淀因此用过的仪器要化锑遇水生成白色沉淀因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。先用稀盐酸浸泡后再清洗。LOGO ( (二二)-)-胡萝卜素

10、的测定胡萝卜素的测定 第一方法第一方法HPLCHPLC；第二方法为纸层析法第二方法为纸层析法（GB/T 5009.832003 GB/T 5009.832003 ）。 胡萝卜素是一种广泛存在于有色蔬菜和水胡萝卜素是一种广泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多种异构体和衍生物，总称为果中的天然色素，有多种异构体和衍生物，总称为类胡萝卜素，其中在分子结构中含有类胡萝卜素，其中在分子结构中含有 -紫罗宁残紫罗宁残基的类胡萝卜素，在人体内可转变为维生素基的类胡萝卜素，在人体内可转变为维生素A A，故故称为维生素称为维生素A A原。如原。如、胡萝卜素，其中以胡萝卜素，其中以-胡萝卜素效价最高。胡萝卜素

11、效价最高。LOGO 胡萝卜素原只存在于植物性食品中，但胡萝卜素原只存在于植物性食品中，但以含有胡萝卜为食物的家禽、兽类、水产动物及以含有胡萝卜为食物的家禽、兽类、水产动物及其加工产品，以及为着色而添加胡萝卜素的食品，其加工产品，以及为着色而添加胡萝卜素的食品，当然也含有胡萝卜素。当然也含有胡萝卜素。-胡萝卜素的结构如下：LOGO 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂溶外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂溶性维生素，可用有机溶剂从食物中提取。性维生素，可用有机溶剂从食物中提取。 胡萝卜素本身是一种色素，在胡萝卜素本身是一

12、种色素，在450 450 nm nm 波长处有最大吸收，只要能完全分离，便可定性波长处有最大吸收，只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取叶黄素等共存，在提取 -胡萝卜素时，这些色胡萝卜素时，这些色素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将胡萝卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、胡萝卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。柱层析和薄层层析法。LOGO( (三三) )维生素维生素D D的测定的测定 维生素维生素D D是指含有抗佝偻病活性的一

13、类是指含有抗佝偻病活性的一类物质，具有维生素物质，具有维生素D D活性的化合物约有活性的化合物约有l 0l 0种，其种，其中最重要的是维生素中最重要的是维生素D D2 2、维生素维生素D D 3 3及其维生素及其维生素D D原。维生素原。维生素D D 2 2无天然存在，维生素无天然存在，维生素D D3 3只存在于某只存在于某些动物性食物中。但它们都可由维生素些动物性食物中。但它们都可由维生素D D原原( (麦角麦角固醇和固醇和7 7- -脱氢胆固醇脱氢胆固醇) )经紫外线照射形成。经紫外线照射形成。 维生素维生素D D2 2 药片吃多了中毒。药片吃多了中毒。LOGO维生素维生素D的结构的结构L

14、OGO 分析方法中较好的是比色法和高效分析方法中较好的是比色法和高效液相色谱法，是液相色谱法，是AOACAOAC选定的正式方法。选定的正式方法。 ( (一一) )三氯化锑比色法三氯化锑比色法 ( (二二) ) 液相色谱法液相色谱法 它的的灵敏度较比色法高它的的灵敏度较比色法高3030倍以上，倍以上，且操作简便，精度高，分析速度快。是目前且操作简便，精度高，分析速度快。是目前分析维生素分析维生素D D的最好方法。的最好方法。LOGO 三氯化锑比色法三氯化锑比色法原理原理v 在三氯甲烷溶液中，维生素在三氯甲烷溶液中，维生素D D与三氯化锑结合生与三氯化锑结合生成一种黄色化合物，呈色强度与维生素成一

15、种黄色化合物，呈色强度与维生素D D含量呈正比含量呈正比。v食品中维生素食品中维生素D D含量较低，其他维生素严重干扰其测含量较低，其他维生素严重干扰其测定，因此测定前必须经柱层析除去干扰成分。层析定，因此测定前必须经柱层析除去干扰成分。层析介质为硅藻土、中性氧化铝介质为硅藻土、中性氧化铝v此法测定的是维生素此法测定的是维生素D D2 2和维生素和维生素D D3 3的总量的总量洗脱液洗脱液样品样品填充物填充物分部收集分部收集玻璃柱玻璃柱LOGO三、水溶性维生素的测定三、水溶性维生素的测定 水溶性维生素水溶性维生素B B1 1、B B2 2和和C C，广泛存在于动植广泛存在于动植物组织中，饮食来

16、源充足。但是由于它们本身的物组织中，饮食来源充足。但是由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都会从肌体中排出。为避免耗尽，需要经多余量都会从肌体中排出。为避免耗尽，需要经常地由饮食来提供。常地由饮食来提供。LOGO 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。分解，特别在碱性

17、条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响；它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素维生素B B2 2对光，特别是紫外线敏感，易被光对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏；线破坏； 维生素维生素C C对氧、铜离子敏感，易被氧化。对氧、铜离子敏感，易被氧化。LOGO（一）维生素（一）维生素B Bl l的测定的测定 维生素维生素B Bl l又名硫胺素、抗神经炎素，通常又名硫胺素、抗神经炎素，通常以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜

18、和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。牛乳、蛋黄中含量较为丰富。 分析方法：分析方法：GB/T 5009.84GB/T 5009.8420032003中唯一中唯一的方法是荧光计法。的方法是荧光计法。LOGOv原理原理v 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素（吡哆色素），在紫外线下，硫色素发出蓝色荧光。（吡哆色素），在紫外线下，硫色素发出蓝色荧光。在给定的条件下，以及没有其他物质干扰时，此荧光在给定的条件下，以及没有其他物质干扰时，此荧光强度与硫色素含量成正比。强度与硫色素含量成正比。v荧光测定条件：荧光测定条件：v 激发波长激发波长 365nm365nm；狭缝

19、；狭缝 5nm.5nm.v 发射波长发射波长 435nm435nm；狭缝；狭缝 5nm.5nm.LOGO（二）维生素（二）维生素B B2 2的测定的测定 维生素维生素B B2 2即核黄素。在食品中以游离形式即核黄素。在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品，其中以肝、肾、心、蛋、奶含各种动物性食品，其中以肝、肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬量最多，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。菜。 分析方法：分析方法：GB/T 5009.852003GB/T 5009.852003中第一中第一法为荧光

20、法。第二法为微生物法。法为荧光法。第二法为微生物法。LOGOv原理原理v 核黄素在核黄素在440-500nm440-500nm波长光照射下发生黄绿色荧光波长光照射下发生黄绿色荧光，在稀溶液中，荧光强度与核黄素浓度成正比。在波，在稀溶液中，荧光强度与核黄素浓度成正比。在波长长525nm525nm下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠( (连二亚硫酸钠连二亚硫酸钠 NaNa2 2S S2 2O O4 4),),将核黄素还原成无荧光的物将核黄素还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食

21、品中核黄素所产生的荧光强度。者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。v测定测定v 于激发波长于激发波长440nm440nm，发射波长，发射波长525nm525nm，测量样品管，测量样品管及标准管的荧光值。及标准管的荧光值。LOGO维生素B 6的测定v原理原理v微生物的生长与它们对某些特定的维生素的微生物的生长与它们对某些特定的维生素的需求有关，因此在维生素分析中，将某些微需求有关，因此在维生素分析中，将某些微生物在含维生素的样品抽提液中的生长速率生物在含维生素的样品抽提液中的生长速率，与在含已知量维生素对照溶液中的生长速，与在含已知量维生素对照溶液中的生长速率进行对比，从而得出样品中该维生素的

22、含率进行对比，从而得出样品中该维生素的含量。生长速率可通过测定浊度、产酸量、质量。生长速率可通过测定浊度、产酸量、质量变化或呼吸作用，测定浊度是最常用的方量变化或呼吸作用，测定浊度是最常用的方法。维生素法。维生素B B6 6的含量在的含量在2ng/mL2ng/mL以内，其浓度以内，其浓度对卡尔斯伯酵母菌的生长速率有良好的线性对卡尔斯伯酵母菌的生长速率有良好的线性关系，可以定量测定。关系，可以定量测定。LOGOv测定测定v在在550nm550nm波长下测定吸光度值。绘制波长下测定吸光度值。绘制维生素B 6标准曲线，计算标准曲线，计算LOGO（三）维生素（三）维生素C C的测定的测定 维生素维生素

23、C C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以又称作抗坏血酸。维生素的作用，所以又称作抗坏血酸。维生素C C广泛存广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑桔等食品中含辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑桔等食品中含量尤丰富。量尤丰富。 维生素维生素C C具有较强的还原性，对光敏感，具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成活性。进一步水解则生成2 2，3 -3 -二酮古乐糖酸，二酮古乐糖酸，失去生理

24、作用。失去生理作用。LOGOvVCVC检测技术检测技术2,62,6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 简便简便/ /须脱色、干扰多（深色、其他还原性物质）须脱色、干扰多（深色、其他还原性物质）二甲苯二氯靛酚比色法二甲苯二氯靛酚比色法 深色深色荧光法：荧光法：准确度高，较复杂准确度高，较复杂2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法还原还原型型VCVC的测的测定定总总VCVC的测定的测定总总VC=VC=氧化型氧化型VC+VC+还原型还原型VC+VC+二酮古乐糖酸二酮古乐糖酸少少氧化氧化+ +还原还原+ +二酮古二酮古乐糖酸乐糖酸操作复杂，结果易受影响操作复杂，结果易受影响氧化型氧化型+ +还原型还原型L

25、OGO( (1) 2,6-1) 2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 1 1原理原理 还原型抗坏血酸可以还原染料还原型抗坏血酸可以还原染料2 2，6-6-二二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色( (在中性在中性或碱性溶液中呈蓝色或碱性溶液中呈蓝色) )，被还原后颜色消失。，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗杯血酸含量成正比。中抗杯血酸含量成正比。

26、 LOGO2 2、试剂、试剂 1% 1%草酸溶液：称取草酸溶液：称取10g10g草酸，加水至草酸，加水至1000mL1000mL； 2%2%草酸溶液：称草酸溶液：称20g20g草酸，加水至草酸，加水至1000mL1000mL； 维生素维生素C C标准液：准确称标准液：准确称20mgV20mgVC C溶于溶于1%1%草酸中，并草酸中，并稀释至稀释至100mL100mL，吸，吸5mL5mL于于50mL50mL容量瓶中，加入容量瓶中，加入1%1%草酸草酸至刻度，此溶液每毫升含有至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgV0.02mgVC C； 0.02% 20.02% 2，6-6-二氯靛酚溶液：称取二氯靛

27、酚溶液：称取2 2，6-6-二氯靛酚二氯靛酚50mg50mg，溶于，溶于200mL200mL含有含有52mg52mg碳酸氢钠的热水中，冷却碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至后，稀释至250mL250mL，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。，应用过程中每星期标定一次。LOGO标定一标定一吸标液（吸标液（V VC C）5mL5mL于三角瓶于三角瓶加加6%KI6%KI溶液溶液0.5mL0.5mL加加1%1%淀粉淀粉3 3滴滴用用0.001mol KIO0.001mol KIO3 3标液滴定到淡兰色。标液滴定到淡兰色。计算：计算： 抗坏血酸浓度（抗坏血

28、酸浓度（mg/mLmg/mL）= =（V1V10.0880.088）/V2/V2V1 - V1 - 滴定时消耗滴定时消耗0.001mol KIO0.001mol KIO3 3标液的体积（标液的体积（mLmL）V2 - V2 - 维生素维生素C C重量（重量（g g）0.088 -1mL 0.001mol KIO0.088 -1mL 0.001mol KIO3 3标液标液维生素维生素C C的量（的量（mg/mLmg/mL）LOGO标定二标定二吸吸5mL5mL已知浓度已知浓度V VC C标液标液 加加5mL1%5mL1%草酸草酸 用染料用染料2 2，6-6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在二氯靛酚滴

29、定至溶液呈粉红色，在1515秒不褪色为终秒不褪色为终点点计算：每毫升计算：每毫升2 2，6-6-二氯靛酚相当于维生素二氯靛酚相当于维生素C C的毫克数的毫克数等于滴定度（等于滴定度（T T）T= T= （C C V1 V1）/ / V2V2C - C - 维生素维生素C C的浓度（的浓度（mg/mLmg/mL）V1 -V1 -维生素维生素C C的体积（的体积（mLmL）V2 -V2 -消耗消耗2 2，6-6-二氯靛酚的体积（二氯靛酚的体积（mLmL）LOGO样品测定样品测定提取：称样提取：称样50g50g加加2%2%草酸草酸100mL100mL入捣碎机中处理入捣碎机中处理过滤过滤颜色若深可加白

30、陶土颜色若深可加白陶土滴定：吸滴定：吸5mL5mL样液样液于三角瓶于三角瓶用染料滴定至粉红色用染料滴定至粉红色1515秒内不褪色秒内不褪色计算：计算： VCVC（mg/100gmg/100g）= =（V V T T）/ W/ W 100 100 V -V -消耗染料体积（消耗染料体积（mLmL）T -1mLT -1mL染料所能氧化维生素染料所能氧化维生素C C的毫克数的毫克数W- W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数滴定时所有滤液中含有样品的克数LOGO4 4、注意事项、注意事项 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；所有试剂的配制最好都用重蒸馏水； 滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为滴

31、定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化的参考；观察颜色变化的参考； 样品进入实验室后，应浸泡在样品进入实验室后，应浸泡在2%2%草酸液中（已知量）草酸液中（已知量），以防氧化，损失维生素，以防氧化，损失维生素C C； 贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子（贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子（FeFe2+2+），要用），要用8%8%的醋酸代替的醋酸代替2%2%草酸。这时如用草酸，低草酸。这时如用草酸，低价铁离子可以还原价铁离子可以还原2 2，6-6-二氯靛酚，使测定数值增高，二氯靛酚，使测定数值增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生；使用醋酸可以避免这种情况的发生；

32、LOGO 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化；酸被氧化； 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除；入数滴辛醇消除； 测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。扣除空白体积。LOGO( (二二)2)2，44二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法GB/T 5009.862003 GB/T 5009.862003 蔬菜、水果及其制品中蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸总抗坏血酸含量测定方法含量测定方法第二法第二法 可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、可测总抗坏

33、血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2 2，4-4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总后进行比色，由标准曲线计算样品中总V VC C。LOGOv试剂试剂1.4.5mol/L1.4.5mol/L硫酸：小心将硫酸：小心将250mL250mL硫酸硫酸( (比重比重1.84)1.84)加入加入到到700

34、mL700mL水中，冷却后用水稀释至水中，冷却后用水稀释至1000mL1000mL。2.85%2.85%硫酸：小心将硫酸：小心将90mL90mL硫酸硫酸( (比重比重1.84)1.84)加入到加入到100mL100mL水中，搅拌均匀。水中，搅拌均匀。3.2%23.2%2，44二硝基苯肼溶液：溶解二硝基苯肼溶液：溶解2g22g2，44二硝基苯二硝基苯肼于肼于100mL4.5mol/L100mL4.5mol/L硫酸内，过滤。不用时存于冰箱硫酸内，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。内，每次用前必须过滤。4.2%4.2%草酸溶液：溶解草酸溶液：溶解20g20g草酸草酸(H(H2 2C C2 2

35、O O4 4) )于于700mL700mL水中，水中，再加水稀释至再加水稀释至1000mL1000mL。5.1%5.1%草酸溶液：稀释草酸溶液：稀释500mL2%500mL2%草酸溶液到草酸溶液到1000mL1000mL。LOGOv6.1%6.1%硫脲溶液：溶解硫脲溶液：溶解5g5g硫脲于硫脲于500mL1%500mL1%草酸溶液中。草酸溶液中。7.2%7.2%硫脲溶液：溶解硫脲溶液：溶解10g10g硫脲于硫脲于500mL1%500mL1%草酸溶液中。草酸溶液中。8.1mol/L8.1mol/L盐酸：取盐酸：取100mL100mL盐酸，加入水中，并稀释至盐酸，加入水中，并稀释至1200mL12

36、00mL。9.9.抗坏血酸标准溶液抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)(1mg/mL)：溶解：溶解100mg100mg纯抗坏血纯抗坏血酸于酸于100mL1%100mL1%草酸中。草酸中。10.10.活性炭：将活性炭：将100g100g活性炭加到活性炭加到750mL1mol/L750mL1mol/L盐酸中，盐酸中，回流回流1 12h2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子(Fe(Fe3+3+ ) )为止，然后置于为止，然后置于110110烘箱中烘干。烘箱中烘干。检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将2%2%亚铁氰化亚铁氰化钾与钾与

37、1%1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。离子则产生蓝色沉淀。LOGO( (一一) )样品的制备样品的制备v1.1.浸提：浸提：鲜样的制备：称鲜样的制备：称100g100g鲜样和鲜样和100g2%100g2%草酸溶液，倒入草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取捣碎机中打成匀浆，取101040g40g匀浆匀浆( (含含1 12mg2mg抗坏抗坏血酸血酸) )倒入倒入100mL100mL容量瓶中，用容量瓶中，用1%1%草酸溶液稀释至刻草酸溶液稀释至刻度，混匀。度，混匀。干样制备：称干样制备：称1 14g4g干样干样( (含含1 12mg2mg抗坏血酸抗坏血酸) )放入乳放入乳钵内，加入钵内，加入1%1%草酸溶液磨成匀浆，倒入草酸溶液磨成匀浆，倒入100mL100mL容量瓶容量瓶内，用内，用1%1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。草酸溶液稀释至刻度，混匀。将浸提液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离将浸提液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。心机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。LOGOv2 2，4