如何购买抗体

1、订抗体一定要提供至少以下五个方面的信息给你的供货商,在我们公司 ,这五个信息不全 ,是无法订货的 ,这也是为客户负责 . -1. Antigen, 也就是抗原名称 ,最好是英文全称 ,许多客户只说简称 ,要知道不同的抗体其简称有 可能会一样的 .有中文最好也提供一下 . -2. Reactivity，即反应性，也就是实验用于什么特种，是人，大鼠还是小鼠等-3. Host,宿主,就是抗体来源，这个主要和二抗有关系，一抗必须要和二抗搭配，比如，二抗是羊抗小鼠 ，一抗就要选择小鼠来源的.不少客户常常是先有二抗，再买一抗 ，受限制得很 ，其实应该先订一抗 ，再买二抗 ，毕竟一抗贵 ，为了将就一个 10

2、0 元左右的二抗 ，而把几千元的一抗的订购弄 得很复杂 ，真是不划算 .所以 ，不要为了二抗伤脑筋 .4. Conjugate，即缀合物或标记物，如是不是需要 FITC标记，HRP标记等情况，也最好说明.-5. Applications,就是应用.你买这个抗体用于做什么实验，是IHC还是WB,这点一定要说，要知道，抗体开发出来 ，不是什么实验都能用或都会效果好 ，抗体公司说明上写着能做的实验是经 过验证的 ，没有写的不是说一定不能做，也可能可以做 ，但没有验证 ，厂家不会乱说的 ，也是科学负责的态度.例如，你要是想做IHC-P就是石蜡切处的免疫组化，如果买不到抗体明确说可以做，你要用就得冒风险

3、 ，好在现在抗体厂家众多 ，一般都找得到了 . -1. 该定制单抗还是多抗？首先应该考虑的就是定制的抗体是应用于什么实验，需要的量是多少？对于科研用户来说1. 抗体常常应用于 WesternBlotting 、IP 等实验中，对于抗体的特异性有一定的 要求，但并不是特别的强调2. 往往在研究很多新的蛋白时，并不确定新蛋白是否很重要，是否会是将来很 长一段时间的研究重点， 所以抗体用量也不大所以针对科研用户， 在定制新的蛋 白的抗体时， 我们强烈建议首先制备多抗用于实验， 当得到了理想的实验结果并 需要长期的使用该抗体时再考虑制备单抗。 当然，如果您对该抗体的特异性要求 特别高（多抗的特异性已无

4、法满足实验要求，比如应用于流式细胞术等）时，还 是应该定制单抗对于工业用户来说1. 抗体往往应用于检测定量实验或者功能性实验，对于抗体的特异性要求非常之高2. 目标蛋白基本上都是已知的确定有相当商业开发价值的， 而且产品一旦形成， 用量会非常大所以针对工业用户，基本上可以直接定制单抗2. 该选多肽还是蛋白作为抗原呢？需要根据抗体应用于什么实验，以及您所能获得的材料来决定1. 实验过程中蛋白处于天然状态，这时使用的抗体识别的一般是蛋白的构象表 位和线性表位； 这样的实验主要有 CO-IP 、FACS 、Neutralizing/Blocking 以及 E lisa 法检测天然蛋白等2. 实验过程

5、中蛋白处于变性或半变性状态，这时大部分的构象表位已被破坏， 抗体识别的一般都是线性表位；这样的实验主要有： Western 、IHC/ICC/IF 等以 多肽作为抗原制备的抗体， 识别的是线性表位， 在使用时蛋白处于变性或半变性 状态下，结果可以令人满意； 但不能够保证识别天然蛋白以蛋白作为抗原制备的 抗体，识别蛋白的线性和构象表位，基本上所有的实验都可以应用，所以，用蛋 白作为抗原应是首选， 但是在多肽抗原已可满足实验要求而且得到蛋白有一定难 度的情况下，以多肽作为抗原制备抗体更加合适。3、什么情况应该考虑用设计多肽做抗原？答：如果氨基酸序列已知， 但是由于基因克隆或表达等原因得不到抗原蛋白

6、， 或者仅需要得到针对抗原蛋白某几个特定表位的抗体， 就可以采用多肽合成的方 式得到抗原。 例如仅需要生产针对蛋白质某个区域的特异抗体， 比如研究蛋白质N 端的前体物，可以设计 N 末端的多肽抗原。如果抗体的使用目的是识别修饰 的氨基酸，如磷酸化的丝氨酸、苏氨酸或者酪氨酸，乙酰化赖氨酸等，就必须对 多肽进行相应的修饰。 一般情况下抗血清能够识别用来免疫的多肽序列， 但是不 一定识别天然蛋白质的折叠结构。 非连续性抗原的抗体能否识别抗原决定簇取决 于用于抗体生产的多肽是否存在二级结构。4、设计多肽做抗原时的几点基本原则？答：识别区域的选择原则一般说来最理想的抗原性识别区域应具备亲水、 位 于蛋白

7、表面和结构上易变形性等特点。 既要考虑其免疫原性、 特异性， 还需考虑 其合成难度等。通常有以下几点建议： 1、序列长度在 8-20 个氨基酸残基之间 （如 果太短，就有多肽太特殊、所产生的抗体与天然蛋白之间的亲和力（结合能力） 不够强的风险，同样，如果序列长度超过 20 ，将有可能引入二级结构，所产生 的抗体失去特异性的可能， 而且肽链越长， 通常合成难度增大， 不易获得高纯度 的产品）；2、尽可能是在蛋白表面；3、保证该段序列不形成 a-helix ; 4、N , C 端的肽段比中间的肽段更好；避免蛋白内部重复或接近重复段的序列；5、避免同源性太强的肽段； 6、交联可以交联在 N， C 两

8、端，选择依据就是交联在对 产生抗体不太重要的一端；7、序列中不能有太多的Pro，但有一两个Pro有好 处，可以使肽链结构相对稳定一些，对产生特异性抗体有益。5、原核表达含 GST 标签的蛋白制备抗体时，需要切掉 GST 标签 吗？答：如果目的蛋白很大且之后的实验不受 GST 影响的话， GST 标签是不用 切掉的。但是如果目的蛋白小于 20KD 的话，建议通过实验切除 GST 标签。6、抗体的保存：答：小包分批，避免多次反复冻融。短期： 4度冰箱保存。长期： -20 度， 一般需要加入甘油， BSA 等。7、关于抗原的常识答：对抗原的要求是纯度越高越好， 尤其是初次免疫所用的抗原。 如为细胞

9、抗原，可取1X107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分 乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原， 可将抗原所在的电泳条带切下， 研磨后 直接用以动物免疫。还有一些半抗原， 如多肽，在免疫之前是需要耦联一些蛋白， 如 KLH ， BSA 等。病毒类的抗原， 可以直接用于免疫。 如果是蛋白， 一般来说， 蛋白的纯度要在90%以上，浓度在1mg/ml以上，分子量10kd。一般最好融解 在无毒的缓冲液中，建议溶解在 PBS 中1. 根据实验ELISA、荧光免疫组化的抗原可能是线性表位，也可能是构象表位；而石蜡 切片酶免疫组化、WB实验过程中涉及蛋白变性，因此只能用识别线性表位的抗 体，如

10、果用ELISA、荧光免疫组化抗体不一定有反应。2. 根据你的标本的物种来源如来源于人，抗体就选鼠抗人、兔抗人一抗要与二抗相匹配， 如果一抗是小鼠来源， 那二抗就买抗小鼠的； 一抗是 兔来源，二抗就要抗兔的。例如，检测人组织细胞因子 IL-4 ，一抗假如是 mouse 抗人（来源于mouse，二抗就用兔或羊或大鼠等抗 mouse的；3. 抗整个分子还是抗某个亚基如一些受体分子由不同亚基组成，需要用不同单抗；4. 单克隆or多克隆抗体单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对低；多克隆抗 体特异性稍弱，亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色表达量相对较高的抗原，尽量选择单克隆抗体；不

11、明确表达量情况，且有经 济限制和时间限制的情况，可以选择多克隆抗体。已得到文献验证的抗体，可到 查询。抗体购买时应该注意事项点击次数：110发布时间：2011-10-27抗体质量的好坏是完成免疫组化工作的关键， 目前可从二条途径获得。 首先可从市场上获得 商品化抗体，这是主要来源。但有时为了研究或证实一种新的抗原成分， 而又无相应抗体可 购买时，往往需要自己制备抗血清。当然，也可以从文献上查找，并向作者索要。原则上应选择在较高稀释度时染色较佳、背景较低、结果稳定、重复性好的商品化抗体。目前供IHC研究和诊断用的抗体种类繁多， 制造商如林，不同

12、厂家的相同抗体，其价格、 包装 及抗体的最佳工作浓度差异较大。在选购时， 应多听取有实践经验专家的意见。另外， 还应 考虑抗体的种属。一般用于诊断、鉴别诊断的抗体最常见的是兔和小鼠的单克隆抗体，并注明可用于诊断， 其价格也较昂贵；而用于研究用的抗体， 其种属较多，例如兔、小鼠、羊、大鼠和鸡的抗体等， 其价格相对廉价，品种较新。购买抗体前要了解清楚是否与实验室现有的检测试剂配套和能 用于何种切片类型检测，例如冰冻切片或石蜡切片，一般需购置能用于石蜡切片检测的。此外，还应了解清楚是否需要何种前处理（酶消化或抗原修复），以及抗体的最佳稀释度等问 题。最好购置能用于石蜡切片，稀释度在1 : 100以上的抗体。在购置用于实验研究