时间分辨荧光技术TRFIA技术培训资料PPT学习教案

1、会计学1时间分辨荧光技术时间分辨荧光技术TRFIA技术培训资料技术培训资料n时间分辨荧光（精度：时间分辨荧光（精度：10-18mol/L ）第1页/共48页第2页/共48页第3页/共48页第4页/共48页第5页/共48页第6页/共48页 1979 1979年，年，提出提出“时间分辨荧光免疫分析时间分辨荧光免疫分析”理论，理论，19891989年该技术获诺贝尔化学奖提名。年该技术获诺贝尔化学奖提名。 9090年代以来，时间分辨荧光分析技术因其年代以来，时间分辨荧光分析技术因其灵敏度高，操作简便，标准曲线范围宽，不受灵敏度高，操作简便，标准曲线范围宽，不受样品自然荧光干扰，无放射性污染等特点，其样

2、品自然荧光干扰，无放射性污染等特点，其方法学研究和临床应用的发展十分迅速。方法学研究和临床应用的发展十分迅速。 时间分辨荧光分析技术正在成为现代医学时间分辨荧光分析技术正在成为现代医学研究中最有发展前景的分析手段研究中最有发展前景的分析手段第7页/共48页第8页/共48页第9页/共48页第10页/共48页第11页/共48页V第12页/共48页VEu标记物轻轻链链螯合螯合剂剂Eu重链重链第13页/共48页V第14页/共48页第15页/共48页第16页/共48页仪器检测仪器检测第17页/共48页 铕铕(Eu)(Eu)、钐（、钐（Sm)Sm)、镝、镝(Dy)(Dy)、锝、锝(Tb)(Tb)镧系元素荧

3、光特点：镧系元素荧光特点： 1 1、荧光寿命极长、荧光寿命极长镧系元素螯合物（镧系元素螯合物（6060900 us) 900 us) 714us普通荧光免疫中荧光团：普通荧光免疫中荧光团：1 1100us100us样本中蛋白质荧光：样本中蛋白质荧光：1 110us10us，易猝灭，易猝灭第18页/共48页利用镧系元素荧光利用镧系元素荧光物理特性，荧光激物理特性，荧光激发后在固定时间段发后在固定时间段检测特异性荧光而检测特异性荧光而在此时间之前，非在此时间之前，非特异性荧光已完全特异性荧光已完全衰减为衰减为0 0TRF分析原理图（分析原理图（2）第19页/共48页第20页/共48页发射光谱与激发

4、发射光谱与激发光谱间存在的巨光谱间存在的巨大大StokesStokes位移。位移。可以通过干涉滤可以通过干涉滤光片将发射光谱光片将发射光谱与激发光谱完全与激发光谱完全分离分离第21页/共48页技术技术特点特点检验先进性检验先进性时间分辨时间分辨光谱分辨光谱分辨特异性荧光与非特异性荧特异性荧光与非特异性荧光分离光分离发射荧光与激发光分离发射荧光与激发光分离零背景、高特异性零背景、高特异性高灵敏度高灵敏度解离解离-增强增强 荧光性大大提高荧光性大大提高稳定的荧光螯合物稳定的荧光螯合物线性范围宽线性范围宽高灵敏度高灵敏度原子标记原子标记 标记位点多，可达标记位点多，可达20个个 对标记物结构及活性影

5、对标记物结构及活性影响小响小 无衰变无衰变 受环境影响小受环境影响小高稳定性，高精确度高稳定性，高精确度试剂保质期至少一年试剂保质期至少一年标准曲线保留时间长标准曲线保留时间长同一批次可两点定标同一批次可两点定标多标记多标记单，双，三，四标记单，双，三，四标记同一试剂盒可同时测同一试剂盒可同时测多个项目多个项目第22页/共48页第23页/共48页时间分辨荧光免疫检测的标准曲线相当稳定，同一批次的试剂盒可用两点法加批次的参考曲线定标0.5 1 2 5 10 20 50 100 200 500 U/L 51002000Cps.10 3DELFIA hFSHN=6第24页/共48页第25页/共48页第26页/共48页第27页/共48页三、时间分辨荧光免疫技术三、时间分辨荧光免疫技术的临床应用的临床应用 (临床检测试剂盒简介临床检测试剂盒简介)第28页/共48页第29页/共48页时间分辨荧光分析仪器测定项目介绍时间分辨荧光分析仪器测定项目介绍第30页/共48页第31页/共48页第32页/共48页第33页/共48页第34页/共48页第35页/共48页时间分辨荧光分析仪器测定项目介绍时间分辨荧光分析仪器测定项目介绍第36页/共48页第37页/共48页