乳腺癌HER2_FISH检测、判读及报告

1、乳腺癌her2fish检测-检测意义、建议及标本准备her2与乳腺癌乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%4%的速度急剧上开，已成 为女性的笫一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在her2基因的扩增及蛋白的高 表达。her2基因（乂名her2/neu, c-erbb-2）位于17ql2,是表皮生长因子受体（her）家 族成员之一，her家族在细胞生理过程中发挥重耍的调节作用。her2编码相对分子量 185kd的跨膜受体样蛋內，具冇酪鉍酸激酶活性。her2是重要的乳腺癌预后判断因了， her2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也 与其他

2、类型的乳腺癌有很人的区别。her2检测方法有免疫组化（ihc）和荧光原位杂交（fish）等。2014年nccn乳腺 癌临床实践指南和乳腺癌her2检测指南2014版均强调：fish是检测her2基w状 态的金标准。一. 检测意义1. 判断预后：her2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。2. 指导治疗：her2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。 her2菽因扩增的乳腺癌患者对cmf方案不敏感，宜采川大剂s蔥环类药物和紫杉醇类药 物力*案；her2基因扩增的乳腺癌忠奍明显受益于herceptin （赫赛汀，2001年fda批准上 市）等靶向药物治疗。二. 检测建

3、议ihc和fish检测her2的状态一致性很高，但也存在着差异，数裾统计如下表1和表 2示，对于ihc 2+样木必须要用fish进一步确认结果；0、1+或3+，根据条件，可再做 fish验证。fish阳性率ihc 0892565.91+51421129.12+32741555.93+7466089.9表 1: (2004) her2 amplification ratios byfluorescence in situ hybridization and correlationwith immunohistochemistry in a cohort of 6556 breastcancer

4、tissues. clinical breast cancer表2:2007年卫少部科教司牵头纟h.织全岡73家三级以上饵院历时2年完成“焚光原位杂交技术（fish）用丁乳腺癌患者her-2检测的临床研究”课题，检测标本达3368例阴性 wi(%)因此，2014年nccn乳腺癌临床实践指南和乳腺癌her2检测指南（2014版） 均建议先进行her2蛋闩的ihc检测，ihc2+样木进行ish （fish、dish或cish）检测。her2 testing by valkiatedwc assay w_ ihc 0,1*> ihc 2* ihc 3+must reflex test with

5、 ish (if same spedmmi), or order new test with ihc or ish (if new specimen available).her2 testing by vilklmtd single-probe ish 助say2*3avogt her2 copynumber <4.0 signsis/ctll»average her2 copy number 4.0 and <6.0 signals/co iiaverage her2 copy number 6.0 signalszcellish0must rvfltx test w

6、ith dual-probe equivocal _ ish or with wc (if same specimen, rmukor order new test with ish or ihc(if new specimen available).her2 testing by valktatod dualprob* ishatmyher2/cep17 ratio izo her2/cep17 ratio <2.0 _average her2 copy number <4.0 signals/cell -average her2 copy number 4.0 signals/

7、cellaverage her2 copy number <4.0 signals/cll -average her2 copy number 24.0 and <6.0 signals/c«llaverage her2 copy _ number 6.0 signalszcell> ishh ishb equivocalresult>ishhmust reflex test with ihc (if same specimen), test with alternative ish chromosome 17 probe, or order a new to

8、st with ish orlhc(tf new specimen avaibbto).ish2014年nccn乳腺癌临床实践指南三. 样本准备：1. 标本类型：（1）手术切除标本；（2）飢针穿刺活检标本；活检标本。2. 标本固定：所宥乳腺癌标本离体后都应尽快固定（lh内固定）。固定吋应将鉍本每隔5 lonrn切开，井可在组织问嵌入纱布或滤纸等物。同定液景与所浸泡组织的比例成足够。固定时间以672h为宜。3. 固定液类型：4%中性（磷酸缓冲;醛固定液。4. 组织切片:（1）切片厚度3-5um; （2）应有he染色切片作为对照。四. 临床上哪些患者需要进行her2检测1. 所有乳腺原发性浸润癌都

9、应进行her2检测；2. 只耍能获取肿瘤组织，对兌发灶或转移灶也应该进行her2检测；3. 如her2检测结果为阴性，似疚病复发且生物学行为提示可能为her2阳性肿瘤时，成重 复her2检测；4. 如her2检测结果与组织病理学特征不相符吋，如组织学分级为i级的浸润性乳腺癌her2 阳性,应重复her2检测。组织学1级的类型腺癌：浸润性导管或小叶癌，er和pr阳性小管癌（至少90%为纯小管癌）粘液癌（至少90%为纯粘液癌）筛状癌（至少90%为纯筛状癌）腺样囊性癌（至少90%为纯腺样囊性癌）.f1.常为三明性乳腺癌her2 fish检测-判读一. 信号观察流程1. 首先在he/ihc切片上确认肿

10、瘤区域;2. 在10x物镜下，于fish标木上找到与he染色切片上相同的组织细胞结构；3. 在40x物镜下扫描整张切片，观察足否存在异质性，要求至少找到2个浸润癌区域，计数 至少20个浸润癌细胞。满意的标本应是75%以上癌细胞核巾有杂交信号；4. 在100x物镜下观察癌细胞核的fish结果进行信号计数，注意上下调整焦距，以免遗漏信 号。二. 实验失败、不能判读的情况1. w操作等原因，细胞核被损坏，边界不完整；2. 组织过度消化，细胞核边界不完整，dapi染色浅；3. 组织消化不纪，25%以上的细胞核无信号；4. 发荧光很强或细胞核分辨差，10%细胞核外有信号。三. 计数要求1. 计数区域可结

11、合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识；2. 选择具较好核分界的区域，要求细胞核人小基本-致、边界完整，dapi染色均匀、核无 熏佥，绿色着丝粒信号清晰；3. 随机计数确定的肿瘤区域中2030个细胞核中的双色信号，不耍主观选择信号多的核计 数；4. 不要计数仅显示一种颜色信号的细胞核：5. 避免计数分裂像的细胞核或被细胞核分裂及边界不完整核；6. 如果2个同样大小的橘红信号之间距离不足一个常规橘红信号大小，只计为一个信号；7. 若红、绿两信号的比位20或众多信号连接成簇时可不计数，视为基因扩增；8. 苦为临界值，则耑要冉计数20个细胞核中的信兮或由w外一个观察者重新计数，如仍为 临界位，则成在fis

12、h检测报告屮注明，或换其它方法或w它蜡块重新检测；9. 若her2基因扩增在不同癌细胞屮存在异质性吋，应在另一癌区域再计算2030个癌细 胞核中的红、绿信号值，报吿其最大值，并加以注释；10. 判读时nj以将乳腺组织中的正常细胞（如成纤锥细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳腺上皮细胞）的her2信号和csp17信号作为内对照。细胞核部分似信号不在艰*ix域内*计数：埒个细胞核内为两个疳色、两个绿色ir数为:网个橙色倌号和两个绿色m号，个燈 色信号扩敗*小计数，细胞核氓叠，使不能对所打的细胞核区 域进行杏打.有些恺在巫僉区域内。il数为：叫个橙色仿4和两个绿色倍号。个橙 色信号被裂开，计数力：个

13、份色ffi 4和网个绿色个绿 色信兮被裂幵.枪色佑兮也被裂开。计数为:两个橙色信号和个绿色信号*计数力:三个橙色倌号和一个绿色倌兮.计数为:四个橙色倍号和两个绿色信号.o =绿色探针，cep17 =橙色探针，lsi her-2/neu一些常见信号类型及计数方法摘自乳腺癌her-2基因检测试剂盒（fish法）说明|$abbott moleular inc.结果判读在淸晰的肿瘤区域，按以上计数要求在至少20个核內计数gsp her2 （红色）和csp17 （绿色）信号，分别记录gspher2和csp17的信号总数，再计算平均每个细胞her2拷 w数、平均每个细胞csp17拷w数以及gspher2和

14、csp17比值。a. 若her2/csp17<2.0,且平均her2拷贝数/细胞<4.0, her2阴性；b. 若her2/csp17<2.0,且平均her2拷贝数/细胞<6.0,但2:4.0时，her2结果不确定；c. 若 her2/csp1722.0,或 her2/csp17<2.0 而 her2 拷贝数/细胞6.0, her2 阳性。乳腺癌her2检测指南2014版乳腺癌her2检测指南2014版注：a：对于her2/csp17比值2.0，但y均her2拷w数/细胞4.0的病例是竹应该视为fish则性目前 尚存争议，建议对这部分病例在报告屮加以备注，提示b前

15、的争议，建议临床医师参考免疫组织化学检 测结果并与患者进行必要的沟通：b：见于均质、连续的浸润细胞，且占浸润癌的10%以上五.her2 fish判读标准的变化乳腺癌her2检测指南2009版判读标准：a. 昔 her2/csp171.8，her2 阴件；b. 若 her2/csp17三 1.8,且2.2, her2 结果不确定;c. 若 her2/csp 1722.2，her2 阳性。新旧判读标准的比较： 2014版新标准的截断值为2.0, 2009版老标准的截断值为1.8和2.2; 2014版新标准不从是her2/csp17的比值，需结合her2苏因的拷w数进行判读；2009 版则仅根裾he

16、r2/csp17的比值进行判读，不考虑her2葙謝考w数。新旧判读标准衔接中可能出现的问题： 2014版新标准ili现her2检测结果不确定的怙况会比2009版标准更少； 2014版新标准判读阴阳性结合了 her2基因的拷贝数，有些2009版标准判渎结果为阴性 的标本，如果her2基因拷w数冰0, 2014版新标准则判力阳性。乳腺癌her2检测指南2009版与乳腺癌her2检测指南2014版乳腺癌her2 fish检测-报告及结果解释一.报告要求乳腺癌her2检测指南2014版耍求检测报告包拈如下内容：患者信息（包桮姓名、 性别、年龄、门诊/住院兮）、送检医师姓名、送检u期、标木信息（包括病理

17、兮和蜡块兮）、 标木部位和类型、探针信息、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况、样木景是否适 合评估、判读结果（包括评估的细胞数量、平均her2拷贝数/细胞、平均csp17拷贝数/细 胞、平均her2拷贝数/平均csp17拷贝数的比值）、检测结论（如阳性、不确定、阴性、无 法判读）。这里强调两个概念：17兮染色体计数和her2异质性。1. 17号染色体数目：fish双探针检测系统屮加入csp17探针的目的是为了在检测her2 基因的同吋检测17号染色体数0，从而区分17号染色体的非整倍体与her2基因扩增。近 年来的研究显示17号染色体多倍体与csp17多信号点（着丝粒区多点）是不同的概念

18、。17 号染色体多倍体较罕见，而部分乳腺癌中17号染色体上存在her2基w和着丝粒区的共同 扩增。越來越多的学荞认为，与gspher2/csp17比值相比，her2拷贝数对于her2基 因扩增的判断更为重要。w此在her2 fish检测结果屮除报告gsp her2/csp17比值外， 还应分别报告her2拷w数和csp17的数值。2. her2基因的异质性：浸润性乳腺癌中her2表达或扩增nj存在异质性。虽然her2®因异 质性的临床意义鬥前仍不叨确，但它可导致ihc与ish检测、原发灶与转移灶、穿刺称本与 手术切除标木的检测结果不一致。在ish计数之前，应观察整张切八或使川1hc确

19、定町能存 在her2扩增的区域。需要强调的是，即使存在异质性，但只要扩增细胞连续、均质，且占 浸润癌10%以上，就应明确报告为ish阳性。在报告屮可补充报告不同细胞群（10%）的计数 值他括计数的细胞总数、her2拷贝数、csp17数值、gspher2/csp17比值），并报告扩增 细胞群占所有浸润癌细胞的比例。二.常见结果及解释fish阴性（her2无扩增），17号二倍体。gsp iier2/csp17 （红色/绿色）2.0。fish临界，17号多倍体（her2基因伴随多拷贝）。gsp her2/csp17 （红色/绿色） 2.0,但平均每个细胞hek2拷贝数为4. 9个，介于4. 0-6. 0之间。fish阳性，17号多倍体。gspher2/csp17 （红色/绿色）2.0,但平均付个细胞hek2拷w数为6. 8个，大于6.0。fishhi性，17号染色体二倍体。 gsp her2/csp17 （红色/绿色）2.0。fish阳性,17号染色体多倍体。 gsp her2/csp17 （红色/绿色）彡 2.0。fish阳性,17号染色体单倍体。 gsp her2/csp17 （红色/绿色）彡2. 0,平均每个细胞hek2拷贝数为2.0个，平均甸个