食品微生物玻璃器皿的清洗包扎营养琼脂培养基的制备实用教案

1、 一、目的要求 了解高压(goy)蒸汽灭菌的基本原理。 学习高压(goy)蒸汽灭菌的操作方法。第1页/共27页第一页，共27页。二、实验(shyn)原理 二、实验原理 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热(sh r)和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热(sh r)的杀菌效力比干热大，因为在湿热(sh r)情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热(sh r)的穿透力强

2、，可增加灭菌效力。 高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121，经1530min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160170维持12h。 火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红

3、热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。第2页/共27页第二页，共27页。 三、实验器材 器皿：平皿（10个/组），1ml吸管（9支/组），试管18180（10支/组），试管（15150）（12/组），三角锥瓶500ml（3个/组）、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml），10ml吸管 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽菌锅，电烘箱(hngxing)，线绳,毛刷等第3页/共27页第三页，共27页。四、操作方法 （一）玻璃器皿的清洗(qngx)包扎 玻璃器皿在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。第4页/共27页

4、第四页，共27页。将平皿用纸包扎(boz)好，以58个为一包；第5页/共27页第五页，共27页。第6页/共27页第六页，共27页。注意(zh y)：五正一反第7页/共27页第七页，共27页。第8页/共27页第八页，共27页。 吸管应在管口约0.5厘米以下的地方塞入少许(shox)长约1.5厘米的棉花，以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气顺畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去。然后，将吸管尖端放在4-5厘米宽的长条纸的一端约与纸条成45角，折叠纸条，包住吸管尖端，然后将吸管卷入纸条内，末端剩余纸条折叠打结，待灭菌。第9页/共27页第九

5、页，共27页。第10页/共27页第十页，共27页。第11页/共27页第十一页，共27页。第12页/共27页第十二页，共27页。包扎(boz)试管：制作试管塞第13页/共27页第十三页，共27页。扣上绳子(shng zi)、打结第14页/共27页第十四页，共27页。包扎(boz)完成第15页/共27页第十五页，共27页。培养基的制备(zhbi) 目的要求 了解并掌握培养基的配制、分装方法。 学习微生物实验(shyn)的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验(shyn)做准备。第16页/共27页第十六页，共27页。 制法：将称好的牛肉膏

6、、蛋白胨及NaCl放入搪瓷(tngc)缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再加入15氢氧化钠2ml，校正pH7.27.4，然后，在石棉网上加热使其溶解。将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。第17页/共27页第十七页，共27页。制法：将称好的牛肉膏、蛋白胨及制法：将称好的牛肉膏、蛋白胨及NaClNaCl放入搪瓷缸中，放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再加入加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再加入1515氢氢氧化钠氧化钠2ml2ml，校正，校正(jiozhng)pH7.2(jiozhng)pH7.

7、27.47.4，然后，在，然后，在石棉网上加热使其溶解。将称好的琼脂放入已溶化的石棉网上加热使其溶解。将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。分。第18页/共27页第十八页，共27页。原料准备(zhnbi)完毕第19页/共27页第十九页，共27页。 将原料(yunlio)放入瓷缸中第20页/共27页第二十页，共27页。未完全溶解(rngji)的琼脂第21页/共27页第二十一页，共27页。调ph值加入氢氧化钠加入氢氧化钠(qn yn hu n)2ml，校正，校正pH7.27.4第22页/共27页第二十二页，共27页。第23页/共27页第二十三页，共27页。加热(ji r)第24页/共27页第二十四页，共27页。琼脂营养培养基制作(z