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文档简介
1、cellulase 纤维素酶sucrose invertase 蔗糖转化酶滴定法1试剂配制(1)20%蔗糖(2)甲苯(3)PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液(4)33% KI液(5)H2SO4(1:3)(6)淀粉指示剂:取0.5g淀粉溶于少许水中,加10ml煮沸的25%NaCl液,煮沸1min(7)0.1N Na2S2O3滴定液:配制方法与标定方法见多酚氧化酶测定(8)菲林溶液:取34.64 g CuSO4.5H2O溶于蒸馏水,并稀释至500ml(a)取173g酒石酸钾钠和50gNaOH溶于蒸馏水,并稀释至500ml(b),使用前将(a)(b)按1:1混合2操作步骤取10g土壤置于100ml三角瓶
2、中,用1.5ml甲苯处理15min。加10ml 20%蔗糖和10ml PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液,摇匀后放在37恒温箱中培养24h 培养结束后,加50ml蒸馏水,摇荡后过滤。取20ml滤液移于100ml三角瓶中,加10ml菲林溶液。在沸水浴上放置10min,冷却至室温后再加3ml 33%KI溶液和4ml H2SO4(1:3)。然后用0.1N Na2S2O3滴定,至终点前加淀粉指示剂,再滴定至蓝色消失。试验应设以水(20ml)代替基质的对照 蔗糖酶活性,用对照与试验的0.1N Na2S2O3滴定毫升数之差表示-glucosidase -葡糖苷酶peroxidase 过氧化物酶HRPxylan
3、ase 木聚糖酶 淀而成。配制浓度为1%(2)甲苯(3)PH6.5 0.15M磷酸盐缓冲液(4)铜-磷酸盐试剂:取28g无水K2HPO4和40g酒石酸钾钠,溶于700ml水中,加100ml 1N NaOH,然后加入80ml 10%CuSO4.5H2O溶液。溶解后,加入180g无水Na2SO4,将溶液稀释至1L并过滤后备用(5)0.005N KI(6)2N H2SO4(7)0.005N Na2S2O3。5H2O溶液。该工作夜由0.1N Na2S2O3原液稀释而成。为防止大气中CO2的影响,稀释1L溶液加2ml 10% NaOH(8)木糖的标准溶液(1ml含0.2mg木糖)4操作步骤
4、取5g土置于50ml三角瓶中,加2ml甲苯。10min后,加5ml PH6.5磷酸缓冲液和5ml 1%木聚糖溶液。放在37恒温箱中培养5昼夜。 培养结束后,取5ml滤液移于大试管中,加5ml铜-磷酸盐试剂。塞好试管后,放在沸水浴上加热10min。这时,有红色氧化亚铜沉淀析出。待冷却后,为使亚铜氧化,沿管壁加5ml 0.005N KI溶液(不要混合)。然后迅速注入1.5 ml 2N H2SO4,并立即摇动混合液。剩余的KI用0.005 Na2S2O3进行回滴。根据KI的差,得出与当量铜量结合的碘化钾量。 为了计算反应液中生成的木聚糖,得到1mg木糖的0.005N CuO的毫克数,可用标准木糖液5ml,按上述方法沉淀,铜用硫代硫酸钠滴定。根据用于氧化铜的KI的量,查知其当量数(以0.005N CuO的毫克数表示)木聚糖酶活性,以1ml反应混合物中木糖的毫克数表示。试验设置以水代替基质的对照phenol oxidase 多酚氧化酶 PPO1分析意义多酚氧化酶参与土壤有机组分中芳香族化合物的转化作用。土壤中的酚类物质在多酚氧化酶的作用下氧化生成醌。醌与氨基酸等通过一系列生物化学过程所合成
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