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1、单元检测卷 (十一 )现代生物科技专题1(2019 成都一诊 )用基因工程技术生产羧酸酯酶(care)制剂的流程如图所示。回答下列问题:(1)过程所需的酶是 _。从 cdna 文库中获取的目的基因 _(填“有”或“ 无 ”) 启 动 子 。 实 现 过 程 常 用 _技 术 , 运 用 该 技 术 的 前 提 是 要 有_ ,以便合成引物。(2)过程将重组表达载体导入大肠杆菌时,首先用ca2处理大肠杆菌,目的是_ 。 然后将 _ 溶于缓冲液中与该大肠杆菌混合,在一定温度下完成转化。(3)过程可利用 _技术鉴定 care 基因是否已导入大肠杆菌。答案(1)逆转录酶无pcr一段已知目的基因的核苷酸
2、序列(2)使大肠杆菌处于较易吸收周围环境中dna 分子的生理状态重组表达载体 (重组质粒) (3)dna 分子杂交解析(1)过程是以 mrna 为模板合成 cdna 的逆转录 (反转录 )过程,此过程需要逆转录酶的参与。mrna 中无启动子的转录片段, 所以从 cdna 文库中获取的目的基因无启动子。过程可表示使用 pcr技术扩增目的基因的过程, 运用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便合成引物。(2)过程表示将重组表达载体导入大肠杆菌。用 ca2处理大肠杆菌的目的是使大肠杆菌处于较易吸收周围环境中dna 分子的生理状态,然后将重组表达载体溶于缓冲液中与该大肠杆菌混合,在一定温
3、度下完成转化。(3)过程是目的基因的检测与鉴定,可利用dna 分子杂交技术鉴定目的基因(即 care基因)是否导入大肠杆菌。2(2019 河北保定高三期末 )干扰素具有抗病毒、抑制肿瘤及免疫调节等多种生物活性。质粒中的 lacz 基因可表达出 - 半乳糖苷酶,当培养基中含有ipig 和 x-gal 时,x-gal 便会被- 半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌形成蓝色菌落,反之则形成白色菌落。如图是将人干扰素基因导入大肠杆菌,培养后生产干扰素的过程。(1)在获得干扰素基因后,常采用pcr 技术大量扩增。该技术的基本过程是:目的基因dna 受热变性后解链为单链, _与单链相应互补序列结合,然后在dna
4、 聚合酶的作用下进行 _ ,如此重复循环多次。(2)过程最好选用的限制酶是_ 。为了筛选含有重组质粒的大肠杆菌,需要在培养大肠杆菌的培养基中额外加入_ ,培养一段时间后挑选出_(填“蓝色”或“白色” )的菌落进一步培养获得大量目的菌。(3)某些干扰素可抑制肿瘤细胞dna 的合成,通过减缓细胞 _分裂过程抑制肿瘤。还有些干扰素可提高吞噬细胞将抗原呈递给_ 的能力,从而在免疫调节中发挥作用。答案(1)引物互补链的合成 (或延伸 ) (2)bamh和 ecoripig、x-gal 和青霉素白色(3)有丝t 淋巴细胞解析(1)pcr 技术的基本过程是:在高温下,目的基因dna 受热变性后解链为单链;温
5、度降低,引物与单链相应互补序列结合;然后,温度回升时,在dna 聚合酶的作用下进行互补链的合成,如此重复循环多次。(2)为了产生相同的黏性末端,获取目的基因和切割载体时通常使用同种限制酶。由题图可知,质粒和目的基因均具有ecorv、bamh和 ecor限制酶切割位点,但ecorv 限制酶会破坏干扰素基因,因此过程不能选用该酶,最好选用bamh和 ecor限制酶。选用bamh和 ecor限制酶切割质粒和目的基因,重组质粒中青霉素基因完好,可正常表达,对青霉素具有抗性;而lacz 基因被破坏,无法表达出- 半乳糖苷酶,无法使ipig 和 x-gal变蓝,显白色。因此,在培养基中加入ipig、x-g
6、al 和青霉素,只有成功导入目的基因的重组质粒的细菌 (即目的菌 )才能不被青霉素杀死,同时表现为白色。(3)癌细胞的增殖方式为有丝分裂。特异性免疫过程中,吞噬细胞吞噬抗原,处理后会将抗原呈递给 t 细胞。3(2019 全国卷 )基因工程中可以通过pcr 技术扩增目的基因。回答下列问题。(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以从基因文库中获得。基因文库包括_和_。(2)生物体细胞内的 dna 复制开始时, 解开 dna 双链的酶是 _。在体外利用 pcr技 术 扩 增 目 的 基 因 时 , 使 反 应 体 系 中 的 模 板dna解 链 为 单 链 的 条 件 是_ 。上述两个解链
7、过程的共同点是破坏了dna 双链分子中的 _。(3)目前在pcr 反应中使用taq 酶而不使用大肠杆菌dna聚合酶的主要原因是_。答案(1)基因组文库cdna 文库(2)解旋酶加热至 9095 氢键(3)taq酶热稳定性高,而大肠杆菌dna 聚合酶在高温下会失活解析(1)基因工程中的基因文库包括基因组文库和部分基因文库(cdna 文库)。(2)生物体细胞内的 dna 复制开始时,通过解旋酶解开dna 双链。在体外利用pcr 技术扩增目的基因时, 通过高温 (9095 )使反应体系中的模板dna 解链为单链。 上述两个解链过程的共同点是破坏了dna 双链分子中的氢键。(3)大肠杆菌 dna 聚合
8、酶不耐高温,在高温下会失活,而pcr 反应体系中加入的聚合酶需耐高温,故在 pcr反应中要用能耐高温的taq酶。4(2019 全国卷 )植物组织培养技术在科学研究和生产实践中得到了广泛的应用。回答下列问题。(1)植物微型繁殖是植物繁殖的一种途径。与常规的种子繁殖方法相比,这种微型繁殖技术的特点有 _( 答出 2 点即可 )。(2)通过组织培养技术,可把植物组织细胞培养成胚状体,再通过人工种皮(人工薄膜 )包装得到人工种子 (如图所示 ),这种人工种子在适宜条件下可萌发生长。人工种皮具备透气性的作用是 _ 。人工胚乳能够为胚状体生长提供所需的物质,因此应含有植物激素、 _和_等几类物质。(3)用
9、脱毒苗进行繁殖,可以减少作物感染病毒。为了获得脱毒苗,可以选取植物的_进行组织培养。(4)植物组织培养技术可与基因工程技术相结合获得转基因植株。将含有目的基因的细胞培养成一个完整植株的基本程序是_( 用流程图表示 )。答案(1)能保持植物原有的遗传特性,繁殖速度快(2)有利于胚状体进行呼吸作用矿质元素糖(3)茎尖(4)含目的基因的细胞 培养愈伤组织诱导分化小植株解析(1)植物微型繁殖属于植物组织培养技术,其优点是能保持植物原有的遗传特性、繁殖速度快等。(2)人工种皮具备透气性,使胚状体易获得氧气,有利于胚状体进行呼吸作用。植物的生长需要有机物和无机物等营养,人工胚乳中应含有植物激素、矿质元素和
10、糖等几类物质,这些物质都是胚状体生长所必需的。(3)植物的茎尖含病毒较少,适合用其进行组织培养获得脱毒苗。(4)植物组织培养主要包含脱分化和再分化两个过程,结合基因工程,培育转基因植株的过程为:含目的基因的细胞培养愈伤组织诱导分化小植株。5(2019 山东八校高三联考 )干扰素是动物或人体细胞受到病毒感染后产生的一种糖蛋白,具有抗病毒、抑制细胞增殖及抗肿瘤的作用。培育转干扰素基因马铃薯植株的主要流程如图所示。请回答下列问题:(1)过程中剪切质粒和目的基因时所需要的工具酶是_ ,使用上述酶的优点是 _( 答两点 )。(2)过程中将重组质粒导入根瘤农杆菌时,常用_处理根瘤农杆菌,使其成为感受态细胞
11、,最终使干扰素基因插入马铃薯细胞的_ 上。(3)图中过程和过程合称为_ 技术,该技术能体现细胞的_。(4)在分子水平上检测转基因是否成功包括三个方面:_ 。答案(1)pst、ecor可防止目的基因被破坏、 确保目的基因以唯一方向和质粒连接(2)ca2染色体 dna (3)植物组织培养全能性(4)检测转基因生物的dna 上是否插入了干扰素基因,检测干扰素基因是否转录出mrna,检测是否产生了干扰素解析(1)据图分析, pst 、ecor的识别位点位于目的基因的两侧,且酶切后产生的黏性末端不同,过程 中剪切质粒和目的基因时使用这两种限制酶,可以防止目的基因被破坏、确保目的基因以唯一方向和质粒连接。
12、(2)将重组质粒 (含有目的基因 )导入根瘤农杆菌,常用钙离子处理根瘤农杆菌,使其成为感受态细胞,以便重组质粒的导入,最终使干扰素基因插入马铃薯细胞的染色体dna 上。(3)图中过程 表示脱分化,过程 表示再分化,两者合称植物组织培养技术,能体现植物细胞具有全能性的特点。(4)在分子水平上检测转基因是否成功包括目的基因、mrna 和蛋白质水平的检测,即检测转基因生物的dna 上是否插入了干扰素基因,检测干扰素基因是否转录出mrna,检测是否产生了干扰素。6 (2019 河南省九师联盟高三质检)内皮抑素是从血管内皮细胞瘤中分离出的一种内源性血管生成抑制因子,能特异性地抑制内皮细胞增殖和迁移。某小
13、组为获得内皮抑素,构建分泌型内皮抑素基因表达载体,并在c6细胞(大鼠源性胶质瘤细胞 )中表达。具体操作如下:(1)构建分泌型内皮抑素基因表达载体采用相关技术提取1 日龄 sd 大鼠大脑半球组织中的总rna,检测 rna 质量和浓度。内皮抑素 cdna 的获得:以上述提取的rna 为模板,通过 _过程获得 cdna,并利用 pcr 技术体外扩增cdna。pcr 技术中除需目的基因作为模板外,还需要的条件有_ 和控制温度等。为避免目的基因和载体自身环化,酶切目的基因和载体时, 可用_ 酶切割,以保证目的基因和载体两侧具有_ 。(2)目的基因在 c6细胞中表达 (将目的基因导入c6细胞中,并表达 )
14、 培养 c6细胞时,为防止杂菌污染,可在培养基中加入一定量的_。若要检测目的基因是否成功整合到受体细胞的dna 上,可采用 _ 技术。 导 入c6细 胞 中 的 目 的 基 因 成 功 表 达 后 , 可 能 会 使 c6细 胞 在 大 鼠 体 内 的_ 受到抑制。答案(1)逆转录热稳定 dna 聚合酶 (taq酶)、两种引物、四种脱氧核苷酸两种限制性核酸内切 (限制)不同的黏性末端(2)抗生素dna 分子杂交增殖和迁移解析(1)遗传信息从 rna 到 dna 的过程叫逆转录。pcr 技术中除需目的基因作为模板外,还需要的条件有热稳定dna 聚合酶 (taq酶)、两种引物、四种脱氧核苷酸和控制
15、温度等。为避免目的基因和载体自身环化,酶切目的基因和载体时,可用双酶切法,即两种限制性核酸内切(限制)酶切割,以保证目的基因两侧和载体上具有不同的黏性末端。(2)在培养细胞时,为防止杂菌污染,可在培养基中加入一定量的抗生素。若要检测目的基因是否成功整合到受体细胞的dna 上,可采用 dna 分子杂交技术。根据题干信息可知,导入 c6细胞中的目的基因成功表达后,会使c6细胞在大鼠体内的增殖和迁移受到抑制。7(2019 广东中山市高三期末 )人血清白蛋白 (hsa)具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转hsa 基因奶牛,并通过乳腺生物反应器生产hsa,其主要技术流程如下图所示:回答下列
16、问题:(1)如上图所示,供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10 代以内的细胞,其原因是_ 。(2)sry-pcr法性别鉴定的基本程序是:提取牛胎儿成纤维细胞的dna ,经 pcr 反应体系扩增 sry 基因(y 染色体上特有的性别决定基因)片段,然后对扩增产物进行检测。注:、是引物,箭头是延伸方向。要大量获得sry 基因, pcr 扩增时需要加入两种引物:_( 填“引物”“ 引物 ”“ 引物 ” 或 “ 引物 ”) ,原 因是 dna聚 合酶 只能 从核 苷酸链 的_(填 “5 端 ” 或 “3 端 ”) 开 始 延 伸dna链 , 用 两 种 引 物 才 能 确 保_ 。除引物外, pcr
17、反应体系中还包含缓冲液、模板dna 、_和_ 等成分。通过sry-pcr 法进行性别鉴定,可获得更多的转hsa 基因_牛,以便其通过乳腺生物反应器生产人血清白蛋白。(3)在胚胎移植操作中,应对供体和受体母牛进行_ 处理,目的是使供体和受体处于相同的生理状态,使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。由此可见,胚胎移植的实质是 _ 。答案(1)10 代以内的细胞能保持正常的二倍体核型(2)引物和引物3端dna 两条链都被扩增dntp热稳定 dna 聚合酶 (taq酶)母(3)同期发情早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移解析(1)由于 10 代以内的细胞能保持正常的二倍体核型,因此图示供核的牛
18、胎儿成纤维细胞通常选用传代 10 代以内的细胞。(2)在 pcr 技术中,dna 聚合酶只能从核苷酸链的3端开始延伸 dna 链,用两种引物才能确保 dna 两条链都被扩增, 因此图中要利用 pcr 技术扩增 sry基因,应该选择的引物是引物 和引物 。 pcr反应体系中,除了有两种引物,还应该有缓冲液、模板 dna 、 dntp(原料)和热稳定 dna 聚合酶等成分。该实验是通过乳腺生物反应器生产人血清白蛋白,因此最终获得的是转 hsa 基因母牛。(3)在胚胎移植操作中,应对供体和受体母牛进行同期发情处理,以使供体和受体处于相同的生理状态,使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。由此可见,胚
19、胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。8(2019 全国卷 )培养胡萝卜根组织可获得试管苗,获得试管苗的过程如图所示。回答下列问题:(1)利用胡萝卜根段进行组织培养可以形成试管苗。用分化的植物细胞可以培养成完整的植株,这是因为植物细胞具有_。(2)步骤切取的组织块中要带有形成层,原因是_ 。(3) 从 步骤 到步 骤 需 要更换 新 的 培养 基 ,其原 因 是_。在新的培养基上愈伤组织通过细胞的 _过程,最终可形成试管苗。(4)步骤要进行照光培养,其作用是_ 。(5)经组织培养得到的植株,一般可保持原品种的_,这种繁殖方式属于 _繁殖。答案(1)全能性 (或答:形成完整植
20、株所需的全部基因) (2)形成层容易诱导形成愈伤组织(3)诱导愈伤组织形成和诱导愈伤组织分化形成试管苗所需的生长素和细胞分裂素的比例不同分化(或答:再分化 ) (4)诱导叶绿素的形成,使试管苗能够进行光合作用(5)遗传特性无性解析(1)植物细胞具有全能性,故用分化的植物细胞可以培养成完整的植株。(2)形成层细胞分化程度低、全能性高,易培养成功,所以要选取含有形成层的组织进行组织培养。(3)培养愈伤组织过程中,需要一定的营养和激素诱导等条件,步骤为脱分化过程,步骤为再分化过程,两者在培养过程中需要的生长素和细胞分裂素的比例不同,所以,从步骤到步骤 需要更换新的培养基。 在培养基上愈伤组织通过细胞
21、的分化(再分化 )过程,最终可形成试管苗。(4)试管苗需要照光培养,以便诱导叶绿素的形成,使试管苗能够进行光合作用,培养成正常的植株。(5)通过组织培养获得的植株是在离体植物器官、组织、细胞等的基础上获得的,其理论基础是植物细胞具有全能性,一般可以保持优良品种的遗传特性。植物组织培养技术没有经过两性生殖细胞的融合,属于无性繁殖。9(2019 四川绵阳一诊 )细胞工程是在细胞水平或细胞器水平上,按照人们的意愿改变细胞内的遗传物质进而获得对人类有益的生物或生物产品的一门技术。回答下列问题:(1) 植 物 组 织 培 养 过 程 中 , 将 离 体 植 物 细 胞 培 育 成 完 整 个 体 包 括
22、_ 两个基本过程,这种技术证明了已经发生分化的细胞,仍然具有_ 。(2)植物体细胞杂交过程中,若要将两细胞融合,需要先用_ 处理,然后诱导细胞融合。诱导融合的方法中常用的物理方法是_( 写两点即可 )。(3)在利用动物细胞工程制备单克隆抗体的过程中,b 淋巴细胞与骨髓瘤细胞用peg 处理后两两融合的细胞有 _种,要从中筛选出 _ 功能的细胞。单克隆抗体具有的优点是 _ ,因此广泛用于疾病的诊断等方面。答案(1)脱分化和再分化形成完整植株的潜能(2)纤维素酶和果胶酶离心、振动、电激 (任答两点即可 ) (3)3既能无限增殖又有产生特异性抗体特异性强、灵敏度高,可大量制备解析(1)植物组织培养需经
23、过脱分化和再分化两个过程,该过程利用了植物细胞的全能性,证明了已经发生分化的细胞仍具有形成完整植株的潜能。(2)在植物体细胞杂交之前,需用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞,获得原生质体,再诱导细胞融合。诱导细胞融合常用的物理方法有离心、振动、电激等。(3)b 淋巴细胞与骨髓瘤细胞用peg处理后形成的融合细胞有b 淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞三种,需要从中筛选出既能产生特异性抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞。单克隆抗体具有的优点是特异性强、灵敏度高,可大量制备。10(2019 重市七校高三联考 )为了预防线粒体缺陷可能导致的先天性心脏病、失明、肝衰竭等多种疾病,医生利用基因工
24、程技术对受精卵实施基因改造,在实施这些新技术时,医生将捐献者卵子的细胞核dna 移走,再将母亲卵子的细胞核dna 移入捐献者的卵子中。从基因角度看,以新技术孕育的试管婴儿将有一位父亲和两位母亲,即所谓的“三亲试管婴儿”。如图为某男婴孕育过程,回答下列问题:(1)图示过程中代表该男婴母亲卵母细胞的是_ ,由于女性的自然周期产生的卵子太少,故卵母细胞捐献者在取卵前通常要注射_激素,促使一次有更多的卵泡发育。(2)重组卵母细胞需培养到 _ 时才具备与精子受精的能力;在进行体外受精前要对精子进行 _处理;重组卵母细胞体外培养所需的气体主要是氧气和二氧化碳,二氧化碳的作用是 _ 。(3)该男婴的孕育过程
25、中依次使用了_、体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。(4)三亲试管婴儿的培育技术能避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代,为避免生出患有其他遗传病的孩子,孕妇应在孕期进行_ 。答案(1)卵母细胞 b促性腺(2)减数第二次分裂中期获能维持培养液的 ph (3)核移植(4)产前诊断 (基因诊断、羊水检测等 ) 解析(1)根据题干信息可知,图示过程中代表该男婴母亲卵母细胞的是卵母细胞b,其提供了细胞核;卵母细胞捐献者在取卵前通常要注射促性腺激素,促使一次有更多的卵泡发育。(4)三亲试管婴儿的培育技术能避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代,而其他的遗传病还需要进一步检测,可以在孕期进行产前诊断等措施
26、检查胎儿是否畸形,或是否携带遗传病致病基因。11(2019 陕西省第二次联考 )人的血清白蛋白 (has)在临床上需求量很大, 目前通常将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中,利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白,基本步骤如下:.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精子,通过体外受精,形成受精卵;.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵,形成重组细胞;.电脉冲刺激重组细胞,促使其形成早期胚胎;.将胚胎移植到受体母牛的子宫中,最终发育成转基因小牛。请回答下列问题:(1) 步 骤 中 , 卵 母 细 胞 与 精 子 结 合 过 程 中 防 止 多 精 入 卵 的 生 理 反 应 包 括_ 。自然条件下,受精是在雌性动物的
27、_内完成的。(2) 步 骤 中 , 将 人 的 血 清 白 蛋 白 基 因 导 入 奶 牛 受 精 卵 最 为 有 效 的 方 法 是_ 。导入基因前,需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,这一步骤称为_ 。(3)步骤中,进行动物早期胚胎的体外培养时,培养液中除了含有各种无机盐和有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外,还需要添加_和动物血清。一般情况下,通常在合成培养基中加入一定量的抗生素,其目的是_ 。(4)步骤中,应选择性别为 _的奶牛胚胎进行移植。答案(1)透明带反应、卵细胞膜反应输卵管(2)显微注射技术构建基因表达载体(3)激素防止杂菌污染(4)雌性解
28、析(1)防止多精入卵的两道屏障为透明带反应、卵细胞膜反应。自然条件下,受精作用的场所为输卵管。(2)将目的基因导入动物细胞的方法为显微注射技术。将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,称为构建基因表达载体。(3)早期胚胎培养过程中,培养液中除了含有各种无机盐和有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外,还需要添加激素和动物血清。为了防止污染,在合成培养基中还需要加入抗生素。(4)血清白蛋白要从乳汁中提取,只有雌性奶牛才能产生乳汁,因此胚胎移植时,必须选取雌性奶牛的胚胎进行移植。12(2019 山东临沂联考 )如图是获得药用乳腺生物反应器转基因小鼠的流程图。回答下列问题:
29、(1)图中在过程前提取mrna 时,提取液中需添加rna 酶抑制剂,其目的是_ 。 通过 pcr扩增目的基因的过程中, 两个引物是 _的结合位点,也是子链延伸的起点。(2)图中过程在构建基因表达载体时,有时需要使用两种限制酶切割目的基因所在的片段,同时也用这两种限制酶切割质粒,这样做的优点是_ 。(3) 图 中 过 程 获 得 的 小 鼠es 细 胞 在 饲 养 层 细 胞 上 培 养 , es 细 胞 表 现 为_的 特 点 。 过 程 中 要 将 含 外 源 基 因 的es 细 胞 导 入 囊 胚 的_ ,然后进行胚胎移植。若要一次获得多只相同性状的后代,胚胎移植前应采用 _ 技术,通常选
30、择发育良好、形态正常的囊胚或_进行操作。(4)若获得的已整合药用蛋白基因的转基因小鼠分泌的乳汁中检测不到药用蛋白,根据中心法则分析,其可能的原因是_ 。答案(1)防止 mrna 被 rna 酶水解热稳定 dna 聚合酶 (taq酶) (2)避免目的基因及质粒的自身环化和随意连接(3)只分裂而不发生分化内细胞团胚胎分割桑椹胚(4)药用蛋白基因没有转录或翻译解析(1)图中在目的基因获取前提取mrna 时,提取液中需添加rna 酶抑制剂,其目的是防止提取的 mrna 被 rna 酶分解。通过 pcr 扩增目的基因的过程中,两个引物是热稳定 dna 聚合酶 (taq酶)的结合位点,也是子链延伸的起点。
31、(2)图中过程在构建基因表达载体时,使用两种限制酶同时切割目的基因和质粒,这样做的优点是避免目的基因及质粒的自身环化和随意连接。(3)小鼠 es 细胞在饲养层细胞上培养,es细胞表现为只分裂而不发生分化的特点。囊胚的内细胞团细胞发育成胎儿的各种组织,所以过程中要将含外源基因的es 细胞导入囊胚的内细胞团,然后进行胚胎移植。胚胎移植前,通常选择发育良好、形态正常的囊胚或桑椹胚阶段的胚胎进行分割,采用胚胎分割技术,一次可获得多只相同性状的后代。(4)由于转基因表达产物存在于母羊的乳汁中,检测其体内是否出现该药用蛋白,在分子水平上的检测方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原抗体杂交,若
32、有杂交带出现表明药用蛋白基因已经转录或翻译,形成蛋白质产品;若检测不到药用蛋白,说明药用蛋白基因没有转录或翻译。13(2019 开封高三定考 )a 病毒是一种 dna 病毒,外壳蛋白具有抗原性, 能引起人类患病。生物制药厂针对该病毒所致疾病,提出下列相应药物的生产思路。据此回答下列问题:(1)思路一:利用细胞工程制备单克隆抗体对小鼠注射 _ ,可在小鼠体内获得相应的b 淋巴细胞。该 b 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合时,常用灭活的病毒来诱导。起诱导融合作用的是灭活病毒的_(填“糖蛋白” “dna ” 或“rna ”) 。 诱 导 细 胞 融 合 后 , 需 要 用 特 定 的 选 择 培 养 基 进
33、 行 筛 选 , 目 的 是 去 除_ 。 而 后 , 还 需 进 行 _操 作 , 多 次 重 复 。 该 操 作 的 目 的 是_ 。常用 _培养基在小鼠体外培养所需杂交瘤细胞。该培养基还需添加的物质是_ ,原因是 _ 。(2)思路二:利用基因工程制备疫苗获得 a 病毒外壳蛋白基因m:用 xho和 sal两种限制性核酸内切酶分别处理a 病毒的 dna ,酶切位点及完全酶切产物分离结果如图。完整的基因m 位于泳道 _(填“甲”或“乙” )中。将 a 病毒外壳蛋白基因m 与在人体中不能复制但能有效表达外源基因的牛痘病毒重组,制备出新型疫苗 (用牛痘病毒感染鸡胚细胞,将鸡胚细胞转入相应液体培养基
34、中培养,在培养基中加入含基因m 的重组质粒,并使基因m 与牛痘病毒 dna 在鸡胚细胞内发生dna重组,分离得到重组病毒疫苗 )。与一般单纯 a 病毒疫苗相比,预测该疫苗可能存在的优势是_ 。答案(1)a 病毒的外壳蛋白糖蛋白未融合的细胞和同种核融合成的细胞克隆化培养和抗体检测获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞合成血清、血浆等一些天然成分人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚(2)乙可同时预防 a 病毒和牛痘病毒解析(1)据题干信息可知, a 病毒的外壳蛋白具有抗原性。为了在小鼠体内获得相应的浆细胞,需要对小鼠注射a 病毒的外壳蛋白。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用
35、,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。诱导细胞融合后,需用特定的选择培养基进行筛选。在该培养基上,未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂种细胞才能生长。因此用特定的选择培养基进行筛选的目的是去除未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞。对上述经过选择性培养的杂交瘤细胞,还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后,将杂交瘤细胞在体外条件下用合成培养基培养。由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚,因此在该合成培养基中还需加入血清、血浆等天然成分。(2)根据酶切位点及完全酶切产物的分离结果可知,用 xho和 sal两种限制性核酸内切酶分别处理 a 病毒的 dna ,完全酶切产物分别有3 种和 4 种,用 sal处理可破坏基因m,故完整的基因 m 位于泳道乙中。 与一般单纯疫苗相比, 新型疫苗可同时预防a 病毒和牛痘病毒,存在较大优势。14(2019 开封市高三第一次模
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