机能学设计性实验苦瓜提取物对高血糖家兔的影响

1、机能学设计性实验苦瓜提取物对高血糖家兔的影响实验目的实验目的学习设计实验的基本方法学习设计实验的基本方法学习给家兔灌胃给药的方法及一些基本的实验操作学习给家兔灌胃给药的方法及一些基本的实验操作了解糖尿病的危害、致病因素及治疗方法了解糖尿病的危害、致病因素及治疗方法第1页/共23页糖尿病（糖尿病（diabetes）是由遗传因素、是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、

2、水和电解质等一系列代谢紊乱蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。综合征。第2页/共23页第3页/共23页第4页/共23页第5页/共23页实验原理实验原理 苦瓜含有多种降糖成分，主要有甾苷、皂甙、苦瓜含有多种降糖成分，主要有甾苷、皂甙、脑苷、生物碱及多肽类物质等。脑苷、生物碱及多肽类物质等。 抗自由基作用抗自由基作用 类胰岛素作用类胰岛素作用 刺激刺激B B细胞分泌胰岛素细胞分泌胰岛素 修复受损修复受损B B细胞，改善其功能细胞，改善其功能 影响葡萄糖代谢酶影响葡萄糖代谢酶第6页/共23页第7页/共23页实验动物实验动物 家兔，雌雄各半，体重家兔，雌雄各半，体重2.00.2kg，50只

3、只（已制成（已制成型糖尿病模型，选血糖值型糖尿病模型，选血糖值111 mmolL的动物作为高血糖模型），同期饲养的的动物作为高血糖模型），同期饲养的健康家兔健康家兔10只，雌雄各半，遵义医学院动物实只，雌雄各半，遵义医学院动物实验中心提供。验中心提供。第8页/共23页主要仪器及主要试剂、药品主要仪器及主要试剂、药品 兔灌胃器、离心机、兔实验台、兔灌胃器、离心机、兔实验台、722型分光光型分光光度仪、度仪、D101大孔吸附树脂柱等。大孔吸附树脂柱等。 葡萄糖酶酚混合试剂、格列本脲、新鲜苦瓜、葡萄糖酶酚混合试剂、格列本脲、新鲜苦瓜、70乙醇、乙醇、90乙醇等。乙醇等。第9页/共23页（一）、动物模

4、型的制备（一）、动物模型的制备 取质量取质量(2.00.2)kg的健康家兔的健康家兔50只，正常饲只，正常饲料喂养料喂养1周后，耳静脉注射四氧嘧啶周后，耳静脉注射四氧嘧啶120 mgkg，72 h后耳后静脉取血后耳后静脉取血(取血前禁食取血前禁食8 h)，测空腹血，测空腹血糖，选血糖值糖，选血糖值111 mmolL叫的动物作为高血叫的动物作为高血糖模型。糖模型。实验方案实验方案第10页/共23页（二）、家兔经口灌胃给药方法（二）、家兔经口灌胃给药方法 把实验兔放在实验台上，用左手掌从把实验兔放在实验台上，用左手掌从头部握住兔头颈部，将其固定，用拇指和头部握住兔头颈部，将其固定，用拇指和食指使劲

5、压迫其口角部使口张开。然后，食指使劲压迫其口角部使口张开。然后，右手持抽好药液的灌胃器，用有弧度灌面右手持抽好药液的灌胃器，用有弧度灌面从右口角处慢慢插入。从右口角处慢慢插入。 第11页/共23页乙醇洗脱液乙醇洗脱液滤液捣碎，用捣碎，用70%乙乙醇回流提取醇回流提取3次次脱色，滤过，滤脱色，滤过，滤液减压浓缩，得液减压浓缩，得苦瓜提取物苦瓜提取物D101大孔吸附大孔吸附树脂柱，用水洗树脂柱，用水洗至无色，然后用至无色，然后用90乙醇洗脱乙醇洗脱苦瓜提取物苦瓜提取物苦瓜苦瓜提取物的提取过程苦瓜提取物的提取过程第12页/共23页高血糖模型家兔50只家兔10只不做处理不做处理空白对空白对照组照组10

6、只只大剂量大剂量组组10只只中剂量中剂量组组10只只小剂量小剂量组组10只只格列本格列本脲组脲组10只只给药前、给药后给药前、给药后1h、2h、3h、4h、5h采集血液样本采集血液样本高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只不做处理不做处理高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只空白对空白对照组照组10只只不做处理不做处理高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只大剂量大剂量组组10只只空白对空白对照组照组10只只不做处理不做处理高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只中剂量中剂量组组10只只大剂

7、量大剂量组组10只只空白对空白对照组照组10只只不做处理不做处理高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只小剂量小剂量组组10只只中剂量中剂量组组10只只大剂量大剂量组组10只只空白对空白对照组照组10只只不做处理不做处理高血糖模型家兔高血糖模型家兔50只只家兔家兔10只只生理生理盐水盐水10ml/kg灌胃给提灌胃给提取液取液300mg/kg灌胃给灌胃给提取液提取液150mg/kg灌胃给灌胃给提取液提取液75mg/kg灌胃给灌胃给格列本格列本脲脲75mg/kg第13页/共23页测定各管的吸光度测定各管的吸光度A波长为：波长为：520nm试剂与标本混试剂与标本混匀后，在匀后，在37水浴

8、箱内静置水浴箱内静置10min酶酚混合试酶酚混合试剂剂3ml,加血加血清清0.02ml离心离心2000转转/5min血液样本血液样本血清血清第14页/共23页血糖浓度A标本/A标准标准液浓度（标准液为5mmol/L）记录血糖值组别 血糖值（mmol/L） 给药前 1h末 2h末 3h末 4h末 5h末空白对照组苦瓜小剂量组苦瓜中剂量组苦瓜大剂量组格列本脲组正常家兔组各组血糖浓度值第15页/共23页根据实验结果可预测以下结论：1、小剂量苦瓜提取液与优降糖比较，有、小剂量苦瓜提取液与优降糖比较，有降血糖效果。降血糖效果。2、苦瓜提取液随着剂量的增加降血糖效、苦瓜提取液随着剂量的增加降血糖效果更加明显。果更加明显。第16页/共23页数据处理方法数据处理方法 以血糖浓度为统计量，结果采用以血糖浓度为统计量，结果采用SPSS统计软件进行组间统计软件进行组间2检验。检验。第17页/共23页讨论讨论为什么选择苦瓜作为研究对象？为什么选择苦瓜作为研究对象？为什么要选用家兔作为实验动物？为什么要选用家兔作为实验动物？第18页/共23页第19页/共23页第20页/共23页血糖浓度A标本/A标准标准液浓度（标准液为5mmol/L）记录血糖值组别 血糖值（mmol/L） 给药前 1h末 2h末 3h末 4h末 5h末空白对照组苦瓜小剂量组苦瓜中剂量组苦瓜大剂量组格列