伴放线放线杆菌脂多糖对组织特异性单核巨噬细胞膜表面受体及活性氧、一氧化氮表达的影响

1、伴放线放线杆菌脂多糖对组织特异性单核 / 巨噬细胞膜表面受体 及活性氧、一氧化氮表达的影响目的研究新西兰兔四个部位来源（血液、肺、肝、腹腔）的单核/ 巨噬细胞对伴放线放线杆菌（Aa）吞噬作用异质性，比较在 Aa脂多糖刺激下，正常和高 脂血症新西兰兔四个部位来源的单核 / 巨噬细胞膜表面受体 CD14、TLR2、TLR4、 SR-A和MHCJ表达的变化以及外源性IL-10对它们的影响，并检测氧化应激反 应产物ROSffi NO的释放情况，为研究牙周病与全身系统性疾病的关联提供理论 依据。方法建立新西兰兔高脂血症模型和同一个体不同组织来源（血液、肺、腹 腔、肝脏）单核 / 吞噬细胞的分离、鉴定、纯

2、化及培养研究模型。1.3 只健康新西兰兔，以流式细胞术检测不同时间点下单核/ 巨噬细胞（血液、肺、腹腔、肝脏）吞噬FITC标记的Aa吞噬指数。2.将6只健康和6只高脂 血症新西兰兔单核/吞噬细胞（血液、肺、腹腔、肝脏）分为 5组：RPMI1640+ 单核/巨噬细胞、1卩g/ml E.coli-LPS +单核/巨噬细胞、1卩g/ml Aa-LPS+单核 / 巨噬细胞、100ng/mllL-10+ 单核/ 巨噬细胞、100ng/ml IL-10 + 1 卩 g/ml Aa-LPS +单核/巨噬细胞，通过实时荧光定量聚合酶链反应检测膜表面受体CD14、 TLR2、TLR4 SR-A和 MHCfl基因

3、表达的变化。3.用硝酸还原酶法检测和 DCFH-D荧光检测单核/巨噬细胞ROSffi NO的释放 情况。结果 1.兔四个部位单核 /巨噬细胞吞噬能力具有差异性： 1.5h 内，随着孵 育时间增加，AM和PM对Aa吞噬能力逐渐升高，Mo和KC的吞噬能力在1h达到 高峰；Mo AM PM和 KC吞噬功能存在明显差异，孵育 0.5h吞噬指数AM PM> Mo KC，1.0h 时 AM> PM> Mo KC，1.5h 时 AM> PM> KC> Mq2. Realtime PCR检测结果发现：正常新西兰兔 Mo AM PM KC受1卩 g/mlAa-LPS刺激24h

4、后，与空白组相比较 TLR2 SRA和MHCJ基因表达量均上调(P<0.05)，除了 Mo的 CD14下调，KC的 TLR4受抑制(P<0.05)，其余表 达均上调(P<0.05)。1卩g/ml Aa-LPS刺激高脂新西兰兔 24h后，Mo AM PM KC的CD14 SRA和MHCJ基因表达都升高(P<0.05)。正常和高脂组，外源性100ng/ml IL-10作用于被Aa-LPS活化的单核/巨噬细胞后，膜受体CD14TLR2 TLR4 MHCB基因表达受到了抑制(P<0.05)， SRA上调(P<0.05)

5、 。3.正常兔和高脂兔组，1卩g/ml Aa-LPS刺激下Mo AM PM KC与空白组比较，都释放大量 ROS(P<0.05)，AM PM和KC组的NO释放 量上调 (P<0.05)。IL-10抑制了 Aa-LPS活化的巨噬细胞上升的RO别NC水平(P<0.05)。 结论1.兔不同部位单核/巨噬细胞的功能和表型具有异质性，对 Aa的吞噬能力 不同，可能是造成牙周病对不同部位影响不同的重要原因。2. 正常和高脂血症状态下单核/巨噬细胞CD14 TLR2 MHCH、SR-A及TLR4的基因的表达均存在着部位差异。正常兔 1卩g/ml Aa-LPS刺激下Mo和KC主要 为防御性免疫反应，特异性免疫反应和炎症效应尚未启动，AM和 PM则进入炎症反应阶段。高脂兔KC处于防御性免疫反应，Mo AM和PM进入炎症阶段。IL-10可以通过升高SR-A并下降CD