消毒灭菌技术及效果监测

1、l 2l灭菌杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。l消毒杀灭或除去病原微生物。l防腐抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。l无菌不含有任何的活菌一消毒与灭菌技术 基本概念3二消毒与灭菌方法 1物理灭菌法l热力灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌）l辐射灭菌法（紫外线、电离幅射、微波）l滤过除菌法（除菌滤器、适用物品）l其他超声波（机制：裂解细菌，主要用于粉碎细胞、提取抗原）干燥与低温抑菌4热力灭菌法l原理使微生物蛋白质，酶变性凝固；膜结构破坏微生物体内的DNA断裂，核蛋白解体。l方法 干热灭菌法 湿热灭菌法热力灭菌法热力灭菌法5 焚烧焚烧-最彻底的灭菌方法最彻底的灭菌方法烧灼烧灼-直接用火焰灭菌方法直接

2、用火焰灭菌方法 如接种环、试管口、三角瓶口如接种环、试管口、三角瓶口干烤干烤-加热加热160-1160-170 2h70 2h 玻璃器皿、陶瓷玻璃器皿、陶瓷1 1、干热灭菌法、干热灭菌法灭菌效果：可杀死营养体和芽胞灭菌效果：可杀死营养体和芽胞如尸体等如尸体等62.2.湿热灭菌法湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法（高压蒸汽灭菌法（热压灭菌法）热压灭菌法）最有效的湿热灭菌法最有效的湿热灭菌法 121 121 15-20mim15-20mim（杀芽胞（杀芽胞) )煮沸消毒法煮沸消毒法水煮水煮100 5100 5mim(mim(杀繁殖体杀繁殖体)-2)-2h h( (杀芽胞杀芽胞) )流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒

3、法巴氏消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽水蒸汽100 15-30100 15-30mimmim( (杀繁殖体杀繁殖体) )反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌( (杀芽胞）杀芽胞）较低的温度较低的温度 61 3061 30mim/71 30smim/71 30s（杀致病菌）（杀致病菌）效果比干热好效果比干热好7 利用化学药物（消毒防腐剂）破利用化学药物（消毒防腐剂）破坏微生物的化学组成、物理结构和生坏微生物的化学组成、物理结构和生理活动，达到防腐灭菌目的。理活动，达到防腐灭菌目的。消毒与灭菌方法消毒与灭菌方法 2 2化学消毒法化学消毒法 日常监测重点科室（手

4、术室、层流洁日常监测重点科室（手术室、层流洁净病房、净病房、ICUICU、产房、新生儿科、母婴同、产房、新生儿科、母婴同室病房、透析室、血液病房、烧伤病房、室病房、透析室、血液病房、烧伤病房、供应室、内镜室、治疗室、换药室供应室、内镜室、治疗室、换药室 发生医院内感染时应在发生感染的科发生医院内感染时应在发生感染的科室及相关科室采样监测室及相关科室采样监测 消毒灭菌效果监测：消毒灭菌效果监测： 使用中消毒液或无菌器械保存液使用中消毒液或无菌器械保存液 灭菌设备灭菌设备（压力蒸汽灭菌器、环氧乙烷灭菌器）（压力蒸汽灭菌器、环氧乙烷灭菌器） 紫外线灯紫外线灯 灭菌物品灭菌物品 环境卫生学监测：环境卫

5、生学监测： 空气空气 物表物表 医务人员手医务人员手 1 1、采样时间：消毒处理后、操作前进行采样。、采样时间：消毒处理后、操作前进行采样。 2 2、布点及采样方法：、布点及采样方法： （1 1）类环境布点、采样方法：依据类环境布点、采样方法：依据医院洁净手术部建筑医院洁净手术部建筑技术规范技术规范(GB50333-2002)10.3.13(GB50333-2002)10.3.13、 手术区：需要特别保护的手术台及其周围区域。手术区：需要特别保护的手术台及其周围区域。 级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推0.9m0.9m、两、两端至少各外推端至少

6、各外推0.4m0.4m后（包括手术台）的区域；后（包括手术台）的区域； 级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推级手术室的手术区是指手术台两侧边至少各外推0.6m0.6m、两、两端至少各外推端至少各外推0.4m0.4m后后( (包括手术台包括手术台) )的区域；的区域； 级手术室的手术区是指手术台四边至少各外推级手术室的手术区是指手术台四边至少各外推0.4m0.4m后（包后（包括手术台）的区域。括手术台）的区域。 级手术室不分手术区和周边区。级手术室不分手术区和周边区。 周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。 将普通营养琼脂平皿（直径为将

7、普通营养琼脂平皿（直径为9cm9cm）放在）放在室内手术区和周边区各采样点处，采样高度离室内手术区和周边区各采样点处，采样高度离地面地面0.80.8米，采样时将平皿盖打开，扣放于米，采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，平皿旁，暴露暴露30 30 分钟分钟，盖好，于，盖好，于3737培养培养2424小时小时，分别计数手术区和周边区的平均菌落数，分别计数手术区和周边区的平均菌落数。 依据依据消毒技术规范消毒技术规范( (卫生部卫生部20022002年版年版) ) 3.17.83.17.8。室内面积。室内面积30M30M2 2，设内、中、外对角线，设内、中、外对角线3 3点，点，内、外点布点部位距墙壁

8、内、外点布点部位距墙壁1M1M处；室内面积处；室内面积30 M30 M2 2，设，设4 4角及中央角及中央5 5点（双对角线），点（双对角线），4 4角的布点部位距墙壁角的布点部位距墙壁1M1M处。处。 将普通营养琼脂平皿将普通营养琼脂平皿( (直径为直径为9cm)9cm)放在室内各采放在室内各采样点处，采样高度距地面样点处，采样高度距地面1.51.5米（米（GB15982-1995GB15982-1995：0.80.81.51.5米），采样时将平皿盖打开，扣放于平皿米），采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露旁，暴露5 5分钟分钟，盖好立即送检，于，盖好立即送检，于3737培养培养4848小

9、时小时，计数平板菌落数，并计算出空气细菌菌落总数。计数平板菌落数，并计算出空气细菌菌落总数。 1 1、（消毒前）前提将放置平皿的采样台准备好。、（消毒前）前提将放置平皿的采样台准备好。 2 2、开门方式：自动门、开门方式：自动门, ,推拉式弹簧门推拉式弹簧门, ,有把手的门。有把手的门。 3 3、行走路线（尽可能少、行走路线（尽可能少 在室内走动）在室内走动） 动作要动作要 轻。先布皿轻。先布皿 后开盖。后开盖。 4 4、动态环境、动态环境 5 5、同一房间空气、物表、同一房间空气、物表 采样，先采空气，后采样，先采空气，后 采物表；最好由同一采物表；最好由同一 人操作人操作 。 5 4 3

10、2 1 1 1、采样时间：消毒处理后进行采样。、采样时间：消毒处理后进行采样。 2 2、采样方法：、采样方法： 用用5cm5cm5cm5cm的标准灭菌规的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有含相应中和格板，放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子剂的无菌洗脱液的棉拭子1 1支，在规格板内横支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各竖往返均匀涂擦各5 5次，并随之转棉拭子，连次，并随之转棉拭子，连续采样续采样4 4个，剪去手接触部位后，投入个，剪去手接触部位后，投入10ml10ml含含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌相应中和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌落总数和致病菌检测。落

11、总数和致病菌检测。 门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样擦采样 3 3、检测方法：、检测方法： （1 1）细菌总数检测：检测方法按）细菌总数检测：检测方法按消毒技术规消毒技术规范范3.17.6. 33.17.6. 3（1 1）执行。小型物体表面的结果计）执行。小型物体表面的结果计算，用算，用cfu/cfu/件。件。 （2 2）致病菌检测：检测方法按）致病菌检测：检测方法按消毒技术规范消毒技术规范3.17.153.17.15原则执行。原则执行。 4 4、结果判定、结果判定 、类区域：细菌总数类区域：细菌总数5cfu/cm5cfu/cm2 2，并未检，并未

12、检出致病菌为消毒合格。出致病菌为消毒合格。 类区域：细菌总数类区域：细菌总数10cfu/cm10cfu/cm2 2，并未检出，并未检出致病菌为消毒合格。致病菌为消毒合格。 类区域：细菌总数类区域：细菌总数15cfu/cm15cfu/cm2 2，并未检出，并未检出致病菌为消毒合格。致病菌为消毒合格。l 1 1、空气、物表采样由同一人操作。、空气、物表采样由同一人操作。 2 2、物表采样应由近及远，兼顾上下中左右、物表采样应由近及远，兼顾上下中左右 3 3、母婴同室、血透室属、母婴同室、血透室属类环境类环境 4 4、样品标识一定要清楚，能朔源、追踪，以便整、样品标识一定要清楚，能朔源、追踪，以便整

13、 改。改。 5 5、致病菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、致病菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 溶血性链球菌（产房、新生儿科、母婴同室加溶血性链球菌（产房、新生儿科、母婴同室加 测沙门氏菌）测沙门氏菌） 6 6、采样棉签在现场要做空白对照。、采样棉签在现场要做空白对照。 1 1、采样时间：消毒后立即采样。、采样时间：消毒后立即采样。 2 2、采样方法：被检人五指并拢，用浸有含、采样方法：被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦面从指根到指端往返涂擦2 2次次( (一只手涂擦面积一只手涂擦面积约约30cm

14、30cm2 2) )，并随之转动采样的棉拭子，剪去操，并随之转动采样的棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入作者手接触部位，将棉拭子投入10ml10ml含相应中含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌落总数和剂的无菌洗脱液试管内，进行细菌菌落总数和致病菌检测。和致病菌检测。 （1 1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡2020秒或用力振打秒或用力振打8080次，用无菌吸管吸取次，用无菌吸管吸取1.0ml1.0ml待检样品接待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种种于灭菌平皿，每一样本接种2 2个平皿，内加入已溶化个平皿，内加入已溶化的的45454848

15、的营养琼脂的营养琼脂15ml15ml18 ml18 ml，边倾注边摇匀，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置待琼脂凝固，置36361 1温箱培养温箱培养48h48h，计数菌落数。，计数菌落数。 采样结果计算方法：采样结果计算方法： 细菌总数（细菌总数（cfu/cmcfu/cm2 2）= = （2 2）致病菌检测：按）致病菌检测：按消毒技术规范消毒技术规范3.17.153.17.15原原则执行。则执行。 平板上菌落数平板上菌落数稀释倍数稀释倍数 采样面积（采样面积（cmcm2 2） 、类区域工作人员：细菌总数类区域工作人员：细菌总数5cfu/cm5cfu/cm2 2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜

16、绿假单胞菌并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌为消毒合格。为消毒合格。 类区域：细菌总数类区域：细菌总数10cfu/cm10cfu/cm2 2，并未检出金，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。 类区域：细菌总数类区域：细菌总数15cfu/cm15cfu/cm2 2，并未检出金，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。 母婴同室、婴儿室、新生儿科及儿科病房的工作母婴同室、婴儿室、新生儿科及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链人员手上，不得检出沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、黄色葡萄

17、球菌。球菌、黄色葡萄球菌。 1 1、分清普通卫生洗手和外科洗手卫生手、分清普通卫生洗手和外科洗手卫生手消毒。消毒。 外科洗手标准值外科洗手标准值 ? ? 类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌( (产房、母婴同室、新生儿科加产房、母婴同室、新生儿科加测沙门氏菌、溶血性链球菌测沙门氏菌、溶血性链球菌) ) 类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌类环境：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 1 1、使用中消毒液有效成分的测定、使用中消毒液有效成分的测定 2 2、使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量的测定、使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量的测定 （1 1）涂抹法：

18、）涂抹法： （2 2）倾注法：用无菌吸管吸取消毒液）倾注法：用无菌吸管吸取消毒液1.0 ml1.0 ml，加入，加入到到9ml9ml含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别取取0.5ml0.5ml放入放入2 2只灭菌平皿内，加入已溶化的只灭菌平皿内，加入已溶化的45454848的营养琼脂的营养琼脂15ml15ml18 ml18 ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置一平板置2020培养培养7 7天，观察霉菌生长情况；另一个平板天，观察霉菌生长情况；另一个平板置置363611温箱培养温箱培养72h72h，计数菌落数。同时

19、按，计数菌落数。同时按3.17.153.17.15检测致病菌。检测致病菌。 使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量（使用中消毒液或无菌器械保存液染菌量（cfu/mlcfu/ml）= =每个平板上的菌落数每个平板上的菌落数2020 结果判定：消毒液染菌量结果判定：消毒液染菌量100cfu/ml100cfu/ml，并未检出致，并未检出致病菌为合格。病菌为合格。 1、必须是使用中消毒液或无菌器械保存液。、必须是使用中消毒液或无菌器械保存液。 2 2、要求采样后、要求采样后1h1h内检测，实际工作中由于各种内检测，实际工作中由于各种原因做不到，采原因做不到，采5ml5ml样品放在灭菌试管中（试管中不样品放

20、在灭菌试管中（试管中不放中和剂）带回实验室。放中和剂）带回实验室。 3 3、样品名称一定要标识清楚，不仅要注明采样样品名称一定要标识清楚，不仅要注明采样地点，而且要注明消毒液的名称、有效浓度等，例：地点，而且要注明消毒液的名称、有效浓度等，例：劲康消毒剂、劲康消毒剂、0.1%0.1%健之素消毒液、健之素消毒液、80%80%漂白粉溶液、漂白粉溶液、 0.5%0.5%洗必泰等洗必泰等标识标识都是不正确的。都是不正确的。 4 4、消毒液细菌菌落总数标准值、消毒液细菌菌落总数标准值100cfu/ml100cfu/ml，无，无菌器械保存液细菌菌落总数标准值是不得检出。菌器械保存液细菌菌落总数标准值是不得

21、检出。 5 5、致病菌检测包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单、致病菌检测包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、溶血性链球菌。胞菌、沙门氏菌、溶血性链球菌。 1 1、采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内、采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内采样。采样。 2 2、采样方法：按、采样方法：按消毒技术规范消毒技术规范3.17.5.23.17.5.2原则执行原则执行 3 3、结果判定：阳性对照在、结果判定：阳性对照在2424小时内应有菌生小时内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长长，阴性对照在培养期间应无菌生长, ,如需如需- -厌氧厌氧菌及霉菌培养管内均为澄清或虽显浑浊但经证明菌及霉菌培养管内均为

22、澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格；如需并非有菌生长，判为灭菌合格；如需- -厌氧菌及霉厌氧菌及霉菌培养管中任何菌培养管中任何1 1管显浑浊并证实有菌生长，应重管显浑浊并证实有菌生长，应重新取样，分别同法复试新取样，分别同法复试2 2次，除阳性对照外，其他次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。 l 1 1、无菌检验应在洁净度为、无菌检验应在洁净度为100100级单级单向流空气区域内进行，最好把灭菌包带向流空气区域内进行，最好把灭菌包带回在百级实验室打开。应严格遵守无菌回在百级实验室打开。应严格遵守无菌操作，避免微生物

23、污染。操作，避免微生物污染。l 2 2、应采有效期内的样品（高压灭菌：应采有效期内的样品（高压灭菌：一般是两周；还氧乙烷：两年）一般是两周；还氧乙烷：两年）l1 1、监测方法：、监测方法：l 工艺监测工艺监测l 化学监测（化学指示卡、指示胶带）化学监测（化学指示卡、指示胶带）l 生物监测生物监测l2 2、常用灭菌器种类、常用灭菌器种类l 压力蒸汽灭菌器压力蒸汽灭菌器l 环氧乙烷灭菌器环氧乙烷灭菌器 l3 3、生物指示物、生物指示物l 嗜热脂肪杆菌芽胞（嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953ATCC7953）, ,压力蒸汽灭菌器压力蒸汽灭菌器l 枯草杆菌黑色变种芽胞（枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9

24、372ATCC9372）环氧乙烷灭菌器）环氧乙烷灭菌器 生物指示菌片布放方法（生物指示菌片布放方法（消毒技术规范消毒技术规范 ） （1 1）将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装入灭）将两个嗜热脂肪杆菌芽胞菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。 （2 2）下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气）下排气压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包口上方放置一个标准试验包 预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包排气口上方放置一个标准试验包 手提压力蒸汽灭菌器：通用贮物盒代替标

25、准试手提压力蒸汽灭菌器：通用贮物盒代替标准试验包，贮物盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位验包，贮物盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两支灭菌试管内，贮物盒放于手提压力蒸汽灭菌器的两支灭菌试管内，贮物盒放于手提压力蒸汽灭菌器底部。底部。 l 枯草杆菌黑色变种芽胞（枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9372ATCC9372）菌片事）菌片事先放入一次性注射器中（每个注射器中放先放入一次性注射器中（每个注射器中放1 1个菌个菌片），然后封装在一剥离式包装袋内。菌片在灭片），然后封装在一剥离式包装袋内。菌片在灭菌器内布放的数量应足够多，应放在那些在性能菌器内布放的数量应足够多，应放在那些在性能鉴定时发现是最难灭菌的部位，并均匀分布于整鉴定时发现是最难灭菌的部位，并均匀分布于