AFP作业指导书2.0

1、甲胎蛋白（ afp）检测作业指导书1. 检验目的afp 来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。7095% 的原发性肝癌患者的afp 升高，越是晚期， afp 含量越高。但尚未发现 afp 含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。 afp 含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。在转移性肝癌中，afp 一般低于350-400 iu/ml 。afp 中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及hbsag 携带者。不推荐将 afp 用于普通人群的癌症筛查。孕妇血清或羊水afp 升高提示胎儿脊柱裂 , 无脑症, 食管atresia 或多胎 ,afp降低( 结合孕妇年龄 ) 提示未出生的婴儿有 downs综合征的

2、危险性2.检验原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。第1步：10l 标本、生物素化的抗 afp 单克隆抗体和钌（ ru ）标记的抗 afp 单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，3.性能参数：3.1 线性范围：线性检测结果见afp方法学验证记录。3.2 精密度 : 批内 n=20,批间 n=20。

3、批内批间均值 ng/ml sd ng/ml cv% 均值 ng/ml sd ng/ml cv% 1.04 0.03 1.26 11.35 0.3 2.64 3.3 准确度 : 检测结果见临检中心 / 江苏省室间质评结果回报记录。3.4 可报告范围 : 0.605-60500 ng/ml，最大稀释倍数为 50倍。3.5 测量区间：血清 / 血浆: 0.605-1210ng/ml。高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。稀释后的标本afp 含量必须高于20iu/ml(24ng/ml)。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。3.6 灵敏度： 0.605ng/ml 3

4、.7 特异性：无4. 样本要求4.1 血清：按标准常规方法采集。4.2 血浆：肝素、 edta-k3 、枸橼酸钠或氟化钠 / 草酸钾抗凝均可。4.3 标本在 28 度可稳定 2天，-20 度可稳定 6个月。只能冻融一次。4.4 含沉淀的标本使用前需离心。4.5 标本和质控品禁用叠氮钠防腐5.试剂和设备：5.1 设备：cobas6000 组合模块 e601 （1）检查供水系统是否正常。（2）检查试剂盖是否松开。（3）接通仪器左侧上方电源按钮, 仪器自检。（4）登录：输入用户名及密码，仪器初始化，进行自动维护，然后进入stand by 态。5.2 试剂厂商 ：罗氏诊断产品公司5.3试剂及使用前准备

5、m ： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml 。粒子浓度 0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素 /mg粒子。含防腐剂。r1 ：生物素化的抗 afp 单克隆抗体（灰盖）， 1瓶，10ml。浓度 4.5mg/l ，磷酸缓冲液0.1mol/l ，ph6.0。含防腐剂。r2 ：ru(bpy)32+标记的抗 afp 单克隆抗体（黑盖）， 1瓶，10ml。浓度12.0mg/l ，磷酸缓冲液 0.1mol/l ，ph6.0。含防腐剂。储存和稳定性：存放在 28 度 ，切莫倒置。未 开 封，可 稳 定 至 标 明 的 保 质 期。开封后， 28 度，12周；放在cobas600

6、0上，8周；注意：仅供体外诊断使用； 避免皮肤直接接触液体试剂； 废弃物按生物危害垃圾处理。6. 校准程序：6.1 校准品：罗氏cobas6000 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8可稳定到有效期。复溶：用复溶专用加样枪准确吸取1ml 去离子水于瓶中，溶解静置1 小时，混匀并用有盖小子弹头分装200l/ 个，标明配制日期， 校准品批号， 配制人以及有效日期，于20冻存备用。复溶后校准品成分的稳定性：2-8c 储存。稳定性：未打开，2-8c有效期内均可打开后， 2-8c 下： 12 周上机， 20-25c： 只可使用一次（不可反复冻融） 。6.2 当下列任何一种

7、情况出现时，请重新校准：试剂批号改变根据质控需要进行校准6.3 校准步骤：631校准品的准备：从 -20冰箱中取出一个分装的校准品，室温放置使其完全溶解，并颠倒混匀备用。632 起始定标： 进入 calibration，点击 status ，选择该项目的定标方式 （full ） ，点击 save，按在 calibration画面下的 installation界面设置好的标准物放置位置装载好相应的定标液，再点start 按键，仪器开始定标；6. 3. 3 重复定标：进入 calibration，点击 status ，选择该项目的定标方式（full ） ，点击 save， 按在 calibrati

8、on画面下的 installation界面设置好的标准物放置位置装载好相应的定标液，再点start 按键，仪器开始定标；6. 3. 4看定标结果：进入 calibration， 点击 status， 点击相应的项目， 点 calibration result，查看反应曲线。6. 3. 5 校准原始结果的记录：每天校准过的项目原始光子数的值及曲线图保存在中。6. 3. 6每次做校准后，测定罗氏正常值或病理值质控，如质控在控则校准通过，可开始临床样品检测，如果质控失控，则参照室内质量控制管理程序处理。7. 操作步骤：7.1 输入样本，进入 workplace，点 test selection 7.

9、1.1 输入常规样本，选routine ，选择样本类型、输入序列号或样本号，可选择稀释倍数，选择项目，只编辑一个样本则点击save键即可；如批量输入做相同项目的样本，则点 repeat，输入需要检测的样本总数， 点 save，在 start的当前界面（start samper no. ）输入该批样本起始号，回车，再点start ；7.1.2输入急诊样本，选stat ，输入急诊样本架、样本编号，选择项目，save，将标本放入急诊进样位（急诊架条形码面朝向外侧），点 start ；如果仪器此时在operation状态则不需要执行start操作。7.2 结果查询及传输：7.2.1 结果查询：进入 w

10、orkplace，点 data review ，选择要看的样本号，可看到该样本所做的项目和结果，点reaction monitor可看到相应项目的反应曲线。7.2.2 结果传输：进入 workplace，点 data review ，选择要传输的实验号，按sent to host,再按 sent, 结果即可传输。7.3 结果打印：进入 workplace，点 data review ，选择要打印的实验号，按print,再选择要打印的数据类型 , 再按 print,结果即可打印。打印结果作为原始记录保留，并且操作者要签上名字及操作日期。74 分析参数：吸液参数 diluent(罗氏通用稀释液 )

11、 样本量 50l 方法电化学发光法反应时间 18分钟反应温度常温8. 质量控制：8. 1 precicontrol tumor marker1罗氏正常值质控 precicontrol tumor marker 2罗氏病理值质控，按说明书要求保存于冰箱中。复溶: 用移液管准确吸取3ml 去离子水于瓶中，静置，然后倒置小瓶，放置1 小时后按要量 (约 400ul) 分装作好标识保存于 -20, 在复溶后稳定期内使用。82 将质控品从冰箱取出放置室温平衡15 分钟, 摇匀后按未知血清标本进行测定，在做临床标本 3-5 个以后检测，每个工作日测定一次，若当日无此检测项目则不需要做质控。测定后将结果录入

12、室内质控软件中。83 质控规则： 13s，22s。 （参照室内质量控制程序 ） 。当质控失控时，应按照室内质量控制程序处理9.干扰和交叉反应：该方法不受黄疸（胆红素 65mg/dl）、溶血（血红蛋白 2.2g/dl ）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素 5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1500u/ml）。37种常用药物经试验对本测定无干扰。afp 浓度高达 1百万iu/ml （1.21 百万ng/ml ）也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人会出现假阳性反应。elecsysafp测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合

13、起来进行诊10计算：对每一个标本，仪器会自动计算afp 含量，单位是 iu/ml 或ng/ml 。换算方法 : iu/ml1.21= ng/ml ng/ml 0.83= iu/ml 11. 生物参考区间：95%=5.8iu/ml或=7.0ng/ml 100%=11.3iu/ml或=13.6ng/ml 孕妇的参考区间：妊娠周数 14 15 16 17 18 19 例数 382 1782 2386 975 353 146 ng/ml 27.9 30.9 36.1 40.4 48.3 54.8 iu/ml 23.2 25.6 30.0 33 40.1 45.5 12.警告/危机值：无13. 结果解释

14、：甲胎蛋白如果能与临床评估信息以及诊断操作中得出的信息结合起来使用，则可以对睾丸癌患者的管理起到很好的辅助作用。在共济失调毛细血管扩张，遗传性酪氨酸血症，原发性肝细胞癌，畸胎癌，有无移位变化的胃肠道癌，以及诸如急性病毒性肝炎，慢性活动型肝炎和肝硬化等良性肝疾病中，也能够观察到甲胎蛋白血清浓度的升高。接受了小鼠单克隆抗体制剂用于诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人抗鼠抗体（hama ） 。用使用了小鼠单克隆抗体的检测试剂盒进行检测时，就会得到错误的升高或降低的值。这些样本不应该使用axsym 甲胎蛋白检验方法进行检测。在进行羊水检测后，不能对母体血清或血浆中的甲胎蛋白做出有效检测，因此，必须在羊

15、水检测前抽取母体血清或血浆。详细说明，见本检测包装说明书中的“样本采集” 。在出生前检测的msafp 评估的可靠性，取决于对妊龄的准确判断。如果对妊龄估计过高，可能会导致对msafp 值的错误解读，因此就会低估ntd 的危险。如果低估了妊龄，所导致对msafp 值的错误解读也可能导致对ntd 的评估过高，而决定去进行不必要的额外检测。如果对妊龄无法确定，则必须进行可靠的超声波检测。在 msafp 水平升高 ntd 危险程度上升时，不能做出诊断。已经在上述癌症和非恶性疾病中发现甲胎蛋白血清浓度上升，也就意味着可能存在母体疾病。其他疾病包括胎盘畸形，开放性胎儿畸形，如脐突出或腹裂（腹壁缺失），胎儿肾脏畸形，有流产危险或即将流产，以及死胎等都与msafp 水平升高有关。 msafp 水平升高还与早产和低出生体重有关，这一点已在多个新生儿中观察到。个别单胎，有存活能力且没受影响的妊娠也会表现出msafp 水平上升。甲胎蛋白检测过程的基本组成部分是确认检测，如用于afafp 评估的羊水检测，高分辨率的超声波扫描或羊膜腔造影术以及羊水乙酰胆碱脂酶。14.生物安全防护：操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消