RNA的生物合成与加工实用教案

1、遗传信息传递(chund)的 中心法则蛋白质蛋白质翻译翻译转录转录逆转录逆转录复制复制复制复制DNARNA生物的遗传信息以密码的形式储生物的遗传信息以密码的形式储存在存在DNA分子上，表现为特定的核苷分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序。在细胞分裂的过程中，酸排列顺序。在细胞分裂的过程中，通过通过DNA复制把亲代细胞所含的遗传复制把亲代细胞所含的遗传信息忠实地传递给两个子代细胞。在信息忠实地传递给两个子代细胞。在子代细胞的生长发育过程中，这些子代细胞的生长发育过程中，这些(zhxi)遗传信息通过转录传递给遗传信息通过转录传递给RNA，再由，再由RNA通过翻译转变成相应通过翻译转变成相应的蛋白质多

2、肽链上的氨基酸排列顺序的蛋白质多肽链上的氨基酸排列顺序，由蛋白质执行各种各样的生物学功，由蛋白质执行各种各样的生物学功能，使后代表现出与亲代相似的遗传能，使后代表现出与亲代相似的遗传特征。后来人们又发现，在宿主细胞特征。后来人们又发现，在宿主细胞中一些中一些RNA病毒能以自己的病毒能以自己的RNA为模为模板复制出新的病毒板复制出新的病毒RNA，还有一些，还有一些RNA病毒能以其病毒能以其RNA为模板合成为模板合成DNA，称为逆转录这是中心法则的补，称为逆转录这是中心法则的补充。充。 中心法则总结了生物体内遗传信息的流动规律，揭示遗传的分子基础，不仅中心法则总结了生物体内遗传信息的流动规律，揭示

3、遗传的分子基础，不仅(bjn)使人们对细胞使人们对细胞的生长、发育、遗传、变异等生命现象有了更深刻的认识，而且以这方面的理论和技术为基础发展了的生长、发育、遗传、变异等生命现象有了更深刻的认识，而且以这方面的理论和技术为基础发展了基因工程，给人类的生产和生活带来了深刻的革命。基因工程，给人类的生产和生活带来了深刻的革命。第1页/共29页第一页，共30页。一、转录一、转录(zhun l)的概念的概念二、二、RNA聚合酶及催化反应聚合酶及催化反应三、三、RNA合成过程合成过程四、启动子和转录四、启动子和转录(zhun l)因子因子五、终止子和终止因子五、终止子和终止因子第2页/共29页第二页，共3

4、0页。转录(zhun l)的概念和DNA的有义链和反义链 启动子（启动子（promoter) 终止子终止子(terminator)模板模板(mbn)链（链（templatte strand） 反意义链反意义链(antisense strand)有意义链有意义链(sense strand)非信息区非信息区5 5 3 3 第3页/共29页第三页，共30页。大肠杆菌大肠杆菌(d chn n jn)RNA聚合酶的结构示意图聚合酶的结构示意图 核心核心(hxn)(hxn)酶酶(2(2) )起始起始(q sh)(q sh)因子因子 和模板和模板DNADNA结合结合起始和催化聚合反应起始和催化聚合反应？全酶

5、全酶( (2 2 ) )第4页/共29页第四页，共30页。RNA聚合酶催化(cu hu)的反应ACGACGUU模板模板(mbn)DNA5 3 5 3 新合成新合成(hchng)RNA第5页/共29页第五页，共30页。RNARNA合成合成(hchng)(hchng)过程过程起始起始(q sh)双链双链DNA局部局部(jb)解解开开磷酸二酯磷酸二酯键形成键形成终止阶段终止阶段解链区到达解链区到达基因终点基因终点延长阶段延长阶段5 3 RNA 启动子（启动子（promoter) 终止子终止子(terminator)5 RNA聚合酶聚合酶 5 3 5 3 5 5 3 离开离开第6页/共29页第六页，共

6、30页。RNA链的延伸(ynshn)图解3 5 RNA-DNA杂交螺旋杂交螺旋聚合酶的移动方向聚合酶的移动方向新生新生RNA复链复链解链解链有义链有义链模板链（反义链）模板链（反义链）延长部位延长部位第7页/共29页第七页，共30页。真核生物和原核(yun h)生物转录的差别DNA核核核糖体核糖体新生新生(xnshng)蛋白质蛋白质真核生物真核生物(shngw)原核生物原核生物mRNA前体前体转运转运加工加工mRNAmRNA 真核生物中转录与复制在不同的区域真核生物中转录与复制在不同的区域 RNA聚合酶不相同聚合酶不相同 启动子不同启动子不同 转录后转录后RNA加工修饰不同加工修饰不同第8页/

7、共29页第八页，共30页。四、启动子和转录(zhun l)因子第9页/共29页第九页，共30页。足迹法确定(qudng)启动子序列第10页/共29页第十页，共30页。大肠杆菌启动子共有序列大肠杆菌启动子共有序列(xli)的功能的功能 AGTCTTGACA AAT TTAAAT AACTGT AAT Pribnow框框-10-35识别区识别区16-19bp5-9bp起点(qdin)第11页/共29页第十一页，共30页。五、终止(zhngzh)子和终止(zhngzh)因子第12页/共29页第十二页，共30页。大肠杆菌大肠杆菌(d chn n jn)两类终止子的回文结构两类终止子的回文结构A. 不依

8、赖于不依赖于Rho（ ）的终止子的终止子A. 依赖于依赖于Rho（ ）的）的终止子终止子富含富含G-C系列系列(xli)U第13页/共29页第十三页，共30页。一、一、RNA的加工的加工(ji gng)二、二、 RNA的拼接、编辑和再编码的拼接、编辑和再编码三、三、RNA生物功能的多样性生物功能的多样性四、四、RNA的降解的降解第14页/共29页第十四页，共30页。甲基化作用甲基化作用专一专一(zhuny)核核酸外切酶酸外切酶30S前体前体17StRNA25S专一专一(zhuny)核核酸外切酶酸外切酶16S rRNAtRNA23S rRNA5S rRNA专一核酸外切酶专一核酸外切酶第15页/共

9、29页第十五页，共30页。a a、切除、切除(qich)tRNA(qich)tRNA前体两端多余的序列：前体两端多余的序列： 5 5端切除端切除(qich)(qich)几到几到1010个核苷酸。个核苷酸。b、末端添加、末端添加(tin ji)：3-端添加端添加(tin ji)CCA序列。序列。c、修饰：形成稀、修饰：形成稀有碱基如有碱基如DH2 。RNAasePRNAaseFRNAasePRNAaseFRNAaseDRNAaseDACC表示核酸内切酶的作用表示核酸内切酶的作用 表示核苷酸转移酶的作用表示核苷酸转移酶的作用 表示核酸外切酶的作用表示核酸外切酶的作用 表示异构化酶的作用表示异构化酶

10、的作用 第16页/共29页第十六页，共30页。早转录早转录(zhun l)本本成熟成熟(chngsh)tRNA加工加工(ji gng)酵母酪氨酸酵母酪氨酸tRNA前体的加工前体的加工第17页/共29页第十七页，共30页。真核细胞mRNAmRNA的加工(ji gng)(ji gng)5 “帽子帽子(mo zi)”PolyA 3 顺反子顺反子(cistron ) m7G-5 ppp-N-3 pAAAAAAA-OH 5 5端接上一个端接上一个“帽子帽子(mo zi)”(CAP)(mo zi)”(CAP)结构结构 3 3端添加端添加PolyA“PolyA“尾巴尾巴”,”,由由RNARNA末端核苷酸转移

11、酶催化末端核苷酸转移酶催化 剪接：剪去内含子剪接：剪去内含子(intron)(intron)，拼接外显子，拼接外显子(extron)(extron)第18页/共29页第十八页，共30页。二、二、RNARNA的拼接的拼接(pn ji)(pn ji)、编辑和、编辑和再编码再编码 大多数的真核基因都是断裂基因，断裂基因的转录产物产大多数的真核基因都是断裂基因，断裂基因的转录产物产物需要通过拼接物需要通过拼接(pn ji)(pn ji)，去除插入部分（即内含子，去除插入部分（即内含子，intronintron），使编码区（即外含子，），使编码区（即外含子，ExonExon）成为连续序列，这是）成为连续

12、序列，这是基因表达的一个重要环节。基因表达的一个重要环节。RNARNA编码序列的改变称为编辑（编码序列的改变称为编辑（ editingediting），）， RNA RNA编码和读码方式的改变称为再编码（编码和读码方式的改变称为再编码（recodingrecoding）。由于存在选择性的拼接）。由于存在选择性的拼接(pn ji)(pn ji)、编辑和再编、编辑和再编码，一个基因可以产生多种蛋白质。码，一个基因可以产生多种蛋白质。1 1、RNARNA的拼接的拼接2 2、RNARNA的编辑的编辑(binj)(binj)3 3、RNARNA的再编码的再编码第19页/共29页第十九页，共30页。RNA

13、RNA的拼接(pn ji)(pn ji)方式 类型类型 自我自我(zw)(zw)拼拼接接 类型类型 自自我我(zw)(zw)拼接拼接 核核mRNAmRNA的拼接的拼接体的拼接体的拼接 核核mRNAmRNA的的酶促拼接酶促拼接第20页/共29页第二十页，共30页。RNARNA编辑的不同类型(lixng)(lixng)和分布 编辑类型编辑类型(lixng) (lixng) 机制机制 存在存在U U的插入与删除的插入与删除 gRNA gRNA的转酯反应的转酯反应 锥虫线粒体锥虫线粒体mRNAmRNAC C、A A或或U U的插入的插入 多头绒孢菌线粒体的多头绒孢菌线粒体的 mRNA mRNA和和tR

14、NAtRNAG G的插入的插入 RNA RNA聚合酶重复转录聚合酶重复转录 副粘病毒的副粘病毒的P P基因基因(jyn)(jyn)C C转变为转变为U U 酶促脱氢酶促脱氢 哺乳类肠的哺乳类肠的apoPtRNAapoPtRNAC C转变为转变为U U或或U U转变为转变为C C 脱氢或氨基化脱氢或氨基化 植物线粒体植物线粒体mRNAmRNA和和tRNAtRNA 牛心线粒体牛心线粒体tRNAtRNAA A转变为转变为I I 脱氨脱氨 脑谷氨酸受体亚基脑谷氨酸受体亚基mRNAmRNARNARNA编辑的生物学意义编辑的生物学意义消除移消除移 码突变等基因突变的危害码突变等基因突变的危害增加了基因产物

15、的多样性增加了基因产物的多样性与生物发育与分化有关，是基因调控的一种重要方式与生物发育与分化有关，是基因调控的一种重要方式第21页/共29页第二十一页，共30页。RNARNA的再编码(bin m)(bin m) 类型类型 自我自我(zw)(zw)拼拼接接 类型类型(lixng(lixng) ) 自我拼自我拼接接 核核mRNAmRNA的拼接的拼接体的拼接体的拼接 核核mRNAmRNA的酶的酶促拼接促拼接第22页/共29页第二十二页，共30页。三、三、RNARNA生物生物(shngw)(shngw)功能的多样功能的多样性性1 1、RNARNA在遗传信息的翻译中起着决定作用。在遗传信息的翻译中起着决

16、定作用。2 2、RNARNA具有重要的催化功能和其他持家具有重要的催化功能和其他持家(chji)(chji)功能。功能。3 3、RNARNA转录后加工和修饰依赖于各类小转录后加工和修饰依赖于各类小RNARNA和其他蛋白质复合物。和其他蛋白质复合物。4 4、RNARNA对基因表达和细胞功能具有重要调节作用。对基因表达和细胞功能具有重要调节作用。5 5、RNARNA在生物进化中起重要作用。在生物进化中起重要作用。第23页/共29页第二十三页，共30页。四、四、RNARNA的降解的降解(jin ji)(jin ji) RNA RNA降解是涉及到基因表达的一个重要环节，降解是涉及到基因表达的一个重要环

17、节， rRNA rRNA和和tRNAtRNA是稳定的是稳定的RNA RNA ，其更新率低；，其更新率低； mRNA mRNA是不稳定的是不稳定的RNARNA，其更新率非常高。因为，其更新率非常高。因为mRNAmRNA于其编码基因的表达活性直接有关，不同于其编码基因的表达活性直接有关，不同(b tn)(b tn)的的RNARNA需要以不同需要以不同(b tn)(b tn)的速度进行降解。脊椎动物细胞的速度进行降解。脊椎动物细胞mRNAmRNA的平均半衰期约为的平均半衰期约为3h, 3h, 细胞每一世代中各类细胞每一世代中各类mRNAmRNA约周转约周转1010次。细菌次。细菌mRNAmRNA的半

18、衰期大约只有，以适应快速生长和对环境作出快速反应的要求。的半衰期大约只有，以适应快速生长和对环境作出快速反应的要求。 所有细胞中都存在各种核糖核酸酶，可以降解所有细胞中都存在各种核糖核酸酶，可以降解RNARNA。真核生物。真核生物mRNAmRNA降解的主要途径首先是降解的主要途径首先是poly(A)poly(A)尾巴的缩短，去腺苷酸化能诱发脱去尾巴的缩短，去腺苷酸化能诱发脱去5 5端帽子结构，然后由端帽子结构，然后由5 5 3 3方向和方向和3 3 5 5 方向降解方向降解mRNAmRNA。第24页/共29页第二十四页，共30页。噬菌体噬菌体Q的合成的合成(hchng)A. 负链的合成负链的合

19、成(hchng)B. 正链的合成正链的合成(hchng)病毒的正链病毒的正链复制中间体复制中间体复制中间体复制中间体新合成的正链新合成的正链新合成的负链新合成的负链负链负链第25页/共29页第二十五页，共30页。第四节第四节 核酸核酸(h sun)合成合成的抑制剂的抑制剂 核苷酸合成核苷酸合成(hchng)抑制剂抑制剂氨基酸类似物氨基酸类似物 叶酸叶酸(y sun)类似物类似物 碱基和核苷酸类似物碱基和核苷酸类似物烷化剂烷化剂放腺菌素放腺菌素嵌合剂嵌合剂 与与DNA模板结合的抑制剂模板结合的抑制剂 作用于作用于DNA聚合酶或聚合酶或RNA集合酶的抑制剂集合酶的抑制剂抗菌素抗菌素:如利福平、曲张霉素如利福平、曲张霉素肽类化合物：肽类化合物： -鹅膏蕈碱鹅膏蕈碱第