蓬乱蛋白相关形态形成活化因子

1、会计学1蓬乱蛋白相关形态形成活化因子蓬乱蛋白相关形态形成活化因子五、细胞伤口愈合试验分析六、超声心电图分析LTR 报告基因，由上游启动子起始表达；SA, 剪接受体; GFNR, 绿荧光硝基还原酶基因;pPKG, PKG 启动子; neo, 新霉素抗性基因。基因诱捕载体系统(ROSA- GFNR)结构示意图图A-a ：基因诱捕载体示意图 图A-b：蛋白印迹和DNA电泳图 16.5d胚胎，Het为Daam1等位基因，Mut为纯合突变图B:DNA电泳和蛋白印迹图。 16.5d胚胎各器官，Het为Daam1等位基因，Mut为纯合突变1、表明Daam1基因缺陷的小鼠模型构建成功 2、Daam1在小鼠各处

2、器官均有表达Daam1在正常小鼠中的表达谱 A-a-c：8.5-10.5d小鼠胚胎原位杂交检测Daam1的表达d-e：10.5d切片分析AVC，房室垫; EC，心内膜; EPC，心外膜; 图B：8.5-10.5d Daam1在心脏和脑中PCR检测Daam1突变小鼠中用半乳糖苷酶染色切片分析发现Daam1在小鼠全身表达，在心脏处高表达10.5d表达强烈发育的心脏和神经管用免疫荧光染色E12.5胚胎冰冻切片。WGA：麦胚凝集素特异性染心肌细胞膜DAPI：特异性然细胞质Daam1gt/gt小鼠的心脏表型和功能特性。切片分析 E14.5 d、f：DORV畸形 h、I VSD畸形切片分析 P0 d、f、

3、h：DORV畸形 j： VSD畸形2月龄Daam1小鼠的病理分析图C：Daam1突变小鼠左心室壁出现脑回沟疏松结构（箭头所示）图D-a：心脏与身体的比重。图D-b：超声波心电图分析。表明Daam1突变型小鼠LV心肌变厚。Daam1gt/gt 拯救小鼠通过NKx2.5Cre小鼠与Daam1gt/gt小鼠杂交获得Daam1拯救型小鼠。图A：基因示意图图B: E10.5 半乳糖苷酶染色表明拯救成功E14.5胚胎组织切片Daam1gt/gt/Nkx2-5Cre/+胚胎（B，D，F）表现出正常的心脏结构1周龄小鼠组织切片。daam1gt/+（A，D）和Daam1gt/gt/Nkx2-5Cre/+（C，F

4、）小鼠表现出正常的室壁和小梁。Daam1gt/gt突变小鼠（B，E）显示心室致密。作者发现作者发现Daam1缺陷病不影缺陷病不影响心肌细胞分化，增殖或凋亡响心肌细胞分化，增殖或凋亡通过通过Nkx2-5, Tbx20 and Gata4心脏早期发育基因心脏早期发育基因, 形态发生蛋形态发生蛋白白 BMP10心室标志性基因心室标志性基因MLC2A 、 MLC2V都无显著差异表达都无显著差异表达图图A：只有：只有Daam1gt/gt小鼠饥饿后小鼠饥饿后F-肌动蛋白明显降低表肌动蛋白明显降低表达达 图图B：E12.5心心脏中脏中 肌动蛋白荧光分析表明，只有肌动蛋白荧光分析表明，只有 Daam1gt/g

5、t小鼠肌动蛋白表达量很低小鼠肌动蛋白表达量很低以上结果表明：在心肌细胞中肌动蛋白细胞骨架以上结果表明：在心肌细胞中肌动蛋白细胞骨架的形成和横纹肌组织的形成是需要的形成和横纹肌组织的形成是需要Daam1的的Daam1gt/gt小鼠在心肌细胞中横纹肌的形成受到干扰 图A:E12.5 Daam1gt/gt小鼠心肌细胞的粘附蛋白 -catenin和N-cadherin 表达明显混乱图B： Daam1gt/gt小鼠桥粒连接异常图C:E12.5 Daam1gt/gt小鼠心肌黏接细胞排列无规则图D： Daam1gt/gt小鼠连接细胞变少图d：为差异分析Daam1在心肌细胞中对细在心肌细胞中对细胞粘附是非常重

6、要的胞粘附是非常重要的Daam1缺陷小鼠新生儿致死率是由于先心畸形造成的Daam1通过对丝状肌动蛋白组装的调节，控制了心肌细胞骨架的功能Daam1心肌骨架在心肌细胞中有重要功能，从而能调节正常心脏形态的形成表型表型机制机制原因原因总结：总结：图B:DNA电泳和蛋白印迹图。 16.5d胚胎各器官，Het为Daam1等位基因，Mut为纯合突变1、表明Daam1基因缺陷的小鼠模型构建成功 2、Daam1在小鼠各处器官均有表达Daam1突变小鼠中用半乳糖苷酶染色切片分析发现Daam1在小鼠全身表达，在心脏处高表达10.5d表达强烈2月龄Daam1小鼠的病理分析图C：Daam1突变小鼠左心室壁出现脑回沟疏松结构（箭头所示）图D-a：心脏与身体的比重。图D-b：超声波心电图分析。表明Daam1突变型小鼠LV心肌变厚。以上结果表明：在心