病原学诊断与防治PPT学习教案

1、会计学1病原学诊断与防治病原学诊断与防治2021-12-122nIsolation第1页/共112页2021-12-123第2页/共112页2021-12-124第3页/共112页2021-12-125nStore at -4oC -70oC for viral specimens第4页/共112页2021-12-126第5页/共112页2021-12-127标本的采集和送检六原则标本的采集和送检六原则l无菌取材无菌取材,避免杂菌污染避免杂菌污染l不同期不同标本不同期不同标本l用抗生素以前用抗生素以前l采集病变明显部位采集病变明显部位l运送注意保存运送注意保存l标本必须新鲜标本必须新鲜第6页/

2、共112页2021-12-128第7页/共112页2021-12-129第8页/共112页2021-12-1210第9页/共112页2021-12-1211第10页/共112页2021-12-1212第11页/共112页2021-12-1213第12页/共112页2021-12-1214第13页/共112页2021-12-1215第14页/共112页2021-12-1216第15页/共112页2021-12-1217第16页/共112页2021-12-1218第17页/共112页2021-12-1219第18页/共112页2021-12-1220 分离培养是微分离培养是微生物学诊断的金标生物学

3、诊断的金标准，是最可靠的传准，是最可靠的传统诊断技术。统诊断技术。（图为普通培养箱（图为普通培养箱）第19页/共112页2021-12-1221 厌氧罐厌氧罐 厌氧袋厌氧袋第20页/共112页2021-12-1222第21页/共112页2021-12-1223第22页/共112页2021-12-1224基本原则基本原则用已知抗体检测未知抗原；用已知抗体检测未知抗原； 用已知抗原检测未知抗体。用已知抗原检测未知抗体。最简易的方法有玻片凝集等最简易的方法有玻片凝集等试验。试验。 常用的方法有：凝集常用的方法有：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、沉淀试验、补体结合试验、试验、ELISA、免疫荧光等。

4、、免疫荧光等。免疫学试验免疫学试验第23页/共112页2021-12-1225Lavage第24页/共112页2021-12-1226第25页/共112页2021-12-1227第26页/共112页2021-12-1228第27页/共112页2021-12-1229第28页/共112页2021-12-1230第29页/共112页2021-12-1231第30页/共112页2021-12-1232第31页/共112页2021-12-1233第32页/共112页2021-12-1234第33页/共112页2021-12-1235第34页/共112页2021-12-1236第35页/共112页202

5、1-12-1237第36页/共112页2021-12-1238第37页/共112页2021-12-1239第38页/共112页2021-12-1240第39页/共112页2021-12-1241第40页/共112页2021-12-1242第41页/共112页2021-12-1243第42页/共112页2021-12-1244 病毒感染的检测病毒感染的检测一、标本的采集与运送一、标本的采集与运送 急性期标本；急性期标本； 根据感染性质取不同的标本；根据感染性质取不同的标本； 标本置于转运液中；标本置于转运液中； 冷藏快运。冷藏快运。第43页/共112页2021-12-1245第44页/共112页

6、2021-12-1246第45页/共112页2021-12-1247二、病毒分离培养二、病毒分离培养 病毒分离的一般程序是病毒分离的一般程序是 接种易感动物接种易感动物 出现症状出现症状 血清血清学学检测标本检测标本 杀灭杂菌杀灭杂菌 鸡胚鸡胚 病变或死亡病变或死亡 鉴定鉴定 细胞培养细胞培养 细胞病变细胞病变第46页/共112页2021-12-1248第47页/共112页2021-12-1249第48页/共112页2021-12-1250第49页/共112页2021-12-1251第50页/共112页2021-12-1252第51页/共112页2021-12-1253第52页/共112页20

7、21-12-1254第53页/共112页2021-12-1255（1）原代细胞培养：）原代细胞培养： 动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长经体外培养后可贴壁或悬浮生长。 （2）二倍体细胞株：）二倍体细胞株： 在体外连续培养在体外连续培养5060代仍保持其二倍染色代仍保持其二倍染色体数目的单型细胞。体数目的单型细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。为生产人用疫苗的首选细胞株。（3）传代细胞系）传代细胞系 能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。化、突变的原代细

8、胞或二倍体细胞株。第54页/共112页2021-12-1256 细胞培养细胞培养常用的名称常用的名称组织来源组织来源 传代数传代数原代原代 HEKPMKRKGPE/CE 人胚肾人胚肾恒河猴肾恒河猴肾兔肾兔肾豚鼠胚豚鼠胚 或鸡胚或鸡胚12 二倍体二倍体 HEL(MRC-5)HDF 人胚肺人胚肺人新生儿包皮人新生儿包皮 2050 异倍体异倍体 Hep-2HeLaA549Vero 人喉癌人喉癌人子宫颈癌人子宫颈癌人肺癌人肺癌非洲绿猴肾非洲绿猴肾 无限无限 第55页/共112页2021-12-1257识别病毒增殖的方法识别病毒增殖的方法（1）细胞病变效应（细胞病变效应（CPE）：溶细胞型病毒：溶细胞型

9、病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。葡萄串状、脱落或死亡等。第56页/共112页2021-12-1258epithelial cells - adenovirusuninfectedearly infectionlate infection第57页/共112页2021-12-1259Negri Body第58页/共112页2021-12-1260（2）红细胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感）红细胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后染细胞后24

10、48小时，细胞膜上出现病毒的血凝小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。红细胞吸附现象。（3）干扰现象）干扰现象第59页/共112页2021-12-1261 病毒量测定病毒量测定（1）测定病毒数量可用空斑形成单位（）测定病毒数量可用空斑形成单位（PFU）表示。一个空斑是标本中一个病毒大）表示。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。经增殖使局部单

11、层细胞脱落，此即空斑。经染色后空斑可用肉眼观察，计算空斑数即染色后空斑可用肉眼观察，计算空斑数即可计数病毒数量。可计数病毒数量。第60页/共112页2021-12-1262PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY第61页/共112页2021-12-1263PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY第62页/共112页2021-12-1264PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY第63页/共112页2021-12-1265三、光学显微镜和电子显微镜三、光学显微镜和电子显微镜1 1、光学显微镜：观察病毒的包涵体、光学显微镜：观察病毒的包涵体第64页/共112页2021-12

12、-12662 2、电子显微镜：直接观察病毒、电子显微镜：直接观察病毒第65页/共112页2021-12-1267第66页/共112页2021-12-1268第67页/共112页2021-12-1269Plaque第68页/共112页2021-12-1270第69页/共112页2021-12-1271第70页/共112页2021-12-1272第71页/共112页2021-12-1273三、三、病毒感染的血清学诊断方法病毒感染的血清学诊断方法 P240P2401 1、中和试验、中和试验 2 2、补体结合试验、补体结合试验 3 3、红细胞凝集和凝集抑制试验、红细胞凝集和凝集抑制试验 病毒抗体病毒抗

13、体 失去感染性失去感染性恢复期恢复期/早期早期 4:1，有诊断意义。，有诊断意义。第72页/共112页2021-12-1274第73页/共112页2021-12-1275第74页/共112页2021-12-1276第75页/共112页2021-12-1277第76页/共112页2021-12-1278第77页/共112页2021-12-1279第78页/共112页2021-12-1280n人工被动免疫：注射抗毒素或丙人工被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等种球蛋白等第79页/共112页2021-12-1281第80页/共112页2021-12-1282第81页/共112页2021-12-1283

14、区区 别别 点点人工自动免疫人工自动免疫人工被动免疫人工被动免疫免疫物质免疫物质接种次数接种次数免疫力出现时间免疫力出现时间免疫力维持时间免疫力维持时间用途用途抗原抗原1 3 次次慢慢(2 4 周周)长长(数月数月数年数年)多用于预防多用于预防抗体或细胞因子抗体或细胞因子1 次次快快(立即出现立即出现)短短(2 3 周周)用于治疗或应急预防用于治疗或应急预防第82页/共112页2021-12-1284第83页/共112页2021-12-1285第84页/共112页2021-12-1286第85页/共112页2021-12-1287第86页/共112页2021-12-1288第87页/共112页

15、2021-12-1289第88页/共112页2021-12-1290第89页/共112页2021-12-1291第90页/共112页2021-12-1292第91页/共112页2021-12-1293第92页/共112页2021-12-1294第93页/共112页2021-12-1295第94页/共112页2021-12-1296第95页/共112页2021-12-1297第96页/共112页2021-12-1298第97页/共112页2021-12-1299第98页/共112页2021-12-12100第99页/共112页2021-12-12101nn目前仅在实验研究中，尚未投目前仅在实验研

16、究中，尚未投放市场。放市场。第100页/共112页2021-12-12102第101页/共112页2021-12-12103第102页/共112页2021-12-12104第103页/共112页2021-12-12105第104页/共112页2021-12-12106第105页/共112页2021-12-12107作用靶点作用靶点药物药物复制早期复制早期由病毒由病毒DNA或或RNA聚合酶介导的核酸合聚合酶介导的核酸合成成病毒前体蛋白切割病毒前体蛋白切割病毒病毒mRNA翻译蛋白翻译蛋白病毒释放病毒释放金刚烷胺甲基金刚烷胺金刚烷胺甲基金刚烷胺无环鸟苷丙氧鸟苷脱氧鸟苷无环鸟苷丙氧鸟苷脱氧鸟苷penc

17、iclovirfamciclovircidofovir阿糖腺苷阿糖腺苷idoxuridine3氟胸腺嘧啶氟胸腺嘧啶甲酸磷霉素甲酸磷霉素AZTddIddCd4T3TCnevirapine病毒唑拉米夫啶病毒唑拉米夫啶赛科纳瓦英迪纳瓦瑞托纳瓦耐赛科纳瓦英迪纳瓦瑞托纳瓦耐菲纳瓦菲纳瓦干扰素干扰素fomiversinZanamiviroseltamivir第106页/共112页2021-12-12108第107页/共112页2021-12-12109靶病毒靶病毒分子结构分子结构药药 物物疱疹病毒疱疹病毒逆转录病毒逆转录病毒其他病毒其他病毒核苷类似物核苷类似物非核苷类似物非核苷类似物核苷类似物核苷类似物核苷酸类似物核苷酸类似物非核苷类似物非核苷类似物核苷类似物物核苷类似物物无环鸟苷丙氧鸟苷无环鸟苷丙氧鸟苷cidof