芽孢杆菌常用培养基配方

1、芽抱杆菌常用培养基配方（按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些摘自百度）一、肉汤琼脂培养基： 蛋白腺10g，牛肉膏15g , NACL15g,蒸 馆水 1000ml，琼脂 18g。调节 PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如 果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mLA中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面 培养基分装在试管中：5mL/支，10支。2、或是（J-琼脂培养基： 胰蛋白腺5g,酵母膏15g,磷酸氢二钾3g,葡萄糖2g,琼脂20g,蒸馆水1000ml。调节PH7.3 7.5Mpa 30min 灭菌。）二、过氧化

2、氢酶测定1、试剂：3-10%±氧化氢2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2）,作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。三、需氧性测定1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COON 娜 15g，蒸馆水 1L。调节PH7.2,分装试管，0.06Mpa, 30min灭菌，培养基不 摆斜面。2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，

3、穿刺接种到上述培养基中(穿刺管底)，一般与30度培养3-7天观察结果。若芽抱杆 菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解(用于检测不同种类的芽抱杆菌是否具有分解酪素的 特点)1、 培养基(1) 脱脂牛奶制备 取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心 脱脂(3000r/min,10min )，除去上层油脂，即为脱脂牛奶。(2) 牛奶平板的制备 取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外 称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馆水的另外3只三角瓶中，然后 将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表

4、 面水分干燥。2、接种与观察将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。培养基1.1 可溶性淀粉 3g/L 蛋白月东 10g/L 酵母膏 3g/L KH2PO41.5g/L K2HP（42g/LMgSO0.1g/LPH7.4 7.6（富集用）1.2肉汤（NA培养基（宫养琼脂）：蛋白月东10g/L牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.2 7.4 （保存计数或 分离纯化用）营养琼脂：麦芽汁培养基=1： 1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型1.3 蛋白月东 10g/L 酵母膏 5g/L 葡萄糖 3.5g/L NaCl

5、5g/L K 2HPO0.5g/LMgSO3g/L MnSO4 25mg/LPH 7.2 7.4 （分离纯化用）1.4产淀粉酶菌株筛选培养基：可溶性淀粉3-5g/L 蛋白月东10g/L牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L PH7.2 7.4 （用 于淀粉酶产生菌分离筛选）1.5广蛋白酶菌株筛选培养基1.5.1酪素培养基： 2.1.5.1.1 葡萄糖 1g/L，酵母膏 1g/L，酪素 4-5g/L , K2HPO4g/L , KH2PO4 0.5g/L , MgSO4 0.1g/L 蒸僧水 1000ml,pH7.0-7.2。另：葡萄糖 0.5g/L，酪素 10g/L, NaCl 5g/L K2

6、HPO4 0.5g/L , KH2PO4 0.5g/L, 琼脂 20g/LpH7.2-7.42.1.5.1.2 牛肉膏 3g/L 或酵母浸粉 5g/L 酪素 10g/L NaCl 4-5g/L PH7.2 7.4 先将酪素用少量2%a氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸僻水，在沸水浴中 加热搅拌至完全溶解（10-15min ），补足1000mL蒸僻水，加入其他成分，调 PH 分装灭菌。2.1.5.1.3 酵母膏 0.05g/L 酪素 4g/L KH2PO4 0.36g/L Na 2HPO1.1g/L MgSO 4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO 4 0.002g/L CaCl2

7、 0.002g/L ZnCl 2 0.014g/LpH6.5-7.04%酪素母液制备：4g酪素溶解于0.1N的30-35mL的氢氧化钠溶液中，水浴溶 解20min,溶解完毕后加入 60-70 C热水定溶到100mL.200mLS养基加20mL. 2.1.5.2脱脂奶培养基：牛肉膏3g/L （酵母浸粉5g/L ）蛋白月东10g/L NaCl5g/L脱脂奶粉10-12g/L ,PH7.2 （用于蛋白酶产生菌的筛选）将脱脂奶（粉）加水溶解制成10%溶液，于115C加热灭菌20-30min,与牛膏 蛋白月东固体培养基1: 9混合均匀倒平板。2.1.6纤维素产生菌培养基：CMCNa2g/L 蛋白月东 1

8、0g/L 酵母膏 5g/L NaCl5g/L PH7.2-7.4（用于纤维素产生菌的筛选）2.1.7促芽胞形成培养基：土壤浸出液1000mL蛋白豚5g/L牛肉膏6g/L PH7.2 7.4蛋白豚 1g/L 酵母膏 0.7g/L 葡萄糖 1g/L （NH4） 2SO40.2g/L MgSC0.2g/L K 2HPQ 1g/LPH7.2 7.4 （分离纯化用）产芽抱培养基：蛋白豚10g/L牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L .玉米粉0.5g/L 酵母 膏 0.1g/LPH7.2 7.42.1.8产蛋白酶发酵培 养基：玉米粉30g/L 豆饼粉20g/L 款皮10g/L 磷酸二氢钠4g 磷酸二氢钾0

9、.3g/L碳酸钠1.0g/LPH7.4 7.6 八层纱布塞，牛皮纸扎好。2.1.9产淀粉酶发酵培 养基：玉米粉40g/L 豆饼粉20g/L 蛋白豚5g/L硫酸铉4g/L 磷酸二氢钠8g/L 磷 酸二氢钾3g/L PH7.4 7.6八层纱布塞，牛皮纸扎好。产酶培养基（蛋白淀粉酶）：蛋白豚10g/L酵母膏5g/L葡萄糖1g/L可溶性淀 粉 5g/L 磷酸二氢钾 2g/L MgSO4 0.5g/LCaCl2 0.2g/LPH7.0-7.42.2分离纯化（或复壮）2.2.1冻干管的活化及菌种复壮：活化：用无菌吸管吸取0.5mL无菌水滴入安管中，轻荡使干菌体溶解成菌悬液， 做梯度稀释后取0.1-0.2m

10、L涂布或直接划线丁肉汤（麦芽汁）培养基平血，或转 接丁斜面（活化）37C 24-36h。复壮：挑取选择生长快，菌落大的菌落丁 4.5mL无菌水试管中，振荡摇匀后置丁 80 C水浴加热15-20min,梯度稀释后涂布丁促芽胞形成培养基平皿或蘸取菌悬 液直接划线，37C 24h。反复二至三次，选取平皿上菌落大而且生长快的菌落转 接丁斜面37 C 18-20h , 4 C冰箱保存。2.2.2商品微生物制剂中菌种选育1g （1ml）商品制剂加入99mL无菌（生理盐）水/250mL三角瓶（带玻璃珠）,置 丁摇床振荡20-30min, 80-85 C水浴加热15-20min,进行梯度稀释成10-3、10-

11、4、 10-5、10-6、10-7，根据活菌含量选取两至三个梯度进行混菌或涂布35C -37 C 24h,挑取一环生长快，菌落大的不同典型菌落分别转接5mL无菌水试管中，混合器混合5-10min,做成菌悬液梯度稀释后混菌或涂布，或直接 蘸取菌悬液直接划 线，37C 18-20h。结合镜检直到菌落大小基本一致，转接丁斜面 37C 18-20h , 丁4C冰箱保存。或将梯度菌液1mL加入平板，然后分别注入淀粉和 酪素培养基 中，30-37 C 24-48h，挑取D/d大的（淀粉培养基加碘液，观察透明圈）转接丁 斜面备用或用划线法进行纯化。并通过染色镜检观察，从菌落形态和细胞形态进 行鉴别。2.2.

12、3自然筛选2.2.3.1富集培养：取5g底泥或肠道内溶物0.5g，加入45 （50） mL无菌水/250mL三角瓶（带玻珠） 中，振荡15-20min,取5mL菌悬液或5mL水样加入45mL促芽培养基/250mL三角 瓶中，75C -80 C水浴 15-20min,降至 35 C -37 C 150-200r/min 振荡 24h,染色 镜检，连续两至三次培养备用。或取1g底泥（土）置丁 20mL肉汤培养基/250mL 三角瓶，八层纱布封口， 75C -80 C水浴处理15-20min,然后150-200r/min振 荡24ho镜检形成芽抱情况，挑取具有芽抱的菌落进行划线纯化培养，获得单菌 落。2.2.3.2分离纯化取富集菌液置于 75C -80C水浴 15-20min,梯度稀释 10-3、10-4、10-5、10-6、10-7, 选择三个合适的梯