学《菊花的组织培养》课件

1、专题专题3 3植物组织培养技术植物组织培养技术课题课题1 1 菊花的组织培养菊花的组织培养1.1.了解了解植物组织培养中各阶段的变化植物组织培养中各阶段的变化2.2.了解了解影响植物组织培养的因素影响植物组织培养的因素3.3.理解植物组织培养的基本原理和基本技术理解植物组织培养的基本原理和基本技术 以视频为背景材料，设计问题，导入新课介绍组培的优越性；接着直接阐明植物组织培养的基础知识和原理，再讲授组织培养的操作过程和注意事项。结合形象的图片，使内容呈现更为清晰明了；通过结果分析和课题延伸，完善内化课堂知识。 通过添加典型实例，结合情景图片设置相关问题，层层深入，以此来突破无菌操作流程这一重点

2、内容；组织培养的基本操作过程，是本节内容的难点，结合图示，设计问题，并总结规律，由此突破这一难点内容。组织培养简介组织培养简介 植物组织培养植物组织培养: :是指在无菌和人工控制的环境是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织及细胞进行培养，使其再生完整植株的技术。组织及细胞进行培养，使其再生完整植株的技术。一、组织培养的基础知识一、组织培养的基础知识（1）细胞的分化： 在个体发育过程中，由一个或一种细在个体发育过程中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构、胞增殖产生的后代，在形态、结构、生理功能上发生稳定性差

3、异的过程生理功能上发生稳定性差异的过程 1.1.相关概念相关概念（2）细胞的全能性： 已经分化的细胞，仍然具有已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能发育成完整个体的潜能（3）外植体： 离体的器官、组织、细胞离体的器官、组织、细胞（4）愈伤组织：细胞排列疏松而无细胞排列疏松而无规则规则, ,是高度液泡是高度液泡化的、成无定形状化的、成无定形状态的薄壁细胞态的薄壁细胞（5）脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，也叫去分化生愈伤组织的过程，也叫去分化（6）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽培养

4、，又可以重新分化成根或芽等器官的过程等器官的过程2.2.植物组织培养条件植物组织培养条件原理原理: :细胞的全能性细胞的全能性细胞离体必要条件一定的营养物质、激素和其他外界条件适宜条件植物激素无机盐糖类无菌、温度、光照离体3.3.影响植物组织培养的因素影响植物组织培养的因素（1 1）植物材料的选择）植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难B B、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝菊花的组织培养一

5、般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝A A、植物材料的选择直接关系到实验的成败、植物材料的选择直接关系到实验的成败（2 2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相 对特殊，需配置适宜的培养基对特殊，需配置适宜的培养基MSMS培养基培养基主要成分主要成分包括：包括：常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤 霉素霉素生长素类：生长素类：2 2，4 4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2 2，4 4D D）、吲哚乙酸）、吲哚乙酸（IAAIAA）、萘乙酸（）、萘乙酸（NAANAA）、吲哚丁酸（）、吲哚丁酸（IBAIB

6、A）细胞分裂素类：细胞分裂素类： 激动素（激动素（KTKT）、）、6 6苄基嘌呤（苄基嘌呤（ 6 6BABA）、玉米素（）、玉米素（ZTZT）赤霉素类：赤霉素类：赤霉酸（赤霉酸（GA3GA3）（3 3）植物激素的影响）植物激素的影响生长素和细胞分裂素作用生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势的作用呈现加强的趋势使用顺序使用顺序实验结果实验结果生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞生长

7、素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响发育方向的影响（4 4）pHpH、温度、光照、温度、光照pHpH控制在控制在5.85.8左右，温度控制在左右，温度控制在18182222。C,C,每日用日光每日用日光灯照射灯照射12h12h4.4.植物组织培养过程植物组织培养过程4）基因工程中亦需用到植物组织培养的方法植物组织培养植物组织培养的的应用应用（3）二、实验操作二、实验操作（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备1 1、配置各种母液、配置各种母液2 2、配置培养基、配置培养基分装到锥形瓶

8、中，每瓶分装50ml或100ml由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌1.选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2.消毒流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70的酒精中摇动23次，持续67s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1的氯化汞溶液中12min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液氯化汞氯化汞 70%

9、的酒精的酒精（三）接种（三）接种2.消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒至关重要。用70的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭擦洗工作台并用紫外线照射20分钟1.接种室消毒2.无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3.材料的切取和接种4.接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜34块，菊的茎或叶68块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件插入时应注意方向，不要倒插

10、。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。（四）培养（四）培养 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒。培养温度1822，每日用日光灯光照12h。若在无菌室中培养，提前用甲醛熏蒸房间。培养条件如上。（五）移栽（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1.打开封口膜：2.清洗转移：用流水清洗根部的培养基生活一段时间珍珠岩：固体基质型，含

11、水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培3.移栽： 幼苗长壮后，移栽到土壤中（六）栽培（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花 1. 1. 植物细胞全能性表达的条件有哪些？植物细胞全能性表达的条件有哪些？ 提示：提示：离体；离体； 一定的营养物质、激素等；一定的营养物质、激素等； 适宜的外界条件。适宜的外界条件。2. 2. 讨论并回答脱分化的实质是什么？讨论并回答脱分化的实质是什么？提示：提示：已分化的细胞回到未分化状态。已分化的细胞回到未分化状态。3. 3. 植物组织培养过程中为什么要严格进行无菌操作？植物组织培养过程中为什么要严格进行无菌操作？ 提示：提示：由于植物组织培养的培养基中加入了一些有机由于植物组织培养的培养基中加入了一些有机物，使一些异养型的细菌很容易在培养基上生存，它们的物，使一些异养型的细菌很容易在培养基上生存，它们的生长繁殖与所培养的植物细胞争夺营养，同时细胞代谢产