示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量

1、示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量指导教师指导教师 姜桂兰姜桂兰实验目的v1、通过标准曲线的绘制及样品溶液的测定， 了解示差分光光度法的原理及操作步骤v2、掌握UV-2450型紫外-可见分光光度计的使用方法实验原理v一、UV-2450型紫外可见分光光度计基本组紫外可见分光光度计基本组成及其工作原理成及其工作原理v二、示差分光光度法的原理二、示差分光光度法的原理一、UV-2450型紫外可见分光光度计基紫外可见分光光度计基本组成及其工作原理本组成及其工作原理v1.分光光度法分光光度法 利用紫外利用紫外-可见吸收光谱对物质进行定性和定量分析的方可见吸收光谱对物质进行定性和定量分析的方法就是紫外法

2、就是紫外-可见分光光度法，属于分子吸收光谱，由分子可见分光光度法，属于分子吸收光谱，由分子的外层电子跃迁产生，是宽带吸收光谱。的外层电子跃迁产生，是宽带吸收光谱。 物质对光吸收遵循朗伯物质对光吸收遵循朗伯-比尔定律，即比尔定律，即当入射光波长一当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比与其浓度和液层厚度成正比。v2.分光度计的基本组成光源光源单色器单色器样品室样品室检测器检测器显示显示1 1）光源）光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。有足够的辐

3、射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在3203202500 nm2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射紫外区：氢、氘灯。发射185185400 nm400 nm的连续光谱。的连续光谱。 2 2）单色器）单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波长单色光的光学系统。长单色光的光学系统。 3 3）样品室样品室 样品室放置各种类型的吸收池样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。收池

4、主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。般用玻璃池。4 4）检测器）检测器 利用光电效应将透过吸收池利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍用的有光电池、光电管或光电倍增管。增管。5 5）结果显示记录系统）结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理仪器自动控制和结果处理3.UV-2450型紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计v日本岛津日本岛津v单单色器、双光束方式、光电倍增管检测器单单色器、双光束方式、光电倍增管检测器v

5、特点特点1.低杂散光，高光通量，可对高浓度的样品不进行稀释直低杂散光，高光通量，可对高浓度的样品不进行稀释直接测定接测定 2.应用广泛：可用于分析有机、无机化合物；应用广泛：可用于分析有机、无机化合物；DNA、酶、酶等生化样品；光学材料的特性等生化样品；光学材料的特性3.配备了功能强大的配备了功能强大的UVProbe软件，包含光谱测定、光软件，包含光谱测定、光度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测定到研究解析都可通过它实现。定到研究解析都可通过它实现。操作规程1.打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。打开电源开关，打

6、开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。2.单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖3.完成自检后，单击波长扫描按钮，选择完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式方式”，设定波长及测量方式，设定波长及测量方式（Abs）4.将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动清零键清零。清零键清零。5.取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。6.取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中

7、，打开定量分析界面，取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中，打开定量分析界面，设定波长和测量方式设定波长和测量方式Abs，测定各点吸收值，绘图，测定各点吸收值，绘图7.放入待测样品，测定放入待测样品，测定二、示差分光光度法原理及测量方法示差分光光度法原理及测量方法、示差分光光度法原理、示差分光光度法原理示差分光光度法是应用于高含量组分测定的一种方法。示差分光光度法是应用于高含量组分测定的一种方法。 普通分光度法一般只适合于测定痕量组分，当待测组分普通分光度法一般只适合于测定痕量组分，当待测组分含量较高时，往往于朗伯含量较高时，往往于朗伯-比尔定律产生偏离或因测得的吸光比尔定律产生偏离或因

8、测得的吸光度值超出适宜的的读数范围而引入较大的误差，使准确度降度值超出适宜的的读数范围而引入较大的误差，使准确度降低。而示差法却能很好的解决这一问题。两者的主要区别在低。而示差法却能很好的解决这一问题。两者的主要区别在于参比溶液不同，普通的分光光度法采用不含已显色被测组于参比溶液不同，普通的分光光度法采用不含已显色被测组分的空白作参比溶液，而示差分光光度法则采用一合适浓度分的空白作参比溶液，而示差分光光度法则采用一合适浓度的标准溶液作参比溶液。的标准溶液作参比溶液。例：若普通的分光光度法测得试样的例：若普通的分光光度法测得试样的T=5.0%, 配制一浓度配制一浓度稍低的标准溶液稍低的标准溶液S

9、,测得测得T=10.0%, 二者之差为二者之差为5%;用差示用差示法时，以此标准溶液法时，以此标准溶液S来调节仪器令来调节仪器令T=100%,再来测定再来测定试样试样X,可得可得T=50.0%, 二者之差为二者之差为50%。这样，差示法相。这样，差示法相当于把标尺扩大了当于把标尺扩大了10倍，测量读数的相对误差也就缩小倍，测量读数的相对误差也就缩小了了10倍。倍。 普通光度法以纯溶剂或空白试剂作参比溶液，测得标准溶液普通光度法以纯溶剂或空白试剂作参比溶液，测得标准溶液及试液的吸光度分别及试液的吸光度分别为为AsAs和和AxAx，对应的透光度为，对应的透光度为TsTs和和TxTx，根据比，根据比

10、尔定律尔定律 AxAxbCxbCx，AsAsbCsbCs ArArAxAxAsAsb(Cxb(Cx-Cs)-Cs)bC bC 上式意义：在符合比尔定律测定浓度范围内，示差法测得的上式意义：在符合比尔定律测定浓度范围内，示差法测得的相对吸光度相对吸光度(Ar(Ar) )与被测溶液和参比溶液的浓度与被测溶液和参比溶液的浓度差差(Cx(CxCs,Cs,即即C)C)或成正比，即可用于定量测定。此时试液的或成正比，即可用于定量测定。此时试液的Tr,xTr,x5050，令读数，令读数落在适宜的范围内，提高了测定的准确度落在适宜的范围内，提高了测定的准确度。 差示测定试液浓度差示测定试液浓度(Cx(Cx)

11、)时，采用浓度稍低于试样的标准溶液时，采用浓度稍低于试样的标准溶液(Cs)(Cs)作参比溶液调节仪器透光度读数为作参比溶液调节仪器透光度读数为100100(A=0)(A=0)，再测定试样，再测定试样溶液的吸光度溶液的吸光度(Ar(Ar称为相对吸光度称为相对吸光度) )，相对应的透光，相对应的透光度度(Tr(Tr) )称为相称为相对透光度。对透光度。、示差分光光度法的测定步骤：、示差分光光度法的测定步骤：1 1）采用浓度为）采用浓度为CsCs的标准溶液为参比溶液的标准溶液为参比溶液; ; 2 2）测定一系列测定一系列CC已知的标准溶液的相对吸光度已知的标准溶液的相对吸光度(Ar(Ar) )； 3

12、 3）绘制绘制ArAr-C-C工作曲线；工作曲线； 4 4）由测得试样溶液的相对吸光度由测得试样溶液的相对吸光度Ar,xAr,x，即可从，即可从ArArCC工作工作曲线上求出曲线上求出CC；5)5)根据下式求出试样浓度根据下式求出试样浓度CxCx ：CxCxCs+CCs+C试剂与器材v UV-2450紫外紫外-可见分光光度计，可见分光光度计，v石英比色皿（石英比色皿（1cm），），v容量瓶（容量瓶（50ml），），v移液管（移液管（1ml、10ml），），v未知样品液。未知样品液。实验方法及步骤v1.标准溶液的配制标准溶液的配制v非那西汀标准溶液（非那西汀标准溶液（100g/ml）：准确称取非

13、那西汀）：准确称取非那西汀0.0500g于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移到于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移到500ml容量容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用v2.吸收曲线绘制吸收曲线绘制v 移取移取5.00ml非那西汀标准溶液于非那西汀标准溶液于50ml容量瓶中，蒸馏水容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行全波长扫描，绘稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行全波长扫描，绘制吸收曲线，找出最大波长。制吸收曲线，找出最大波长。v3.绘制工作曲线绘制工作曲线v取非那西汀标准溶液取非那西汀标准溶液5ml，10ml，15ml，20ml，30ml分别分

14、别于于5个个50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于最大波长处容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于最大波长处测定吸光度值，以测定吸光度值，以A对对c作图绘制工作曲线。作图绘制工作曲线。v4.样品测定样品测定v取取10ml样品（浓度在样品（浓度在40-60g/ml）于）于50ml容量瓶中，蒸馏容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，于最大波长处测定吸光度值。水稀释至刻度，摇匀，于最大波长处测定吸光度值。实验结果v1.绘制非那西汀的吸收曲线绘制非那西汀的吸收曲线v2.绘制工作曲线绘制工作曲线v3.可由显示器直接读出测定结果，记录可由显示器直接读出测定结果，记录实验注意事项实验注意事项v1.仪器使用时要符合仪

15、器工作环境的要求仪器使用时要符合仪器工作环境的要求:v 稳固的工作台稳固的工作台 ，适宜的温度、湿度，适宜的温度、湿度，v 避免：日光直射、震动、强电场、强磁场。避免：日光直射、震动、强电场、强磁场。v2.仪器保养和维护方法仪器保养和维护方法 ：用软布稍微蘸取水，轻柔擦拭外表面，避免蘸取过多水而流用软布稍微蘸取水，轻柔擦拭外表面，避免蘸取过多水而流入仪器内部。入仪器内部。清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。v3.每半年进行一次波长准确度检查。每半年进行一次波长准确度检查。v4.比色池的使用规则比色池的使用规则v 1）手拿部位：

16、毛玻璃面）手拿部位：毛玻璃面v 2）用镜头纸擦拭透光面）用镜头纸擦拭透光面v 3）用后及时清洗，放入比色池盒内。）用后及时清洗，放入比色池盒内。5. 注意人身安全和仪器安全注意人身安全和仪器安全附：uv-2450使用说明1、打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。、打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。2、单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖、单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖3、完成自检后，单击波长扫描按钮，选择、完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式方式”，设定波长及测量方式，设定波长及测量方式（Abs）4、将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样