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文档简介
1、实实 验验 二二 试管苗试管苗增殖增殖与与生根生根培养培养一、实验目的1.掌握试管苗增殖与生根的基本方法。2.了解外源激素和营养物质对试管苗生长发育的调节作用。二、实验原理1.增殖和生根是植物组织培养实现快速繁殖的基本环节。2.细胞分裂素能实现植物的增殖,生长素或不加任何激素能够实现植物生根,很多时候生根时会降低培养基的无机盐浓度。离体条件离体条件植物组织培养过程植物组织培养过程34512White培养基配方(培养基配方(mg/L)成份成份Na2SO4KNO3CaNO3.4H2OMgSO4.7H2ONaH2PO4.H2OKCl含量含量2008030072016.565H3BO3MnSO4.4H
2、2OZnSO4.7H2OMoO31.5730.0001肌醇肌醇烟酸烟酸盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇盐酸硫胺素盐酸硫胺素甘氨酸甘氨酸1000.30.10.13FeSO4.7H2ONa2.EDTA.2H2O556074601962年日本的年日本的Murashige 和美国的和美国的Skoog 二人为烟草二人为烟草培养设计。是培养设计。是最常用最常用的,也是的,也是最基本最基本的培养基。的培养基。MS培养基培养基无机盐含量较高无机盐含量较高,配比合理,符合植物细胞生长的营,配比合理,符合植物细胞生长的营养生理需求;硝酸盐含量和氨离子浓度较高。养生理需求;硝酸盐含量和氨离子浓度较高。特点特点具有具有较低的无机
3、盐较低的无机盐。 White培养基(培养基(1963)White1963设计设计特点特点细胞分化过程中对无机盐要求较低,有利于细胞分化过程中对无机盐要求较低,有利于分化。特别适用于根的分化。分化。特别适用于根的分化。三、实验操作无菌操作同前增殖培养基增殖培养基(有标签有标签 Z)生根培养基生根培养基三、实验操作(一)试管苗增殖培养1.实验材料:文心兰2.增殖培养基配方:MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L 文心兰试管苗继代增殖3.操作步骤3.1 铺开无菌纸,将一丛文心兰试管苗置于无菌纸上,分离成单株。3.2用手术刀认真清理基部的老叶、黄叶和残留培养基。3.3接种至增殖培养基上,4个单株/人。3.4标签上记录姓名、日期。(二)试管苗生根培养1.实验材料:滁菊2.生根培养基配方:MS+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L 滁菊生根3.操作步骤3.1 铺开无菌纸,用剪刀将培养瓶中的滁菊单株从基部分离,置于无菌纸上。3.2用剪刀将滁菊单株剪成2-3段。3.3接种至生根培养基上。3.4贴上标签,记录姓名、日期。四、实验记录(一)增殖率、增殖数的计算增殖率(%)=有新芽的外植体数/接种外植体数平均增殖数=新芽数/接种外植体数(二)生根率、生根数的计算五、注意事项(一)每位同学一张
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