Exp06减数分裂

1、实验七实验七 减数分裂花粉母细胞制片及观察减数分裂花粉母细胞制片及观察一、实验目的一、实验目的1. 学习和掌握细胞减数分裂学习和掌握细胞减数分裂CS标本标本的制片技术和方法的制片技术和方法2. 熟悉减数分裂的全过程及各个时熟悉减数分裂的全过程及各个时期期CS的动态变化和形态特征的动态变化和形态特征二、实验原理二、实验原理 减数分裂减数分裂: 特殊的真核细胞分裂特殊的真核细胞分裂连续两次核分裂连续两次核分裂M& M前期前期变化复杂变化复杂;同源同源CS联会联会、片段互换片段互换后期后期同源同源CS分离分离,数目减半数目减半 以动以动、植物植物雄性生殖分裂雄性生殖分裂较为方便较为方便. .

2、在适当的时机在适当的时机采集花蕾采集花蕾( (花序花序) )或精巢或精巢, ,经适当技术处理经适当技术处理, ,可在显可在显微镜下观察细胞的减数分裂过程微镜下观察细胞的减数分裂过程百合减数分裂前期的五个时期百合减数分裂前期的五个时期减数分裂模式图减数分裂模式图 三、实验材料三、实验材料、器具器具、药品试剂药品试剂 大葱大葱(Allium fistulosum, 2n=16)幼嫩花序幼嫩花序 显微镜显微镜, ,载片载片, ,盖片盖片, ,镊子镊子, ,解剖针解剖针, ,吸水吸水纸纸, ,铅笔铅笔, ,酒精灯等酒精灯等 卡诺固定液卡诺固定液, 45乙酸乙酸; 0.5醋酸洋醋酸洋红红, ,95、70

3、乙醇乙醇四、实验步骤四、实验步骤1. 取材取材 制片成败的关键因素制片成败的关键因素大葱大葱: : 伞形花序伞形花序, ,顶生顶生, ,两性花两性花; ;春季花序嫩绿饱满春季花序嫩绿饱满、总苞光滑总苞光滑蚕豆蚕豆、玉米玉米、百合百合、蝗虫蝗虫2. 固定固定 卡诺固定液卡诺固定液: 12-24h 95-80-70梯度乙醇梯度乙醇依次漂洗依次漂洗5-30min 70乙醇保存乙醇保存,43. 剥取花药剥取花药 摘取摘取2-3个小花个小花,置吸水纸上除去置吸水纸上除去保存液保存液(可可用用蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗后再吸干后再吸干,尤其是采用尤其是采用醋酸醋酸洋红染色法洋红染色法一定要将乙醇洗净一定要将乙醇

4、洗净) 解剖出的解剖出的花药置洁净载玻片上花药置洁净载玻片上;镊子镊子挤出挤出花粉母细胞花粉母细胞,小范围内涂成薄层小范围内涂成薄层4. 染色与压片染色与压片 加加一滴一滴染液染液(不宜多不宜多),稍后将稍后将所有所有可见花药壁残渣清除干净可见花药壁残渣清除干净 加盖片加盖片,吸去多余染液吸去多余染液,拇指垂直拇指垂直紧压紧压,使使CS散开分布于同一平面散开分布于同一平面 勿使盖片发生搓动勿使盖片发生搓动,以免破坏细胞以免破坏细胞与与CS的完整性的完整性5. 镜检镜检 低倍下区分各时期的花粉母细胞低倍下区分各时期的花粉母细胞、二二/四分体以及花粉粒四分体以及花粉粒、药壁组织药壁组织 高倍下观察

5、高倍下观察,鉴别各分裂时期的鉴别各分裂时期的CS形形态结构态结构、数目及行为变化数目及行为变化 药壁组织药壁组织: 小小,着色较深着色较深中期中期I后期后期I末期末期I前期前期II四分孢子四分孢子花粉粒花粉粒制片的简要步骤制片的简要步骤 小花小花2-3个个冲洗冲洗吸干吸干剥离花药剥离花药1d染液染液挤出花粉母细胞挤出花粉母细胞去除去除残余组织残余组织染色染色5min加盖片加盖片吸吸水纸水纸压片压片镜检镜检注意事项注意事项 注意区分性母细胞及小孢子形成过程中各时注意区分性母细胞及小孢子形成过程中各时期细胞的特点期细胞的特点, ,并与花药壁细胞进行区分并与花药壁细胞进行区分: :药壁细胞药壁细胞减数分裂的各时期细胞减数分裂的各时期细胞细胞形态细胞形态方形方形圆形圆形( (一个性母细胞分裂形一个性母细胞分裂形成的子细胞保持在一起成的子细胞保持在一起) )细胞大小差异细胞大小差异较小较小较大较大( (差异十分显著差异十分显著) )染色程度染色程度较深较深较浅较浅五、作业五、作业1. 制作能观察到较多分裂相制作能观察到较多分裂相,且各时期图象清且各时期图象清晰的制片晰的制片1-2张张.2.绘制你所观察到的减数分裂典型时期细胞绘制你所观察到的减数分裂典型时期细胞、CS图象图象, ,并简要说明并简要说明CS的行为特征的行为特征. .3. 分