000001be_徐露-应用药理3论文

1、PAF含量的不同厂家银杏叶提取物制剂对家兔血小板聚集率及 影响徐露 董志 王如伟 黄黎【摘要】目的观察四个厂家的六种银杏叶提取物制剂对家兔血小板聚集率及PAF含量的影响。方法 采用体内实验，观察六种银杏叶提取物制剂对由花生四烯酸（AA、二磷酸腺苷（ADP和血小板活化因子（PAF）诱导的家兔血小板聚集作用的影响，以及对给药前后家兔血小板活化因 子（PAF）含量的影响。结果几个厂家的银杏制剂均能抑制AA ADP PAF诱导的家兔血小板聚集（p<0.01, p<0.05），并能够降低血清中 PAF的含量（p<0.01, p<0.05 ）。结论 银杏叶提取物制剂 具有抗血小板聚

2、集作用，并能显著降低PAF含量，不同厂家的银杏制剂作用强度也存在差异性，为临床治疗缺血性心脑血管疾病提供了参考。银杏叶具有重要的药用价值， 到目前为止已知其化学成分的银杏叶提取物多达 160余种， 最主要 的是黄酮苷和银杏内酯两类活性成分， 药理实验表明， 银杏提取物具有抗氧化、 改变血液流变学、 抗菌及提高免疫力等作用。1. 材料与方法1.1 仪器与试剂日本大耳白兔，体重 2.0土 0.2kg，雌雄各半，由重庆医科大学实验动物中心提供；银杏叶提取物 制剂（浙江康恩贝、江苏省某药企、上海某药企A、上海某药企 B）； AA（sigma）使用时将其溶解在1%碳酸钠溶液中，配成 0. 35mmol/

3、L的浓度；ADP（ sigma）溶于磷酸盐缓冲液，最终浓度 为300pmol/L ; PAF （cayman）溶解在 PH为7.6的含0.25%小牛血清蛋白的 Tris-NaCI溶液中， 终浓度为 3.6nmol/L ；枸橼酸钠（北京中杉金桥生物技术公司） 蒸馏水配成 3.8%的浓度； TYXN-96 多功能智能血液凝聚仪（上海通用技术研究所研制）；兔血小板活化因子 （PAF）ELISA 试剂盒（ Uscnlife ）；酶标仪（ spectra maxm2 多功能酶标仪） 。1.2方法1.2.1 分组及给药方法日本大耳白兔133只，随机分为19组，每组7只：生理盐水组、浙江康恩贝三种银杏制剂

4、a （批 号 090307）、b（批号 090307）、c（批号 081112）各自分为高剂量 （41.06mg/kg）、中剂量（20.53mg/kg）、 低剂量（10.27mg/kg） , ig给药，每日三次，连续 7d;江苏某药企银杏制剂（批号 08071501）分为 高剂量（41.06mg/kg ）、中剂量（20.53mg/kg）、低剂量（10.27mg/kg） , ig给药，每日三次，连续 7d;上海某药企A银杏制剂（批号080502）分为高剂量（53.36mg/kg）、中剂量（26.68mg/kg）、低剂量（13.34mg/kg） , ig给药，每日三次，连续 7d;上海某药企 B银

5、杏制剂（批号0852049）分为高剂 量（41.07mg/kg）、中剂量（20.53mg/kg）、低剂量（10.27mg/kg），ig给药，每日三次，连续 7d。以上 各组中剂量均根据文献1由人体剂量换算为家兔等效剂量。检测血小板聚集率及 PAF含量每只动物首次给药前，耳缘静脉抽血1ml，室温放置2h取血清，检测给药前 PAF含量。在第7d给药后1h,心脏取血7ml，分出1ml用于检测给药后 PAF的含量，剩余6ml用3.8%枸橼酸钠1： 9抗凝，800r/min离心10min，取上清得富血小板血浆 （PRP），剩余部分3000r/min速度离心15min , 取贫血小板血浆（PPP）。用PP

6、P调节PRP,使PRP血小板数目在 360 x 109/l。测定并记录在不 同诱导剂下1min、5min及最大血小板聚集率。血小板聚集率（%）=（对照组血小板聚集率-给药组血小板聚集率）/对照组血小板聚集率x100统计方法血小板聚集率检测用生理盐水组与给药组比较，采用成组t检验；PAF含量检测采用给药前后自身对照，用配对t检验。2.2结果家兔血小板聚集率的检测结果检测结果表明，和对照组相比四个药厂的六种银杏叶提取物产品均能抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集（p<0.05 , p<0.01 ），但主要是抑制 PAF引起的血小板聚集。其中杭州某药业 有限公司的a、b、c产品对

7、PAF诱导的血小板聚集抑制率更高。（见表1-3）表一 AA诱导的血小板聚集作用（x ± s,n=7）组别给药剂量mg/kg给药次数（次 /d）给药后聚集率（%）血小板聚集抑制率（%）1min5minMax生理盐水组等容积330.12 士 5.2454.15 士 7.5655.69 士 9.84浙江康恩贝a产品（高）41.06328.68 士 4.9838.62 士 6.34*43.55 士 6.96*21.80浙江康恩贝a产品（中）20.53329.50± 5.6340.66± 6.53*42.80± 7.13*23.15浙江康恩贝a产品（低）10.27

8、330.74 士 5.7242.49 士 6.58*46.14 士 7.6217.15浙江康恩贝b产品（高）41.06327.15 士 4.5735.64 士 5.83*40.71 士 6.76*26.90浙江康恩贝b产品（中）20.53329.55 士 5.8937.22 士 6.07*43.34 士 7.01*22.18浙江康恩贝b产品（低）10.27328.05 士 4.3438.41 士 6.44*44.28 士 7.93*20.50浙江康恩贝c产品（高）41.06328.69 士 4.4734.67 士 5.75*39.93 士 6.96*28.30浙江康恩贝c产品（中）20.533

9、29.59 士 5.0436.93 士 6.29*42.26 士 6.48*24.12浙江康恩贝c产品（低）10.27330.24 士 5.3336.68 士 6.16*43.80 士 7.37*21.35江苏某药企（高）41.06330.75 士 5.4640.86 士 6.99*44.23 士 7.31*18.06江苏某药企（中）20.53330.11 士 5.8141.74 士 6.67*46.52 士 7.9716.47江苏某药企（低）10.27329.43 士 5.7744.38 士 7.25*47.59 士 8.0614.54上海某药企A （高）53.36328.17 士 5.51

10、40.34 士 6.56*44.73 士 7.68*19.68上海某药企A （中）26.68329.48 士 5.4842.52 士 6.83*45.85 士 7.3917.67上海某药企A （低）13.34330.09 士 5.4543.34 士 6.94*45.92 士 7.4417.54上海某药企B （高）41.06328.64 士 5.6140.79 士 6.70*42.85 士 7.02*23.06上海某药企B （中）20.53330.83 士 5.5341.28 士 7.46*43.60 士 8.01*21.71上海某药企B （低）10.27329.12 士 5.3641.87 士

11、 7.55*44.40 士 7.75*20.27与 NS 组比较，*p<0.01,*p<0.05表二ADP诱导的血小板聚集作用（x ± s,n=7）组别给药剂量mg/kg给药次数（次 /d）给药后聚集率（%）血小板聚集抑制率（%）1min5minMax生理盐水组等容积330.12 士 5.2454.15 士 7.5655.69 士 9.84浙江康恩贝a产品（高）41.06331.98 士 5.4740.47 士 7.06*44.59 士 7.45*20.42浙江康恩贝a产品（中）20.53331.43 士 5.3743.81 士 6.7945.31 士 7.86*19.1

12、3浙江康恩贝a产品（低）10.27330.85 士 5.8345.97 士 6.9847.32 士 7.9915.55浙江康恩贝b产品（高）41.06329.79 士 4.4634.83 士 5.93*40.17 士 6.78*28.31浙江康恩贝b产品（中）20.53330.88 士 5.5736.47 士 5.76*42.90 士 6.91*23.43浙江康恩贝b产品（低）10.27331.67 士 5.6939.82 士 6.27*45.06 士 8.13*19.58浙江康恩贝c产品（高）41.06330.51 士 5.4534.77 士 5.60*40.54 士 6.83*27.65浙

13、江康恩贝c产品（中）20.53331.57 士 5.8635.48 士 6.31*43.73 士 7.22*21.95浙江康恩贝c产品（低）10.27330.75 士 5.7037.54 士 6.48*45.91 士 8.3618.06江苏某药企（高）41.06330.66 士 5.5344.67 士 7.9445.45 士 7.56*18.88江苏某药企（中）20.53331.65 士 5.4345.95 士 7.9246.11 士 8.2417.70江苏某药企（低）10.27331.73 士 5.6046.18 士 8.3548.69 士 9.0513.10上海某药企A （高）53.363

14、30.48 士 5.5843.29 士 7.4144.50 士 7.36*20.58上海某药企A （中）26.68331.81 士 5.8344.23 士 6.7945.96 士 8.6717.97上海某药企A （低）13.34329.42 士 4.8345.78 士 7.2649.04 士 9.3712.48上海某药企B （高）41.06332.03 士 5.5942.33 士 6.95*44.63 士 7.84*20.35上海某药企B （中）20.53330.47 士 5.1344.82 士 7.5145.06 士 8.13*19.58上海某药企B （低）10.27330.51 士 5.4

15、544.77 士 7.6047.29 士 8.2715.60与 NS 组比较，*p<0.01,*p<0.05表三PAF诱导的血小板聚集作用（x ± s,n=7）组别给药剂量mg/kg给药次数（次 /d）给药后聚集率（%）血小板聚集抑制率（%）1min5minMax生理盐水组等容积329.85 士 5.3349.15 士 7.5456.77 士 10.23浙江康恩贝a产品（高）41.06322.6 士 4.72*35.1 士 6.23*38.25 士 5.79*32.62浙江康恩贝a产品（中）20.53323.7 士 3.84*38.8 士 6.31*40.80 士 6.7

16、5*28.13浙江康恩贝a产品（低）10.27325.05 士 5.6844.42 士 6.8745.71 士 7.38*19.48浙江康恩贝b产品（高）41.06322.6 士 4.43*29.8 士 5.14*31.95 士 5.25*43.72浙江康恩贝b产品（中）20.53323.2 士 4.53*34.0 士 5.36*34.67 士 5.67*38.93浙江康恩贝b产品（低）10.27325.84 士 5.3636.5 士 6.19*39.60 士 6.68*30.24浙江康恩贝c产品（高）41.06324.38 士 4.4330.1 士 5.32*32.80 士 5.44*42.

17、22浙江康恩贝c产品（中）20.53323.40 士 4.2537.6 士 6.48*35.71 士 7.38*37.10浙江康恩贝c产品（低）10.27324.03 士 4.5638.97 士 6.54*40.20 士 6.93*29.19江苏某药企（高）41.06322.87 士 4.8936.5 士 6.26*38.71 士 6.40*31.81江苏某药企（中）20.53323.1 士 4.24*37.5 士 6.68*39.23 士 6.35*30.90江苏某药企（低）10.27324.66 士 5.7938.81 士 6.46*40.93 士 6.66*27.90上海某药企A （高）

18、53.36323.5 士 5.02*37.2 士 6.67*37.70 士 6.39*33.59上海某药企A （中）26.68323.1 士 5.31*37.1 士 6.23*37.94 士 7.11*33.17上海某药企A （低）13.34322.6 士 5.30*39.40 士 6.75*39.79 士 6.90*29.91上海某药企B （高）41.06321.16 士 5.14*37.6 士 6.48*38.46 士 6.13*32.25上海某药企B （中）20.53322.24 士 5.47*38.97 士 6.54*39.57 士 6.52*30.30上海某药企B （低）10.273

19、22.08 士 5.33*36.5 士 6.26*40.32 士 6.89*28.98与 NS 组比较，*p<0.01,*p<0.05222家兔PAF含量检测结果检测结果表明四个药厂的六种银杏叶提取物均能降低家兔血清中的PAF含量（p<0.05）。（见表4）表四PAF含量检测结果（x ± s,n=7）组别PAF含量（ng/ml ）给药前给药后生理盐水组6.69 士 2.726.74 士 3.03浙江康恩贝a产品（高）6.44士 2.144.20 士 1.65*浙江康恩贝a产品（中）6.65士 2.334.36 士 1.41*浙江康恩贝a产品（低）6.59士 2.27

20、4.88 士 1.83浙江康恩贝b产品（高）6.47士 2.214.08 士 1.25*浙江康恩贝b产品（中）6.50士 2.664.12 士 1.04*浙江康恩贝b产品（低）6.71 士 2.834.13 士 1.17*浙江康恩贝c产品（高）6.53士 2.674.10 士 1.19*浙江康恩贝c产品（中）6.51 士 1.984.15 士 1.62*浙江康恩贝c产品（低）6.43士 2.074.30 士 1.80江苏某药企（高）6.63士 2.114.31 士 1.55*江苏某药企（中）6.53士 2.284.24 士 1.59*江苏某药企（低）6.58士 2.674.53 士 1.97上

21、海某药企A （高）6.43士 2.134.22 士 1.55*上海某药企A （中）6.50± 2.094.30 ± 1.64*上海某药企A （低）6.39土 2.094.33 ± 1.87上海某药企B （高）6.43土 1.984.14 ± 1.32*上海某药企B （中）6.49± 2.004.20 ± 1.72*上海某药企B （低）6.55± 1.974.45 ± 1.85给药前后比较，*p<0.01,*p<0.053.讨论血小板聚集有多种诱导机制，AA、ADP、PAF是通过三条不同的机制来诱导血小板

22、聚集的，这三条途径也是血小板聚集的主要途径。虽然途径不一样，但最终都是通过降低血小板cAMP水平和增加Ca2+浓度而引起血小板活化的，随之血小板黏附，从而形成血栓。AA是中等强度的血小板聚集诱导剂，通过 COX的作用转变为TXA2,发挥血小板聚集作用。ADP是通过打开血小板细胞膜上的钙离子通道促进外钙内流而引起血小板活化。PAF是迄今为止发现的最强的血小板聚集剂，广泛存在于各种组织，它主要由中性粒细胞、血小板、肥大细胞、内皮细胞、巨噬细胞 等产生，具有广泛的生物活性。通过本实验发现，四个厂家的六种银杏叶提取物产品对PAF诱导的血小板聚集的抑制作用强于AA、ADP，其中浙江康恩贝的 a、b产品拮抗PAF受体更为显著，这可能与其有更高的银杏内 酯含量有关。不仅如此，四个厂家的六种银杏叶提取物产品均能降低家兔血清中PAF的含量，这对于预防与控制血栓的形成与发展具有重要的意义。阿司匹林和氯吡格雷是临床上抗血小板聚集的常用药，分别阻断A