常用大肠杆菌感受态的区别

1、常用大肠杆菌感受态 JM109 ，DH5a ，BL21 等的区别1：DH5a 菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列 质粒载体转化时，可与载体编码的 B-半乳糖苷酶氨基端实现 a-互 补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型：F-, © 80dlacZ M15 (lacZYAargF)U169 , deoR, recAI , endA1 , hsdR17(rk-, mk+) , phoA, supE44,入,thi-1 , gyrA96 , relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7 启动子的表达载体(如pE

2、T系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于 入噬菌体DE3区， 该区整合于 BL21 的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型： F-，ompT， hsdS(rBB-mB-)，gal， dcm(DE3)3：BL21(DE3) pLysS 菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋 白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F-, ompT hsdS (rBB-mB) , gal, dcm (DE3, pLysS , Camr4：JM109 菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M

3、13 phage载体 进行转染时，由于载体 DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZ M1进行a互补，从而显示B半乳糖苷酶活性，由此很容 易鉴别重组体菌株基因型：recAI，endA1，gyrA96 , thi 1，hsdR17, supE44，relAI , (lacproAB)/F 'traD3，6proAB+， lacIq， lacZ M155： TOP10 菌株该菌株适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳 定遗传。基因型：F- , mcrAA (mrr-hsd RMS-mcrBC),© 80 , lacZ M15 AacX 74, rec

4、A1 , ara 139A (araleu)7697 , galU , galK , rps, (Strr) endA1 ， nupG 6： HB101 菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型： supE44， hsdS20(rB-mB)， recA13， ara14， proA2， lacY1， galK2， rpsL20， xyl-5， mtl-1 ， leuB6， thi-17： M110 或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有 Dam 甲基化酶和 Dcm 甲基化酶，前者可 以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在 CCA/TGC序列 的第一个胞嘧啶

5、C-5 位置上引入甲基。 常用的菌株都会产生 dam,dcm ，从而受到甲基化的影响 .部分限制性内切酶对甲基化的 DNA不能切割，如Fbal和Mbol等， 一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如 Xbal, Bcll 等。而且甲基化只发生在特定序列，以 XbaI 为例，只有在位点序列 旁出现GA或TC,该Xbal位才会被甲基化。 而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法： (1)选用上述酶的同功酶，如 Sau3Al， DNA 识别切割位点与 Mbol 相同；但不受甲基化影响；( 2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行 DNA 的制备，如 E.co

6、li JM110 和链霉菌等， 前者 Dam 和 Dcm 甲基化酶已敲出， 而后者细胞内本就 没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA 就能被上述酶切割。 8： E.coli JM110要排除 dam,dcm 甲基化的影响，需要用特定的 dam-,dcm- 的菌株，如 JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会 被甲基化 .各种感受态细胞的区别 用途 特征Xl1-Blue 菌株基因型： endA1 gyrA96(nalR) thi- 1 recA1 relA1 lac glnV44 FTn10proAB+ laclq (lacZ)M15 hsdR17(mMK+

7、)。 特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F -ompT gal dem Ion hsdSB(rB- mB-)入(DE3 lacl lacUV5T7 gene 1 ind1 sam7 nin5) 。特点：该菌株用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋 白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于 入噬菌体DE3 区的 lacUV5 启动子，该区整合于 BL21 的染色体上。该菌适合于非 毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)ply 菌株基因型：F- ompT gal dcm Ion hsdSB(

8、rB- mB-)入(DE3) pLysS(cmR。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达 T7溶 菌酶的基因， T7 溶菌酶能够降低目的基 因的背景表达水平，但不干扰 lPTG 诱导的表达。 适合于毒性蛋白 和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达DH5 a菌株基因型： F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG 80dlacZ M15 (lacZYA)U169, hsdR17(rK-,入-特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其80dlacZ M15基因的表达产物与pUC载体编码的 性半乳糖苷酶氨基端实现 a互补，可用于蓝

9、白斑筛选。 recA1 和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度 质粒 DNA 的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109 菌株基因型： endA1 glnV44 thi- 1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (l-apcroAB)e14- FtraD36 proAB+ lacIq lacZ M15-hSd+17(rK特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达 , 可用于 M13 克隆序列测 定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B 菌株基因型：F- mcrA (m-rhrsdRMS-mcrBC) 80dlacZ M15 lac

10、X74 endA1recA1 deoR (ara,leu)7697 araD139 galU galK n upG rpsL -入The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -complaementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylatedcytosine or adenine residues ，useful for plasmid rescue

11、procedures 。ELECTROMAX DH10B T1 CELLS说明：DH10B 细胞是高转化效率的 E. coli ，可以完美应用于大多数实验应 用。DH10B 基因型具有以下特点：? lacZ M用于重组克隆的蓝/白斑筛选? 消除了 mcrA、mcrBC、mrr 和 hsdRMS 限制系统，允许构建更多具 有代表性的基因组文库 (1,2)? endA1 突变，可以增加质粒产量和数量? 高效率转化大小为 150 kb 的质粒，用于产生 cDNA 或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型，to nA能够提供对T1和T5噬菌体 感染的抗性 (DH10B? T1R)。DH10B?的基因型：F mcrA -(mdRMS-mcrBC) © 80lacZ M15 lacX74 recAI en dA