实验6酶的特异性ppt课件

1、实验六实验六 酶的特异性酶的特异性生物化学实验之生物化学实验之山东师范大学生命科学学院山东师范大学生命科学学院【实验目的】【实验目的】 学习酵母蔗糖酶粗提液和唾液淀粉学习酵母蔗糖酶粗提液和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。【实验原理】【实验原理】 酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。严格的选择性，即酶的特异性。 淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗

2、糖淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。糖。 Benedict试剂含有试剂含有Cu 2+）常用于检）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。沉淀。【器材及试剂】【器材及试剂】（一器材：（一器材： 1. 恒温水浴锅恒温水浴锅 2. 试管及试管试管及试管架架 3. 离心机离心机 4. 吸量管吸量管 5.烧杯、量筒烧杯、量筒 、漏斗等、漏斗等（二试剂：（二试剂： 1. 2%蔗糖蔗糖 2. 1%淀粉内含淀粉内含0.3%的的NaCl） 3. 唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶

3、液 4. 蔗糖酶溶液蔗糖酶溶液 5. Benedict试剂试剂【实验步骤】【实验步骤】（一淀粉酶的特异性（一淀粉酶的特异性1.唾液淀粉酶溶液的制备：唾液淀粉酶溶液的制备： 先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管1支，支，取唾液无泡沫约取唾液无泡沫约2ml，蒸馏水，蒸馏水20倍稀释，倍稀释，备用。备用。2.取试管取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：支，标号，按下表所列的次序操作：试剂试剂试管编号试管编号123451%淀粉溶液淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液蔗糖溶液（ml）1.01.0唾液淀粉酶唾液淀粉酶（ml）1.01.01.0蒸馏水（蒸馏水（ml）1.01.0

4、1.0 3. 摇匀，置37恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。 (二二) 蔗糖酶的特异性蔗糖酶的特异性1. 蔗糖酶溶液的制备：蔗糖酶溶液的制备： 取活性干酵母取活性干酵母1.0g，置于研钵中，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸馏水至总体积约为，再加蒸馏水至总体积约为20ml，过滤或离心，滤液或上清液，过滤或离心，滤液或上清液备用。备用。2. 取试管取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：支，标号，按下表所列的次序操作：试剂试剂试管编号试管编号123451%淀

5、粉溶液淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液蔗糖溶液（ml）1.01.0蔗糖酶（蔗糖酶（ml）1.01.01.0蒸馏水（蒸馏水（ml）1.01.01.03. 摇匀，摇匀， 置置37恒温水浴保温恒温水浴保温10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict试剂试剂2ml，再放沸水，再放沸水浴浴5min。观察各管颜色变化，。观察各管颜色变化，并解释实验结果。并解释实验结果。【本卷须知】【本卷须知】 唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是大，稀释倍数可以是50300倍。倍。【思考题】【思考题】 1、 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1

6、min，实，实验结验结果会发生什么样的变化？果会发生什么样的变化？ 2、 酶作用的专一性有哪几种？酶作用的专一性有哪几种？量程的调节量程的调节1.按照从大体积调为小体积的方法调节。按照从大体积调为小体积的方法调节。2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。数字。留意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹留意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。簧弹出而损坏了移液枪。微量移液器的使用方法微量移液器的使用方法枪头吸液嘴的装配枪头吸液嘴的装配在将枪头在

7、将枪头pipette tips套上移套上移液枪时，正确的方法是将移液枪液枪时，正确的方法是将移液枪器垂直插入枪头中，稍微用力器垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。左右微微转动即可使其紧密结合。移液的方法1.吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下23毫米。2.然后慢慢松开按钮回原点。3.接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。移液器的正确放置移液器的正确放置使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞水平放置或