植物组织中叶绿素含量测定3页

1、植物组织中叶绿素含量测定（无机及分析化学实验II-设计性实验）一、 实验目的1设计用分光光度计测定植物组织中的叶绿素2. 学习利用文献资料设计研究方案3. 掌握分光光度计测定植物组织中的叶绿素的原理与方法二、 原理：叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种，均易溶于乙醇、乙醚、酒精和氯仿。叶绿素a 叶绿素b 叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm，且

2、两吸收曲线相交于652nm处。叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，可在663nm和645nm测定试样吸光度（两组份混合试样测定，双波长法），根据LambertBeer定律，列出浓度c与吸光度A之间的关系式：A66382.04ca9.27cb （1）A64516.75ca45.6cb（2）（1）、（2）式中的A663、A645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的吸光度度。ca、cb为叶绿素a、b的浓度，单位为g/L。82.04、9.27为叶绿素a、b在波长663nm时的比吸收系数16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。解方程式（1）（2），则得经验公式：ca=12

3、.7 A663-2.69 A645 （3）cb=22.9 A645-4.68 A663（4）cT=（ca + cb ）=20.2 A645+8.02 A663 （5） 此时，cT为总叶绿素浓度，ca、cb为叶绿素a、b的浓度，单位为mg/L ，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算a、b总叶绿素的浓度。仪器：分光光度计、电子天平、棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光）、小漏斗、滤纸试剂：95%乙醇三、 实验步骤1、试材的采集采集新鲜植株叶片（或含叶绿素的其他组织），夹于双层报纸中，风干（不能置于太阳光下晒）。将风干材料处理成细小颗粒，装入封口塑料袋，避光保存。2、待测液的制备（1）叶绿

4、素的浸提 精密称定风干后的样品（约0.1g）于20mL 95%乙醇中，在室温浸提36-48h。（2）叶绿素浸提液定容提取液过滤到50mL棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光），用95%乙醇定容至50mL，摇匀，置于暗处备用待测。3、测量吸光度取1cm的比色皿，注入上述叶绿素酒精溶液，用95%乙醇为参比液，1cm的比色皿为吸收池，分别在663nm和645nm波长测吸光度，每一波长读三次数，取平均值带入公式计算。如吸光度大于0.8，按倍数准确稀释（稀释倍数为n ），尽量使吸光度的测量值在0.2-0.8范围内。4、结果计算 用测得的吸光度 A663、 A645，代入（3）式计算溶液中叶绿素a的含量；代入（4）式中计算得到叶绿素b的含量，代入（5）式计算得到叶绿素总含量。 计算植株中叶绿素含量时，需要考虑稀释因子。 数据记录及处理：表1波长A1A2A3A平均值663nmA663(平均值)=645nmA645(平均值)=表2cacbcTwT17周星期一、星期二（全天开放）采集新鲜树叶并把样品带到实验室来领塑料密封的试管，然后称量0.1g新鲜样品用研钵磨碎，并用少量酒精洗涤并转移到