2015高级生物化学及实验技术试题答案解析

1、高级动物生化试题问答题：1.简述非编码 RNA(non-coding RNA )的种类、结构特点及其主要功能。非编码 RNA 的种类结构和功能1tRNA 转运 RNA(transferRNA，tRNA)结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA 中发现的。修饰成分在 tRNA 分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5末端具有 G (大部分)或 Co 3末端都以 ACC 勺顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。 有一个反密码子环， 在这一环的顶端有三个暴露的碱基， 称为反 密码子(anticodon ).反密码子可以与 mRN 链上互补的密码子配对。有一 个胸腺嘧啶环。tRN

2、A 具有三叶草型二级结构以及“ L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA 负责特异性读取mRNA 中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。tRNA 为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基 酸运送到核糖体上。鉴于 tRNA 在蛋白质合成中的关键作用，又把 tRNA 称作 第二遗传密码。 tRNA 还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其 他核酸分子参与下， 携带氨基酸转移至专一的受体分子， 以合成细胞膜或细 胞壁组分；作为反转录酶引物参与 DNA 合成；作为某些酶的抑制剂等。有的 氨酰-tRNA 还能调节氨基酸

3、的生物合成。2rRNA 核糖体 RNA( ribosomal RNA, rRNA)核糖体 RNA 是细胞中最为丰富的 RNA 在活跃分裂的细菌细胞中占 80%以上他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是 rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架” ，蛋白质可附着在上面。这种解释很直 接很形象，但是低估了 rRNA 在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表 明，rRNA 并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的 rRNA 可起到识别、选择 tRNA 以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是，按照mRNA 勺指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催

4、化肽键形成而实现。 可以说核糖体是一个大的核酶 （ ribozyme） 。而核糖体的 催化功能主要是由 rRNA 来完成的,蛋白质并没有直接参与。3tmRNA tmRNA 主要包括 12 个螺旋结构和 4 个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链 RNA 吉构。tmRNA 中 H1 由 5端和 3端两个末端形 成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。 H1和H2的5部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似 tRNA 中的二氢尿嘧啶环，称为“ D环。H3 和 H4, H6 和 H7, H8 和 H9, H10和 H11 之间分别形成 Pk1, pK2, pK3, pK4。H4 和 H5

5、 之 间则由一段包含编码标记肽 ORF 的单链 RNA 连接。 H12 由 5 个碱基对和 7nt 形成的环组成， 类似 tRNA中的 TWC 臂和 TWC 环，称为“T”环。tmRNA结构按照功能进行划分可分为 tRNA 类似域（TLD 和 mRN 类似域（MLD, TLD 主要包括 H1,H2,H12, “D环和“T”环，MDL 则包括 ORF 和 H5,这两 部分分别具有类似 tRNA 和 mRNA 勺功能。tmRNA 是一类普遍存在于各种细菌 及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA 它具有 mRNA 分子和tRNA 分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式反式翻译模式中发挥 重

6、要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密 切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别 翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问题的核糖体的崩解。4核仁小 RNA(snoRNA) 绝大多数 snoRNA 可归为两类 boxC/D snoRNA 和 boxH/ACA snoRNA 均具有保守的特征二级结构，boxC/D snoRNA 类能 形成“发夹-铰链-发夹-尾部”状二级结构。boxC/D snoRNA 其分子两端的 box C,boxD 以及末端配对序列能形成保守的“茎-内环-茎”状二级结构， 称为“ K-turn ”结构。

7、大多数 boxC/D snoRNA 和 box H/ACA snoRNA 分 别具有指导 rRNA snRNA 或tRNA 前体中特定核苷 2 -O-核糖甲基化修饰与 假尿嘧啶化修饰的功能；少部分snoRNA 参与 rRNA 前体的加工剪切，与 rRNA 的正确折叠和组装相关。5微 RNAmicroRNAsmiRNA 小分子 RNA它是一类长度为 2125 nt 的单链 RNA 分子片段，有一个很有趣的共同特点，就是它的序列存在于茎环 结构中的茎上。这种茎环结构通常是由 70 多个核苷酸组成的不完全的发 夹结构，上面有一些凸起和环状结构。茎部形成双链 RNA ，但不是严格互 补，可存在错配和

8、GU 摆动配对。据其作用模式的不同可以分为三类：第一 类如 lin4，与 mRN不完全互补，当 miRNA 与靶 mRN 不完全配对结合时， 主要影响其翻译过程而对 mRNA 的稳定性无影响。第二类如 miR39 和 miR171,与其靶 mRN 完全互补，当其与 mRN 完全配对结合后， 分裂切割靶 mRNA 第三类作用模式如 let7，当其与靶 RNA 完全互补配对时， 直接靶向切割 mRN，A 而不完全互补配对时起调节基因表达的作用。6小干扰 RNA(Small interferingRNA； siRNA)siRNA 是长度 20 到 25个核苷酸的双股 RNA 在生物学上有许多不同的用

9、途。目前已知 siRNA 主要 参与RNA 干扰(RNA)现象，以带有专一性的方式调节基因的表达。此外，也参与一些与 RNAi 相关的反应途径，例如抗病毒机制或是染色质结构的改变。其生理意义在于，生物的抗御机制，调控细胞分化与胚胎发育，维持 基因组的稳定以及 RNA 水平上的调控机制。7snRNA (小核 RNA)： 它是真核生物转录后加工过程中 RNA 剪接体(spilceosome )的主要成分，参与 mRN 前体的加工过程。另外，还有端体酶 RNA(telomerase RNA)， 它与染色体末端的复制有关；以及反义RNA(antisense RNA,它参与基因表达的调控。还参与 RNA

10、 剪接和 RNA 修 饰。8eRNA eRNA 从内含子或 DNA 非编码区转录的 RNA 分子，精细调控基因的转录和翻译效率。9SNP RNA 信号识别颗粒 RNA 细胞质中与含信号肽 mRN 识别，决定分泌的RNA 功能分子，它是一种核糖核酸蛋白复合体。能够识别并结合刚从游离核 糖体上合成出来的信号肽，暂时中止新生肽的合成，又能与其在内质网上 的受体(即停靠蛋白质 )结合而将新生肽转移入内质网腔，防止蛋白水解酶 对其损害另外，还有端体酶 RNA(telomerase RNA),它与染色体末端的复制有关；以及反义 RNA(antisense RNA，它参与基因表达的调控。还参与 RNA 剪接

11、 禾口RNA 修饰。10 gRNA 又称引导 RNA真核生物中参与 RNA 编辑的具有与 mRN 互补序列的RNA ,具有 3寡聚 U 的尾巴，中间有一段与被编辑 mRN 精确互补的序列,5 端是一个锚定序列，它同非编辑的 mRNA 序列互补。在编辑时，形成一个编辑 体(editosome),以 gRNAs 内部的序列作为模板进行转录物的校正，同时产 生编辑的mRNAgRNA3 端的 oligo(U)尾可作为被添加的 U 的供体。piRNA 主要存在于哺乳动物的生殖细胞和干细胞中，通过与 Piwi 亚家族蛋白结合形成 piRNA 复合物(piRC)来调控基因沉默途径。 对 Piwi 亚家族蛋白

12、的11 piRNA遗传分析以及 piRNA 积累的时间特性研究发现，piRC 在配子发 生过程中起着十分重要的作用。 还能维持生殖系和干细胞功能和调节翻译和 mRNA 勺稳定性。12 atRNA (反义 RNA 是指与 mRN 互补的 RNA 分子，由于核糖体不能翻译 双链的RNA 所以反义 RNA 与 mRNA 特异性的互补结合，即抑制了该 mRNA 勺 翻译。通过反义 RNA 控制 mRNA 勺翻译是原核生物基因表达调控的一种方式， 反义 RNA也参与了入和 P22 噬菌体的溶菌/溶源状态的控制。2.请以发育生物学(developmentalbiology )、表观遗传学(epigenet

13、ics)、体细胞重编程技术(somatic cell reprogramming)、体细胞克隆(somatic cellcloning)、细胞凋亡(apoptosis) 或诱导干细胞(iPS)、干细胞(stem cell)为关 键词，阅读至少一篇 2010 年以后的外文文献，阐述相关方面研究进展，或有关 技术在动物生殖细胞(卵母细胞、精子)发生、卵泡发育、早期胚胎发育过程 中的应用研究(不少于 2000字，并附上所阅读文献全文)。注意不能抄袭有关 中文文献。动物生化实验技术试题1、 试述分子杂交技术(核酸和蛋白质)的种类、适用范围及特点。核酸分子杂交技术是利用 DNA 变性与复性的原理，在某种

14、理化因素作用下 DNA 双 链分子解链变性后，在 DNA 复性重新形成双螺旋结构时，把不同的 DNA 单链分子 或者DN 与 RNA 勺混合物放在同一溶液中，只要在 DNA 或 RNA 单链分子之间存在一 定的碱基互补配对关系，就可以在 DN 之间或 DNA 与 RNA 之间形成杂化的双链。蛋 白质分子杂交是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。面重点介绍三种常用的分子杂交技术。(1)Southern 杂交-DNA 和 DNA 分子之间的杂交southern 杂交主要用来研究 DN 分子中某一基因位置、某一专一序列在待检样品 中存在与否及两种核酸分子之间的相似性。1、用于对基因组中特定基因的定

15、位 及检测。2、用于从基因文库中找到所需要的基因。(2)Northern 杂交 DNA 口 RNA 分子之间的杂交。目前主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异性mRN 的表达水平或比较不同组织或细胞中同一基因的表达情况，如在基囚工程中是检测目的基因是否转录 出 mRN的方法。如果 RNA 分子在大小和含量上与正常情况不同，可以考虑是否有 调控区的突变或剪接部分的突变。(3)western 杂交蛋白质分子 (抗原一抗体 )之间的杂交。 可用于检测样品中特异蛋白质是否存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及 蛋白质分子的相互作用研究等。如检测目的基因在受细胞中有没有翻译出相应 的蛋白质，检测病人血液

16、中是否有某种抗体从而检测是否感染过某种抗原， 单 克隆抗体技术中用于筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞等。2. 简述核酸和蛋白质浓度分析方法。(1)紫外分光光度法紫外分光光度法基于 DNA 链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，DNA/RNA 在260nm 处有最大的吸收峰，蛋白质在 280nm 处有最大的吸收峰，盐和小分子 则集中在 230nm 处。因此，可以用 260nm 波长进行分光测定核酸浓度，OD 直为1 相当于大约 50 卩 g/ml 双链 DNA 单链 DNA 浓度约为 33 / ml, RNA 勺为 40卩g/ml，寡核苷酸约为 35 g/ml。如用 1cm 光径，用 H2O

17、稀释 DNA/RNA 羊品 n 倍并以 H2O 为空白对照，根据此时读出的 OD260 直即可计算出样品稀释前的浓 度：DNA(mg/ml) =50XOD260 读数X稀释倍数 /1000 RNA( mg/ml) =40 xOD260 读 数x稀释倍数/1000。A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评 估：纯DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，纯 RNA 为 2.0。假如比值低，表示受到蛋 白(芳香族)或分类物质的污染，需要纯化样品。比值 =1.5 相当于 50%蛋白质 /DNA 溶液。A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行

18、核酸样品纯度评估：纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为 2.5。若比值小于 2.0 标明样品被碳水化合物 (糖类)、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A320nm 或 A340nm 为检测溶液样品的浊度，该值应该接近 0.0。假如不足，标明 溶液中有悬浮物，需要纯化样品。( 2)定糖定磷法 定糖定磷法是通过测定核酸中戊糖和无机磷含量实现对核酸含量的测定。该法 无需特殊仪器，只需要将地衣酚、二苯胺及钼酸铵等与核酸样品反应，再通过分光光度计测定光吸收值即可定量核酸。但此法准确度差、灵敏度低、干扰物 多、操作繁琐，在现今的研究中已较少采用。比如二苯胺法是利用脱氧核糖核酸中的a脱氧核

19、糖在酸性环境中变成3羟基一丫酮基戊醛与二苯胺试剂一 起加热产生蓝色化合物，在 595nm 处有最大的吸收，在每毫升含 DNA20-400 微 克范围内，光密度与 DNA 的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高 反应的灵敏度。除DNA 外，脱氧木糖、阿拉伯糖也有同样的反应。 少采用。比如二苯胺法是利用脱氧核糖核酸中的a脱氧核糖在酸性环境中变 成3羟基一丫酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm 处有最大的吸收，在每毫升含 DNA20-400 微克范围内，光密度与 DNA 的浓度成正 比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。除DNA 外，脱氧木糖、阿拉伯糖也有同样

20、的反应。1、DNA 标准曲线的制作取 8 支试管，编号，以一定的梯度依次加入不同浓度的 DNA 溶液和二苯胺试剂 试剂。加毕， 摇匀， 于60C恒温水浴中保温1小时，（或于沸水中煮沸15分钟， 冷却测0.D595nm值）。以光密度为纵坐标，DNA 含量（ug/ml ）为横坐标，绘制 标准曲线。2、样品的测定 取 2 支试管，各加 0.2-0.5 毫升的待测液（内含 DNA 应在标准 曲线可测范围之内）加蒸馏水稀释至 2 毫升，再加 4 毫升二苯胺试剂，摇匀， 其操作步骤与标准曲线的制作相同。根据测得的光密度值，从标准曲线上查出 相当该光密度 DNA 勺含量，按下式计算出样品中 DNA 勺百分含

21、量。DNA 含量/毫升待测液二标准曲线查得值X稀释倍数注意事项。1、二茉胺法测定 DNA 含量灵敏度不高，待测样品中 DNA 含量低于 50mg/L 即难 以测定。乙醛可增加二苯胺法测定 DNA 的发色量，又可减少脱氧木糖和阿拉伯 糖的干扰，能显著提高测定的灵敏度。2、样品中含有少量 RNA 并不影响测定，但因蛋白质、多种糖类及其衍生物、芳 香醛、羟基醛等能与二苯胺反应形成有色化合物，故能干扰DNA 定理。（3）酶催化法 基于酶催化的核酸定值方法是一种相对核酸定量法。其原理是染料能 同时与酶和核酸结合，通过检测酶的催化活性即可实现对核酸的定量。此法的 优点在于不需要通过核酸扩增，操作方便，使用

22、的仪器简单。但该法实验中，酶的催化活性受多方面影响，难以达到最佳状态，会使定量结果出现偏差。（ 3）荧光染料法荧光染料法是通过检测荧光试剂与 DNA 结合后的荧光强度变化而实现对核酸的 定量。某些荧光探针试剂本身荧光强度不大， 但与 DNA 结合后荧光强度大大增 强，如：溴化乙锭在水溶液中的荧光量子产率很低，但它与DNA 结合后，产生很强的荧光，激发波长显著红移；又如 Hoechst33258 是一种双苯并咪唑荧光染 料,可高度特异地与双链 DNA 非嵌入性结合，结合后其荧光率由 0.01 增至 0.6。 荧光染料法适用于样品中 DNA 或 RNA 含量较低或含有较多杂质的样品，绝对灵 敏度很

23、高 . 如利用 Hoechst33258 可测定纳克级水平的DNA。 PicoGreen 及SYBR GreenI的检测灵敏度较 EB 和 Hoechst33258 更高，PicoGreen 可检测低 至0.25-0.5ng 的 DNA 羊品。前已有许多商品化核酸定量荧光染料，如Invitrogen 公司用于测定双链 DNA 的PicoGreen、用于测定单链 DNA 的 OliGreen 及用于测定 RNA 含量的 RiboGreen 等。含这些染料的核酸定量试剂盒被认为是目前对微量核酸定量较准确的方 法。 与紫外分光光度法相比，荧光染料法的应用尚不广泛它存在以下缺陷：（ 1）某些荧光染料（

24、如 EB 等）具有极强的毒性和致诱变性； （2）荧光分析对 环境因素极为敏感，易受温度、光度、酸度、溶解氧及污染物等干扰； （3）该 法需制作标准曲线，操作较复杂； （ 4）需专业的定量试剂盒，价格昂贵； （ 5） 精确定量需依赖已知浓度的标准物质，而目前缺乏经过精确定值的标准物质，且少数现今采用标准物质（入 DNA 的定量方法为紫外分光光度法，这就产生潜 在的偏差并使测量结果无法溯源到国际单位制。在水溶液中的荧光量子产率很低，但它与 DNA 结合后，产生很强的荧光，激发 波长显著红移；又如 Hoechst33258 是一种双苯并咪唑荧光染料，可高度特异地 与双链 DNA非嵌入性结合，结合后其

25、荧光率由 0.01 增至 0.6。荧光染料法适用于样品中 DNA 或 RNA 含量较低或含有较多杂质的样品，绝对灵 敏度很高 . 如利用 Hoechst33258 可测定纳克级水平的 DNA。 PicoGreen 及 SYBR GreenI的检测灵敏度较 EB 和 Hoechst33258 更高，PicoGreen 可检测低 至 0.25-0.5ng 的DNA 样品。目前已有许多商品化核酸定量荧光染料，如 Invitrogen 公司用于测定双链 DNA 的PicoGreen、用于测定单链 DNA 勺 OliGreen 及用于测定 RNA 含量的 RiboGreen 等。含这些染料的核酸定量试剂

26、盒被认为是目前对微量核酸定量较准确的方 法。与紫外分光光度法相比，荧光染料法的应用尚不广泛它存在以下缺陷：（ 1）某些荧光染料（如 EB 等）具有极强的毒性和致诱变性；（2）荧光分析对环境因 素极为敏感，易受温度、光度、酸度、溶解氧及污染物等干扰；（ 3）该法需制作标准曲线，操作较复杂； （ 4）需专业的定量试剂盒，价格昂贵； （5）精确定量需依赖已知浓度的标准物质，而目前缺乏经过精确定值的标准物质，且少数 现今采用标准物质（入 DNA 的定量方法为紫外分光光度法，这就产生潜在的偏 差并使测量结果无法溯源到国际单位制。（4）杂交定量法杂交定量法主要包括： Southern 杂交、 Northe

27、rn 杂交、基因芯片、支链信号放大技术及 Rnase 保护技术。Southern 杂交特异性强，但操作复杂，灵敏度低。与 Southern 杂交类似的是用 于检测 RNA 的 Northern 杂交技术，可用于基因表达量的比较研究。生物芯片是 一种高通量的杂交定量技术。 该技术以核酸杂交为基础， 将短的寡核苷酸或 cDNA 序列高密度地固定在固相支持物的表面，然后加入已标记的目的序列进行杂交， 之后检测荧光信号。由于荧光信号的强度与目标分子的数目成比例，从而实现 核酸定量检测。支链信号放大技术采用了一种人工合成的、结构如同树枝的DNA 信号放大探针分支链 DNA 其优点是：（1）只需将释放的核

28、酸变性，样品处理简单；（2） 不经过指数增长的扩增过程，避免了扩增产物污染及PCR 抑制因素的影响；（3）可高通量检测病原体。但该方法成本较高，且当放大倍数低时，敏感性较差，检测范围窄，不适用于 RNA 的低浓度检测。RNase 保护技术由 Zinn 于 1983 年首 次提出，此法的灵敏度高于 Northern 杂交，但成本比较高、放射性同位素有致 癌作用，且所转录成的 RNA 易降解，增加了实验误差。蛋白质浓度分析方法一、蛋白浓度的直接测定（UV 法）这种方法是在 280nm 波长，直接测试蛋白。选择 Warburg 公式，光度计可以直 接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光

29、值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白 质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如 DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。 二紫外吸收法测定蛋白质含量：大多数蛋白质分子结构中含有芳香族氨基酸（酪氨酸和色氨酸）残基，使蛋白质在280nm 的紫外光区产生最大吸收，并且这一波长范围内的吸收值与蛋白质浓度的成正比， 利用这一特性可定量测定蛋 白质的含量。紫外吸收法可测定 0.1-0.5mg/ml 的蛋白质溶液，此操作简便，测定迅速，不消

30、 耗样品，低浓度盐类不干扰测定。 因此， 此法在蛋白质的制备中广泛应用。三 双缩脲法 （ Biuret法）双缩脲（N H3CONHCONH3 两 个分子脲经 180C左右加热，放出一个分子氨 后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuS04 形成紫色络合物，称为双缩脲反应。 凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键， 或能过一个中间碳原子相 连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度 成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测 定范围为 110mg 蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris 缓冲液和某些氨基酸等。四.BCA 方法测定蛋白

31、质含量BCA 佥测法是 Lowry 测定法的一种改进方法。与 Lowry 方法相比，BCA 法的操作 更简单，试剂更加稳定，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度更高（微量检测可 达到 0.5卩g/ml）,应用更加灵活。蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与 Cu2+ 络合生成络合物，同时将 Cu2+ 还原成Cu+。二喹啉甲酸及其钠盐是一种溶于水的化合物，在碱性条件下，可以和 Cu+ 结合生成深紫色的化合物，这种稳定的化合物在562nm 处具有强吸收值，并且化合物颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。故可用比色的方法确定蛋白质的含量。五凯氏定氮法：凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量 , 若蛋白质的含氮量已知 时，

32、则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和 水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消 化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反 应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。消化完成后，在 凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽 蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后 用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准 盐酸的量可计算

33、出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为 16%，即 1 克蛋白质中的氮相当于 6.25 克蛋白质，用凯氏定 氮法测出的含氮量乘以 6.25, 即得样品中蛋白质的含量。3.预对某个基因的表达（RNA 和蛋白质水平）进行 定性和定量分析，试述可采 用的技术路线和主要实验方法。答：通过 mRNAl 达水平的检测： Northern blot 、real time PCR、原位杂交 等。通过蛋白表达水平的检测：（1）定量检测分析： western bloting（2）蛋白质功能分析：免疫荧光技术、酵母双杂交、ChIP、荧光共振能量转移等。可采用的技术路线和主要实验方法有：（1）mRN 表达水平的检测No

34、rthern Blot:基本步骤：蛋白质样品的制备SDS-PAGES行分离蛋白质转膜特异抗体是一种基于 RNA-DNA 杂交原理建立的一种 RNA 分析技术。将 RNA 变性及电泳分 离后，转移到固相支持物上，用杂交反应来鉴定其中特定 mRNA子的含量及其 大小。基本步骤：完整 mRNA 勺分离根据 RNA 的大小通过琼脂糖凝胶电泳对 RNA 进 行分离将 RNA 转移到固相支持物（尼龙膜）上，在转移的过程中，要保持 RNA 在凝胶中的相对分布将 RNA 固定在支持物上（UV 交联）固相 RNA 与探针分 子（DNA或 RNA 杂交除去非特异性结合到固相支持物上的探针分子对特异 性结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析。real time PCR又称实时定量荧光 PCR 是指在 PCF