DNA的粗提取与鉴定实验

1、1会计学DNA的粗提取与鉴定实验的粗提取与鉴定实验请设想：如果你要对请设想：如果你要对DNADNA进行粗提取进行粗提取和鉴定，应该考虑哪些问题？和鉴定，应该考虑哪些问题？1.提取：原理（提取的依据是什么？提取：原理（提取的依据是什么？）-操作（如何设计正确的实验步骤操作（如何设计正确的实验步骤？）？）-提纯（如何提高提纯（如何提高DNA的纯度？的纯度？）2.鉴定：原理（鉴定的依据是什么？）鉴定：原理（鉴定的依据是什么？） -操作（如何设计正确的实验步骤？）操作（如何设计正确的实验步骤？） -现象（通过什么现象能够说明问题？现象（通过什么现象能够说明问题？）一、提取一、提取DNA的方法的方法DN

2、ADNA在在0.14mol/L0.14mol/L的的NaCLNaCL溶液中的溶解度最小；高溶液中的溶解度最小；高于或者低于于或者低于0.14mol/L0.14mol/L时，时，DNADNA的溶解度的溶解度 又逐渐加大又逐渐加大。 DNA DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白能溶于其中，不溶于酒精溶液，某些蛋白能溶于其中，可以将可以将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。 蛋白酶能水解蛋白质，但对蛋白酶能水解蛋白质，但对DNADNA没影响，大多数没影响，大多数蛋白质不能忍受蛋白质不能忍受60-8060-80的高温，而的高温，而DNADNA在在80 80 以以上才变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜

3、，但对上才变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNADNA没有没有影响。影响。小结小结提取提取DNA的方法的方法 利用利用DNADNA不溶于酒精溶液，某些蛋白能溶于其中的不溶于酒精溶液，某些蛋白能溶于其中的原理，可以将原理，可以将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。2.利用利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但对蛋白酶能水解蛋白质，但对DNADNA没影响，大多数蛋白质没影响，大多数蛋白质不能忍受不能忍受60-8060-80的高温，而的高温，而DNADNA在在80 80 以上才变性以上才变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对。洗涤剂能够瓦解细胞

4、膜，但对DNADNA没有影响。没有影响。思路：选材思路：选材-提取提取-提纯提纯-析出析出-鉴定鉴定2.提取提取 破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNA的滤液的滤液思考：为什么在提取洋思考：为什么在提取洋葱的葱的DNA时在切碎的时在切碎的洋葱中要加入一定的洗洋葱中要加入一定的洗涤剂和食盐？涤剂和食盐？洗涤剂是一些离子去污洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有剂，能溶解细胞膜，有利于利于DNA的释放；食盐的释放；食盐的主要成分是的主要成分是NaCl，有，有利于利于DNA的溶解。的溶解。认真研究教材认真研究教材P55去除杂质的三个方案，对去除杂质的三个方案，对比三个方案的设计原理有什么不同？比三

5、个方案的设计原理有什么不同？ 方案一是利用方案一是利用DNA在不同浓度的在不同浓度的NaCl溶液中溶解溶液中溶解度的不同，通过控制度的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质；方溶液的浓度去除杂质；方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。分离。嫩肉粉，又称松肉粉。这是一种能使动物性原料嫩肉粉，又称松肉粉。这是一种能使动物性原料软嫩滑润，同时又不损伤肌纤维弹性的佐助料。软嫩滑润

6、，同时又不损伤肌纤维弹性的佐助料。嫩肉粉呈白色粉末状，为纯天然制品，它的主要嫩肉粉呈白色粉末状，为纯天然制品，它的主要成分是从番木瓜中提取的疏松剂成分是从番木瓜中提取的疏松剂木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶，它能将动物类原料结缔组织、肌纤维中的胶原，它能将动物类原料结缔组织、肌纤维中的胶原蛋白及弹性蛋白适当分解，使部分氨基酸之间的蛋白及弹性蛋白适当分解，使部分氨基酸之间的连接键发生断裂，从而破坏它们的分子结构，大连接键发生断裂，从而破坏它们的分子结构，大大提高原料肉的嫩度，并使其风味得到改善。大提高原料肉的嫩度，并使其风味得到改善。 小资料小资料思考：思考：1.DNA1.DNA鉴定采用了什么实验方法？鉴定

7、采用了什么实验方法？2. 2.鉴定鉴定DNADNA的方法的方法 ，除了用二苯胺试剂外，除了用二苯胺试剂外，还有什么方法？，还有什么方法？2.你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗？提取蛋白质比提取提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为，与的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸有一种统一的方法，

8、只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。索提取的条件，设计特定的方法。提取提取DNA的的第一步是材料的选取第一步是材料的选取，其目的是一，其目的是一定要选取定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；难；第二步是第二步是DNA的释放和溶解的释放和溶解，这一步是实，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；全部溶解；第三步是第三步是DNA的纯化的纯化，即根据，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同特性的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同特性，最大限度地将，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是与杂质分开；最后一步是对对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。测。3.请解释提取DNA的实验操作中主要步骤的目的。认真研究教材认真研究教材P55去除杂质的三个方案，对去除杂质的三个方案，对比三个方案的设计原理有什么不同？比三个方案的设计原理有什么不同？ 方案一是利用方案一是利用DNA在不同浓度的在不同浓度的NaCl溶液中溶解溶液中溶解度的不同，通过控制度的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质；方溶液的浓