刺参大水面养殖系统中菌群、藻相结构的季节变化与益生菌的初步筛选

1、刺参大水面养殖系统中菌群、 藻相结构的季节变化与益生菌的初步筛选进入 21 世纪, 随着人民生活水平的提高和需求量的日益增加 , 刺参的需求量 不断增大 ,刺参养殖业迅猛发展。 利用近海海域养殖刺参逐渐兴起 ,随之出现了刺 参大水面养殖 , 以及刺参与海蜇混养等新的养殖模式。本文主要研究了刺参大水面养殖系统中四季水质指标的变化 , 并采用传统细 菌培养和高通量测序技术分析了养殖环境中微生态结构的四季变化 , 对比分析了 参-蛰混养对池塘水质、 菌群结构以及真核生物的影响。 同时, 对培养分离的细菌 进行拮抗病原菌实验 , 筛选分离具有拮抗病原菌的益生菌株。为刺参大水面健康养殖提供理论基础。 1

2、、刺参大水面养殖池塘水质、菌群结构以及真核生物的变化规律 2014年12月²015年12月对刺参大 水面养殖池塘水质指标、菌群结构以及真核生物进行了研究。结果显示：四季水温变化范围为0.23²7.77 C之间,盐度保持在30左右,p H在7.5左右,叶绿素a的含量在0.4².5卩g/L,COD含量 在 0.58⁰.96 mg/L,NO₂-N 含量在 8.43<s

3、up>1</sup>5.95 卩 g/L,NH₄-N 含量在 17.16³7.19 卩 g/L,NO³-N 含量在 6.89¹54.94 卩 g/L,无机氮含量在 41.58¹91.28 卩 g/L,PO⁴-P 含量在 5.93²5.68 卩 g/L。水体中细

4、菌总数含 量在 8 x 10³³ x 10³cfu/m L 之间,弧菌的数 量在 6.4 x 10²³.4 x 10²cfu/m L,底泥细菌 总数数量在 3.6x104⁸.0x10³cfu/g, 底泥中弧菌数量 在 5.1 x 1

5、0<sup>3</supxsup>1v/sup>.5 x 10³ cfu/g在春季和冬季水体和底泥中弧菌比例相对较高。 通过高通量测序结果显示各 样品在门水平上最大相对丰度排名前十的物种主要有变形菌门( Proteobacteria )、厚壁菌门( Firmicutes )、放线菌( Actinobatceria )、泉 古菌门(Cren archaeota )、拟杆菌门(Bacteroidetes )、蓝菌门(Cyano bacteria )、 疣微菌门( Verrucomicrobia )、酸杆菌门( Acidob

6、acteria )、硝化螺旋菌门 (Nitrospirae )、绿弯菌门( Chloroflexi )等。厚壁菌门( Firmicutes )在各样品种的比例相差较大。 在夏季水体和底泥样 品种含量都很少 , 在冬季水体和底泥中含量较高。拟杆菌门( Bacteroidetes )在水体和底泥中随着春、夏、秋、冬季节的变 化比例在逐渐减小。 通过传统方法对水体中的微型藻类进行调查分析显示水体中 的微型藻主要以硅藻为主 ,春季和秋季微藻的含量较高 , 在不同季节藻类的优势 度有很大差异 , 在春季中肋骨条藻、 派格棍形藻、扭链角毛藻为优势种群 , 夏季菱 形藻、羽纹藻、中肋骨条藻、派格棍形藻占优势

7、地位 , 秋季羽纹藻、派格菱形藻 和舟形藻占优势地位 , 冬季以羽纹硅藻和派格棍形藻占优势地位。通过 18s r DNA 测序分析结果显示真核生物排名前 10 的主要有担子菌门 (Basidiomycota、硅藻门(Diatomea)、有孔虫门(Cercozoa)、囊泡虫总门 ( Alveolata )、绿藻门( Chlorophyta )、纤毛虫门( Ciliophora )、软体动物门 (Mollusca )环节动物门( Annelida )等。通过样品多样性分析显示春季、夏季 和秋季底泥真核生物的多样性大于水体中真核生物多样性 , 冬季水体中真核生物 的多样性大于底泥真核生物多样性。2、

8、参蛰混养对水体水质指标、菌群结构以及真核生物的影响通过测定混养 池塘和非混养池塘八月和十月水质指标。 结果显示 : 混养对水质指标有显著影响 , 混养池塘COD勺含量显著高于非混养池塘，混养对水体氨氮，硝酸氮,无机氮的影 响较小。利用高通量测序显示混养池塘水体和底泥中的菌群多样性显著高于非混养 池塘, 混养池塘水体中真核生物多样性高于非混养池塘 , 结果说明刺参池塘混养 海蜇对水质指标 , 菌群结构和真核生物都有显著影响。 3、刺参大水面养殖池塘潜 在益生菌的初步筛选以刺参“腐皮综合征”主要病原菌灿烂弧菌( Vibrio splendidus )和假交替单胞菌( Pseudoalteromonas nigrifaciens )为指示菌进 行拮抗作用实验 , 利用选择培养基对菌株产淀粉酶和蛋白酶的能力进行测定 , 最 后通过安全性试验得到潜在益生菌株 YQ-2。结果表明:该菌株对灿烂弧菌和假交替单胞菌有较强的抑制作用 , 抑菌圈分 别达到22mnffi 24mm对淀粉和蛋白选择培养基水解圈的直径达到22mnO 36mm安全性试验显示 : 该菌株无论是在 108cfu/m L 浸浴还是投喂 108cfu/g 的粉末饲 料感染 , 一个月时间内供试刺参没有发病和死亡现象 , 健康程度好 , 且相对于对照 组的体重