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文档简介

1、基于蛋白&蛋白、凋亡&蛋白共定位的染色技术 杭州赫贝专注医学实验外包服务 李海重或多重免疫组织化学标记概述双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分（定性、定位、定量）分析不同抗原成分相互间功能的增消关系。分类免疫酶双重标记免疫荧光双重标记 以酶催化不同底物呈现不同颜色不同颜色的荧光色素配伍标记不同抗体，特异性结合相应抗原免疫荧光双重标记染色技术类型直接法：将标记有两种不同荧光素的抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合，滴加在标本上孵育，然后洗去未结合的

2、荧光抗体。间接法：用未标记的两种特异性第一抗体孵育组织或细胞，洗去多余的第一抗体后，再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育组织或细胞。前者特异、快速，后者敏感、多用间接法免疫荧光双重标记染色石蜡切片脱蜡复水柠檬酸钠修复封闭液封闭混合一抗工作液，4过夜混合二抗工作液，371hDAPI染核封片、不同激发波段观察0.3M甘氨酸+1%BSA405nm、488nm和585nm附 图总 结要求结构保存与抗原保护并重抗体间无交叉反应、特异性高操作要点每次实验均需设置阳性对照、阴性对照和荧光标记物对照一抗来源要求不同种属，二抗要求激发波段不同双染前，要对每个抗体进行单标染色，确定合适染色条件各步骤操作前，

3、组织切片不易干掉抗体孵育后，充分洗涤组织切片组织背景较高的，宜进行组织封闭TUNEL&免疫组织化学双重标记染色概述同时检测同一组织切片上的细胞凋亡和相应抗原表达的双重染色技术分类酶法荧光法POD法+HRP法（DAB显色系统+AEC显色系统）不同颜色的荧光色素标记核凋亡和抗体前者适应性广，后者操作简单TUNEL&免疫组化荧光双重染色冰冻切片室温平衡0.5%Triton破膜一抗工作液，4过夜二抗工作液，371hTdT酶工作液，371hDAPI染核封片、不同激发波段观察免疫组化TUNEL附 图总 结要求组织及时冷冻，切片前避免解冻抗体特异性好操作要点同时设置阴性对照及空白对照双染前，进行单标染色，确定合适染色条件抗体和TdT酶孵育后，充分洗涤组织切片免疫组化和TUNE

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