选菊花的组织培养

1、菊花的组织培养菊花的组织培养一、基础知识一、基础知识 指植物的离体部分（包括任何器官、指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或组织、细胞或原生质体原生质体），在人工控制的），在人工控制的培养基及环境条件培养基及环境条件（温度及光照）下，得（温度及光照）下，得以生长和以生长和分化分化成完整植株的一种无菌培养成完整植株的一种无菌培养技术。技术。又称：又称：植物离体培养植物离体培养一、基础知识(3)植物组织培养植物组织培养二、植物组织培养的基本过程 离体器官、 组织或细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根、芽 植物体 由由高度分化高度分化的植物器官、组织或细的植物器官、组织或细胞产生胞产生愈伤组织愈

2、伤组织的过程，又称去分化。的过程，又称去分化。脱分化产生的愈伤组织在培养过程中脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化重新分化根或芽根或芽等器官的过程等器官的过程愈伤组织愈伤组织三、影响植物组织培养的因素：1 1、外植体的选取、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同2、培养基的配制、培养基的配制(MS培养基培养基) 大量元素：大量元素：C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S 微量元素：微量元素：B B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoC

3、o 有机物：有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上未开花植物的茎上部新萌生的侧枝部新萌生的侧枝1.培养基的各种营养物质的作用是什么？培养基的各种营养物质的作用是什么？2.MS培养基的配房与微生物的培养基培养基的配房与微生物的培养基配方相比有哪些明显不同？配方相比有哪些明显不同？（1）微量元素和大量元素提供植物细胞）微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必须的无机盐；生活所必须的无机盐；（2）蔗糖提供碳源、同时维持细胞渗透）蔗糖提供碳源、同时维持细胞渗透压压（3）甘氨

4、酸等主要是为了满足特殊的营）甘氨酸等主要是为了满足特殊的营养需求养需求微生物培养基以有机营养为主，微生物培养基以有机营养为主，MS培养培养基则需要提供大量的无机营养，包括植物基则需要提供大量的无机营养，包括植物生长所必须的大量元素和微量元素生长所必须的大量元素和微量元素。3、不同植物激素使用顺序、不同植物激素使用顺序使用顺序使用顺序 实验结果实验结果 先生长素，先生长素，后细胞分裂素后细胞分裂素 先细胞分裂素，先细胞分裂素，后生长素后生长素 同时使用同时使用 有利于细胞分裂但不分化有利于细胞分裂但不分化细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化分化频率提高分化频率提高4、不同植物激素使用量、不同植物激素

5、使用量生长素生长素/ /细胞分裂素细胞分裂素比值比值结果结果 比值高时比值高时 比值低时比值低时 比值适中比值适中 促根分化，抑芽形成促根分化，抑芽形成 促芽分化，抑根形促芽分化，抑根形成成促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长 5、pH、温度、光照、温度、光照（菊花组培）（菊花组培） pH=5.8 温度控制在温度控制在1822 每日光照每日光照12h6、消毒、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境环境制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作 移移 栽栽1.1.洗衣粉软刷刷洗，流水洗衣粉软刷刷洗，流水冲

6、冲20min20min；2.702.70酒精摇动酒精摇动2-32-3次，持次，持续续6-7s6-7s，无菌水冲洗；，无菌水冲洗；3.0.13.0.1氯化汞氯化汞1-2min1-2min，无，无菌水冲洗至少三次之上菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培配制各种母液配制培养基灭毒养基灭毒制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作 移移 栽栽无菌箱无菌箱温度温度18-22每日光照每日光照12h1.70酒精工作台擦拭一遍酒精工作台擦拭一遍2.点燃酒精灯，每次操作酒点燃酒精灯，每次操作酒精灯旁边进行精灯旁边进行3.每次使用的器械都要灼烧每次使用的器械

7、都要灼烧灭菌灭菌1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？ 培养几天后若有颜色的绒毛菌落，属培养几天后若有颜色的绒毛菌落，属于于_菌落，肯能是植物体材料灭菌落，肯能是植物体材料灭菌不当；若是有光泽的粘液状菌落，属于菌不当；若是有光泽的粘液状菌落，属

8、于_污染，可能是由接种人员造成污染，可能是由接种人员造成的，比如：未戴口罩，接种时说话，手及的，比如：未戴口罩，接种时说话，手及器具消毒不净。器具消毒不净。真菌真菌细菌细菌 发现的被污染的培养基，特别是真菌发现的被污染的培养基，特别是真菌性的污染，一定不能打开培养基，而应用高性的污染，一定不能打开培养基，而应用高压蒸汽锅灭菌。压蒸汽锅灭菌。结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽

9、是否合格（四）生根苗的移栽是否合格菊花的组织培养再再分化分化材料性质、营养物质、材料性质、营养物质、调节物质、环境条件调节物质、环境条件外植体的消毒外植体的消毒接种接种基本原理基本原理: :细胞的全能性细胞的全能性基本基本过程过程: :脱脱分化分化愈伤愈伤组织组织影响因素：影响因素：操作流程：操作流程：配制配制MSMS固体固体培养基培养基培养培养移栽移栽栽培栽培练习答案练习答案1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的

10、无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。 为了探究为了探究6-BA6-BA和和IAAIAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在培养基中加入响，某研究小组在培养基中加入6-BA6-BA和和IAAIAA，配制成四种培，配制成四种培养基（见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、养基（见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率（生丛芽外植体

11、的比率（m m），以及再生丛芽外植体上的丛芽平均），以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数（数（n n），结果如下表。），结果如下表。）按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为 和 两类。上述培养基中，6-BA属于 类生长调节剂。）在该实验中，自变量是 ，因变量是 ， 自变量的取值范围是 。）从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是号培养基。）为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入 （填“6-BA”或“IAA”）。大量元素大量元素微量元素微量元素细胞分裂素细胞分裂素IAA浓度从芽外植体的比率及从芽平均数00.5mg/L16-BA辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素

12、的获得途径如图。（1）图中和分别表示辣椒组织培养中细胞的_和_过程。（2）图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是_。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值_（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采用的灭菌方法是_。（3）图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是_。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是_和纤维素酶。（4）提取辣椒素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是_。低再分化琼脂脱分化高压蒸汽灭菌70%果胶酶防止有机溶剂挥发练习练习1 1、下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：、下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：（1 1）表示表示_，它能被培养成为

13、，它能被培养成为的根本原的根本原因是因是_。（2 2）表示表示_，它与，它与相比分化程度相比分化程度_，全能性全能性_._.（3 3）若想制成人工种子，应选用）若想制成人工种子，应选用_。（4 4）若）若是花药，则是花药，则是是_，继续对其使用，继续对其使用_处理可获得处理可获得_正常植株，该过程称为正常植株，该过程称为_。（5 5）若）若是胡萝卜根尖细胞，则培养成是胡萝卜根尖细胞，则培养成的叶片的颜色为的叶片的颜色为_，这说明，这说明_。（6 6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物紫草素，紫草素，培养将进行到培养将进行到_。脱分化再 分化答案：（答

14、案：（1 1）离体的植物组织或器官）离体的植物组织或器官 植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性 （2 2）愈伤组织愈伤组织 低低 高高 （3 3） （4 4）单倍体植株）单倍体植株 秋水仙素秋水仙素 纯合纯合体体 单倍体育种单倍体育种 （5 5）绿色）绿色 含有表达叶绿体的基因含有表达叶绿体的基因 （6 6）练习练习2 2、 基因型为基因型为AaBbAaBb的水稻（含的水稻（含2424条染色体）的花药通过无菌条染色体）的花药通过无菌操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗，问：操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗，问：（1 1）愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，）愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，愈伤组织形成过程中，必须从培养基中获得愈伤组织形成过程中，必须从培养基中获得_等营养等营养物质。物质。（2 2）要促进花粉细胞分裂生长，培养基中应有）要促进花粉细胞分裂生长，培养基中应有_和和_两类激素。两类激素。（3 3）愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根，再由芽发育成叶）愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根，再由芽发育成叶和茎。这一过程必须给予光照，其原因是和茎。这一过程必须给予光照，其原因是_能利用光能利用光能制