荧光分析测定维生素c

1、 荧光分析法荧光分析法测定维生素测定维生素 C 维生素维生素 C及维生素及维生素C 的测定原理的测定原理荧光分析法测定维生素荧光分析法测定维生素 C实验实验荧光分析法测定维生素荧光分析法测定维生素 C 应用应用讲解人：贺政轩一、一、维生素维生素 C及及维生素的测定维生素的测定原理原理1.1维生素维生素C 维生素 C 又名抗坏血酸, 是维持机体正常生理 功能的重要维生素之一,而人体不能自身合成 ，只能 从食物和药物中摄取，因此 ，食品、药物中维生素 C 的分析具有重要意义。1.2维生素维生素C测定方法测定方法 维生素 C 的测定常用的方法有光度法 、 电化学法、滴定法、酶法、色谱法等。 本实验提

2、出了一种新的测定维生素 C 的荧光 分析方法：维生素 C 被 Cu2 +氧化为脱氢 抗坏血酸，再与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用，通过对体系荧光强度的测定进行维生素 C 的定量分析。二、荧光分析法二、荧光分析法测定维生素测定维生素 C实验实验 1实验实验1. 1 主要仪器与试剂主要仪器与试剂 分子发光仪 :LS - 55 型 酸度计 :pH - 211型 榨汁机 :CW - JE04型 电热恒温水浴锅 :HH. SY11 - N i1型 CuSO4溶液 :2. 0 10- 3 g m/ L 十六烷基三甲基溴化铵 (CTMAB )溶液 :6. 0 10- 4 g /mL 苯甲酸

3、溶液：1. 0 10- 4 g m/ L 维生素 C 标准储备液 :5. 0 10- 4 g /mL, 2 8 （避光保存）； 维生素 C 标准溶液 :1. 0 10- 5 g /mL, 2 8 （避光保存）； NaOH -邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液:pH =6. 0； 1. 2 实验实验步骤步骤 （1）配置待测样品及空白对照 在 25 mL 比色管中依次加入 0. 6 m L CuSO4 溶液，2. 0 m L十六烷基三甲基溴化铵溶液，2. 0 m L 苯 甲酸溶液 ，一定体积的维生素 C 标准溶液 ，5. 0 mL NaOH -邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液, 用蒸馏水定容，摇匀；以不含维生素 C 溶

4、液为 空白对照。（2）水浴加热 在 35恒温水浴中加热 30 m in， 将溶液流水 冷却至室温 。（3）荧光分析 将待测样品放置于样品架上，设定激发波长为 308 nm ，发射波长为 408 nm ，测量荧光强度 F ，以不含维生素 C 的试剂空白为 F0 ，计算 F测 =F - F0 。2 结果与讨论结果与讨论 2. 1 激发光谱和发射光谱激发光谱和发射光谱 取 3. 0 mL 维生素 C 标准溶液, 按实验方法进 行操作,分别在 290 330 nm、360 460 nm 内扫描 得到激发光谱和发射光谱如图 1、图 2所示。从图 1、图 2中可看出 ,当激发波长为 308 nm , 发射

5、波长 为 408 nm 时体系的荧光强度最大,试剂空白的荧光 值比较低且稳定, 故本实验选择激发波长为 308 nm ,发射波长为 408 nm 。 1 C u2 + +BA +缓冲溶液 +CTMAB; 2 Cu2 +BA +维生素 C +缓冲溶液 +CTMAB1 C u2 + +BA +缓冲溶液 +CTMAB; 2 Cu2 +BA +维生素 C +缓冲溶液 +CTMAB激发光谱发射光谱2. 2 试剂加入顺序试剂加入顺序 按照实验方法操作, 在各试剂加入量相同的情况下, 试验了试剂的不同加入顺序对荧光强度的影 响。试验结果表明, 当所加试剂顺序依次为 CuSO4 溶液、苯甲酸溶液、维生素 C

6、标准溶液、NaOH -邻 苯二甲酸氢钾缓冲溶液时 ,体系的荧光强度最大，因此选用此加入顺序为最佳试剂加入顺序。2. 3 缓冲溶液缓冲溶液 溶液的pH值对体系荧光强度有较大的影响，试验了不同的pH值对荧光强度的影响。由pH值 荧光强度的曲线可知 , 当 pH 值为 5. 9 6. 2 时 ,荧光强度达到最大值且比较稳定 ,因此确定最佳 pH 值为 6. 0。缓冲溶液的种类对体系的荧光强度也有一定的影响。试验了以下几种 pH 值为 6. 0 的缓冲溶液 :NaOH - KH 2 PO4 、KH2 PO4 - 硼砂、KH2 PO4 - Na2 H PO4 、NaOH - 邻苯二甲酸氢钾、Na2 H

7、PO4 - 柠檬 酸、NaOH -柠檬酸钠、HA c - NaA c等。试验结果表明 ,当所加的缓冲溶液为NaOH -邻苯二甲酸氢钾时,荧光强度最大且稳定。因此本实验选择NaOH - 邻苯二甲酸氢钾为缓冲溶液 ,其最佳用量为 5. 0 m L。2. 4 加热温度和加热时间加热温度和加热时间 试验了不同温度对体系荧光强度的影响。结果表明, 当加热温度为 35时，既有利于提高体系反应速度，又不使反应物与产物结构受到破坏。改变 加热时间进行试验, 结果发现，在 35水浴中加热30 m in，体系荧光强度达到最大值且相对稳定。 2. 5 硫酸铜和苯甲酸的用量硫酸铜和苯甲酸的用量其它条件不变，试验了硫酸

8、铜和苯甲酸的用量对体系荧光强度的影响。结果表明，当硫酸铜的用量为 0. 6 m L、苯甲酸的用量为 2. 0 mL 时，体系荧光强度最大。2. 6 表面活性剂表面活性剂 分别试验了十六烷基三甲基溴化铵 (CTMAB)、 十二烷基磺酸钠及 -环糊精对体系荧光强度的影响。结果表明 ,表面活性剂对体系的荧光强度有一定的增敏效果，其中 CTMAB 对体系的增敏效果最 好。进一步试验了 CTMAB 的用量对体系的荧光强度的影响, 当 CTMAB 的用量为 2. 0 m L 时, 体系荧光强度最大。 三、荧光分析法三、荧光分析法测定维生素测定维生素 C 应用应用 样品测定样品测定 取一片维生素C药片，研细

9、，混匀，准确称取 0. 152 0 g 溶于二次蒸馏水中 ，转移至 500 mL 容量 瓶中定容，配成水溶液。再准确移取10 m L此溶液，将其稀释成 100 m L的溶液，作为样品稀释液。 对样品稀释液进行测定并做加标回收试验。 同时利用本法对西红柿和果珍进行测定。准确称取一定量的果珍，将其配成100 mL的溶液。将清洗干净的西红柿榨汁，称取一定量的西红柿汁， 将其配成100 m L的溶液。 其它步骤和维生素 C 药片的测定方法 相同。 样品测定结果列于表 3表 3 样品测定结果(n =3)。由表3可知，用荧光分析法测定维生素C药片、西红柿和果珍中维生素C的含量，回收率为96. 7% 100. 5%准确度较高。表 3 样品测定结果(n =3) 荧光分析法测定维生素 C 具有操作简单 ,精密 度高 ,检出限低等优点, 该法可以应用于水果、蔬菜 和药物中维生素 C 的检测, 适于推广。谢谢观赏！ 利用某些物质受光照射时所发生的荧光特性和强度，进行物质的定性分析或定量分析的方法，称为荧光光谱分析。 使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所发生的荧光通过发射单色器照射于检测器上，调节发射单色器至各种不同波长处,由检测器测出相应的荧光强度，然后以荧光