微生物实验分享资料

1、.1一、玻璃器皿的清洗和灭菌一、玻璃器皿的清洗和灭菌( (一一) )、新购的玻璃器皿、新购的玻璃器皿1 1、先用热肥皂水刷洗，流水冲净。、先用热肥皂水刷洗，流水冲净。2 2、再浸泡于的盐酸中数小时，最后用流水、再浸泡于的盐酸中数小时，最后用流水冲净。冲净。.2二、玻璃仪器的干热灭菌二、玻璃仪器的干热灭菌(1)(1)将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用报纸将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用报纸 包好，或装入特制的铁筒中。包好，或装入特制的铁筒中。(2)(2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留 有一定的空隙以便流通空气。有一定的空隙以便流通空

2、气。(3)(3)关紧箱门，打开排气孔接上电源。关紧箱门，打开排气孔接上电源。(4)(4)待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔， 继续加热至一定温度后，调节温度控制旋钮固定继续加热至一定温度后，调节温度控制旋钮固定 温度，在温度，在160160165165保持保持2 2小时即可。小时即可。(5)(5)待自然降温冷却后待自然降温冷却后(60(60以下以下) )才能开门取出玻璃才能开门取出玻璃 器皿。器皿。 .3三、注意事项三、注意事项 干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥挤，以免阻碍空气流通而影响灭菌效果；灭挤，以免阻碍

3、空气流通而影响灭菌效果；灭菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触。以免菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触。以免包装纸烤焦起火。包装纸烤焦起火。.4一一. . 实验目的实验目的 明确培养基的配制原则；明确培养基的配制原则； 掌握配制培养基的一般方法和步骤；掌握配制培养基的一般方法和步骤； 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围； 掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。.5二二. . 实验材料实验材料l其它：天平、牛角匙、电炉

4、、其它：天平、牛角匙、电炉、1N NaOH1N NaOH、pHpH试纸、试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、 带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、 无棉塞的空试管、培养皿、吸管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等.6（一）培养基的制备（一）培养基的制备（1 1）培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合）培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合 成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材成代谢产物所需要的营养物质的混合

5、物。培养基的原材 料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微 生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和 配制方法。配制方法。（2 2）制备流程：）制备流程： 称量称量溶解溶解蒸煮蒸煮调调pHpH分装分装包扎包扎灭菌灭菌三三. . 实验原理实验原理.7 (3) (3)操作步骤：操作步骤： 1 1）称药品）称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，

6、用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。故称量时要迅速。 2 2）加热溶解）加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中需不断搅拌，以

7、防琼脂糊底或溢出，最加热融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。后补足所失的水分。 .83 3）调）调pH pH 检测培养基的检测培养基的pHpH，若，若pHpH偏酸，可滴加偏酸，可滴加1 1滴滴1mol1molL L- -1 1NaOHNaOH，边加边搅拌，并随时用，边加边搅拌，并随时用pHpH试纸检测，直至达到所需试纸检测，直至达到所需pHpH范围。若偏碱，则用范围。若偏碱，则用1mol1molL L-1-1HClHCl进行调节。进行调节。pHpH的调节通常放的调节通常放在加琼脂之前。应注意在加琼脂之前。应注意pHpH值不要调过头，以免回调而影响培值不要调过头，以

8、免回调而影响培养基内各离子的浓度。养基内各离子的浓度。4 4）过滤）过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4 4层纱布层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。步可省略。.9固体分装固体分装5 5）分装）分装 披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的分装量：固体培养基约为试管

9、高度的1 15 5，灭菌后制成斜，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的养基以试管高度的1/31/3为宜。灭菌后垂直待凝。为宜。灭菌后垂直待凝。 半固体半固体 液体分装液体分装试管试管 三角烧瓶三角烧瓶试管试管 三角烧瓶三角烧瓶 1/3 1/31/41/4 1/21/21/51/51/21/2.106 6）加棉塞）加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花试管口和三角瓶口塞上用普通棉花( (非脱脂棉非脱脂棉) )制作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧制作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，

10、四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约作用。要使棉塞总长约3 35 5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用8 8层纱布制层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。7 7）包扎）包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。灭菌时冷凝水沾湿棉塞。8 8）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规

11、定进）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经灭菌后，必须放灭菌后，必须放3737温室培养温室培养24h24h，无菌生长者方可使用。，无菌生长者方可使用。 .11 培养基分装培养基分装斜面制作斜面制作包扎成捆挂标签包扎成捆挂标签.12（4 4）关键步骤及注意事项）关键步骤及注意事项要严格按配方配制。要严格按配方配制。调调pHpH不要过头。不要过头。干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，7070C C以下放物、取物。以下放物

12、、取物。高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。降压回零取物。.13（二）灭菌（二）灭菌灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。（1 1）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温 至至160160C C，恒温，恒温1 1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用 具等的灭菌。具等的灭菌。（2 2）高压蒸汽灭菌法（一般）高压蒸汽灭菌法（一般121121C C，30min30min，适用培养

13、基）：，适用培养基）： 把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进 行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上 升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055 1.055 公斤公斤/ /厘厘 米米2 2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121121C C。在这种。在这种 情况下，微生物（包括芽孢）在情况下，微生物（包括芽孢）在151520 20 分钟便会被杀分钟便会被杀 死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等死，而达

14、到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等 面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时 间。间。.14高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法1 1加水加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的 水，以水面与三角架相平为至。水，以水面与三角架相平为至。2 2装料装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培 养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶 壁，以防冷凝水沾湿棉塞。壁，以防冷凝水沾湿棉塞。3 3加盖加盖 将盖

15、上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌 桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧 相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；4 4排气排气 加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔 排出。一般认为，当水沸后约排出。一般认为，当水沸后约5min5min，表明锅内空气已排，表明锅内空气已排 净。净。5 5升压升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始 上升。

16、上升。.156 6保压保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。 开始计时并维持压力至所需时间。本实验用开始计时并维持压力至所需时间。本实验用121121， 20min20min灭菌。灭菌。7 7降压降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下 降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅 盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。8 8无菌检查无菌检查 将已灭菌培养基于将已灭菌培养基于3737培养培养24h24h，无杂菌生，无

17、杂菌生 长，即可待用。长，即可待用。注意事项：注意事项：使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降到零后，才可打开锅盖。到零后，才可打开锅盖。.16（3 3）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天 蒸煮蒸煮1 1次，每次煮沸次，每次煮沸1h1h，连续，连续3d 3d 重复进行。在每两次蒸重复进行。在每两次蒸 煮之间，将物品（指培养基）放在煮之间，将物品（指培养基）放在3737C C恒温条件下培养恒温

18、条件下培养 过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成 营养体，以便下次蒸煮时杀灭。营养体，以便下次蒸煮时杀灭。（4 4）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质 量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来 杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风 味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在 6262，3030分钟既可达到消毒目的。此

19、法为法国微生物学分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学 家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。.17（三）棉塞的制作（三）棉塞的制作.18.19 微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。的基本操作技能。 无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接种无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。长良好的纯种微生物为目的。 由于接种方法不同，采用的接种工具也有区由于接种方法不同，采用的接种工具也有区别，如固体斜面

20、培养体转接时用接种环；穿刺接种别，如固体斜面培养体转接时用接种环；穿刺接种时用接种针，液体转接用移液管等。时用接种针，液体转接用移液管等。实验三实验三 微生物的接种技术微生物的接种技术 .20一、实验目的：一、实验目的： 了解各种微生物接种方法。了解各种微生物接种方法。二、实验材料和用具：二、实验材料和用具： 已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、 移液管、记号笔移液管、记号笔 .21三、实验步骤：三、实验步骤：1 1、斜面接种技术、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上

21、的一种接种方法菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：。具体操作如下：(1)(1)贴标签贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2 23cm3cm的位置。的位置。( (若用记号笔标记则不需标签若用记号笔标记则不需标签) )。(2)(2)点燃酒精灯。点燃酒精灯。.22(3)(3)接种接种 用接种环将少许菌种移接到贴好标签的用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。1)1)手持试管手持试管 将菌种和待

22、接斜面的两支试管用大姆将菌种和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中。使中指位于两试管之指和其他四指握在左手中。使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。置。2)2)旋松管塞旋松管塞 先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。接种时拔出。3)3)取接种环取接种环 右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌然后将有可能伸入试管中的其余部分均灼灭菌然后将有可能伸入试管中的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。 .234)4)拔管塞

23、拔管塞 用右手的无名指、小指和手掌边先后取用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌过火灭菌( (切勿烧得过烫切勿烧得过烫) )。 试管拔塞后过火灭菌和取菌试管拔塞后过火灭菌和取菌 .245)5)塞管塞塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。移动时纳入不洁空气。6)6)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。紧。 .252 2

24、、液体接种技术、液体接种技术(1)(1)用斜面菌种接种液体培养基时，有下面两种情况：用斜面菌种接种液体培养基时，有下面两种情况：如接种量小，可用接种环取少量菌体移入培养基容如接种量小，可用接种环取少量菌体移入培养基容器器( (试管或三角瓶等试管或三角瓶等) )中，将接种环在液体表面振荡中，将接种环在液体表面振荡或在器壁上轻轻摩擦把菌苔散开，抽出接种环，塞或在器壁上轻轻摩擦把菌苔散开，抽出接种环，塞好棉塞，再将液体摇动，菌体即均匀分布在液体中。好棉塞，再将液体摇动，菌体即均匀分布在液体中。如接种量大，可先在斜面菌种管中注入定量无菌如接种量大，可先在斜面菌种管中注入定量无菌水接种环把菌苔刮下研开，

25、再把菌悬液倒入液体水接种环把菌苔刮下研开，再把菌悬液倒入液体培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。(2)(2)用液体培养物接种液体培养基时，可用无菌的吸管用液体培养物接种液体培养基时，可用无菌的吸管或移液管吸取菌液接种。或移液管吸取菌液接种。 .263 3、固体接种技术、固体接种技术 固体接种最普遍的形式是接种固体菌制剂。因所固体接种最普遍的形式是接种固体菌制剂。因所用用菌种或种子菌来源不同分为：菌种或种子菌来源不同分为：1)1)用菌液接种固体料用菌液接种固体料 可用菌苔刮洗制成的悬液。接可用菌苔刮洗制成的悬液。接种时可按无菌操作法将菌液直接例入固体培养基

26、中，种时可按无菌操作法将菌液直接例入固体培养基中，搅拌均匀。注意接种所用菌液量要计算在固体料总加搅拌均匀。注意接种所用菌液量要计算在固体料总加水量之内，否则往往在用液体种子菌接种后含水量加水量之内，否则往往在用液体种子菌接种后含水量加大，影响培养效果。大，影响培养效果。2)2)用固体种子接种固体料用固体种子接种固体料 包括用孢子粉、菌丝孢子包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌，直接把接种材混合种子菌或其他固体培养的种子菌，直接把接种材料混入灭菌的固体料。接种后必须充分搅拌使之混料混入灭菌的固体料。接种后必须充分搅拌使之混合均匀。合均匀。 .274 4、穿刺接种技术、穿刺接种技

27、术 穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。 .28具体操作如下。具体操作如下。(1)(1)贴标签。贴标签。(2)(2)点燃酒精灯。点燃酒精灯。(3)(3)穿刺接种。穿刺接种。 (4)(4)将接种过的试管直立于试管架

28、上，放在将接种过的试管直立于试管架上，放在3737或或2828恒温箱中培养。恒温箱中培养。24h24h后观察结果后观察结果( (注意：若具注意：若具有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而弥散，故形成的穿刺线较粗而散、反之则细而密弥散，故形成的穿刺线较粗而散、反之则细而密) )。 .29(3)(3)穿刺接种方法如下：穿刺接种方法如下：1)1)手持试管。手持试管。2)2)旋松棉塞。旋松棉塞。3)3)右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌，接着把在右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌，接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌。穿刺中可能伸入试管的其他部位

29、也灼烧灭菌。4)4)用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养基部分冷却。再用接种针的针尖沾取少量菌种。基部分冷却。再用接种针的针尖沾取少量菌种。5)5)接种有两种手持操作法。一种是水平法，它类似于接种有两种手持操作法。一种是水平法，它类似于斜面接种法。一种则称垂直法。尽管穿刺时手持方斜面接种法。一种则称垂直法。尽管穿刺时手持方法不同，但穿刺时所用接种针都必须挺直，将接种法不同，但穿刺时所用接种针都必须挺直，将接种针自培养基中心垂直地刺入培养基中。穿刺时要做针自培养基中心垂直地刺入培养基中。穿刺时要做到手稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接到手

30、稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接近试管的底部，然后沿着接种线将针拔出。最后，近试管的底部，然后沿着接种线将针拔出。最后，塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。.30斜面划线法（斜面划线法（a a）不同细菌直线接种长出的菌苔形态（不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b b）.31 穿刺接种穿刺接种（a a）水平穿刺接种；（）水平穿刺接种；（b b）垂直穿刺接种）垂直穿刺接种 .32四、实验报告四、实验报告列表比较各种接种方法及注意事项。列表比较各种接种方法及注意事项。五、问题和讨论五、问题和讨论1 1、斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在

31、、斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在无菌培养基上沾一下？无菌培养基上沾一下？2 2、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？ .33（1 1）学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。）学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。（2 2）学习并掌握显微镜的维护的基本知识。）学习并掌握显微镜的维护的基本知识。一一. . 实验目的实验目的.34二、显微镜的构造二、显微镜的构造1.1.光学部分光学部分: : 接目镜、接物镜、照明装置接目镜、接物镜、照明装置( (聚光镜、虹彩光圈、聚光镜、虹彩光圈、反光镜等反光镜等) )。它使检视物放大。它使检视物放大, ,造成物象

32、。造成物象。2.2.机械部分机械部分: : 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持调节固定等作用。调节固定等作用。.35.36镜头的识别镜头的识别 低倍、高倍和油镜接物镜的识别方法，可直接低倍、高倍和油镜接物镜的识别方法，可直接读它上面刻的倍数，简便方法是低倍镜较短，高倍读它上面刻的倍数，简便方法是低倍镜较短，高倍镜较长，油镜更长且上面刻有黑圈。使用时一定要镜较长，油镜更长且上面刻有黑圈。使用时一定要识别清楚，不可认错，否则在转换物镜时会碰压镜识别清楚，不可

33、认错，否则在转换物镜时会碰压镜头，损坏物镜的危险。放大倍数越高的接物镜它的头，损坏物镜的危险。放大倍数越高的接物镜它的焦距越小，工作距离也越小，因此油镜观察时镜头焦距越小，工作距离也越小，因此油镜观察时镜头和玻片极为接近，使用时应该注意。和玻片极为接近，使用时应该注意。.37.38显微镜的使用显微镜的使用1.1.用前检查：用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.2.调节光亮度调节光亮度 3.3.低倍镜观察：低倍镜观察：粗调、细调。粗调、细调。 4.4.依次再进行中倍、高倍观察依次再进行中倍、高倍观察 5.5.油镜观察：油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光

34、镜，在标高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标 本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油 中，细调至看清物象为止。中，细调至看清物象为止。6.6.换片：换片：另换新片，必须从第三条开始操作。另换新片，必须从第三条开始操作。7.7.用后复原：用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的 油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的 油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体 全部复原全部复原。.391.1.用低倍镜观察酵母

35、菌用低倍镜观察酵母菌 (1)(1)调节光源调节光源: : 将低倍物镜转到工作位置。上升聚光器，可变光阑完全将低倍物镜转到工作位置。上升聚光器，可变光阑完全打开，然后转动反光镜采集光源，一般以采集北窗射入的自打开，然后转动反光镜采集光源，一般以采集北窗射入的自然光为宜，不宜采用直射日光。如遇阴天或晚上可用普通日然光为宜，不宜采用直射日光。如遇阴天或晚上可用普通日光台灯照明。光台灯照明。 当用显微镜灯当用显微镜灯( (钨丝灯泡钨丝灯泡) )照明时，因其亮度较强，而且照明时，因其亮度较强，而且发射光谱中有较多刺激眼睛的红光，故应根据标本染色情况发射光谱中有较多刺激眼睛的红光，故应根据标本染色情况选用

36、绿色、黄绿或蓝绿色滤光器或一面磨砂的有色滤光片，选用绿色、黄绿或蓝绿色滤光器或一面磨砂的有色滤光片，以减弱光的强度，同时又可吸收掉红光，使视野光线柔和，以减弱光的强度，同时又可吸收掉红光，使视野光线柔和，并可护眼睛。并可护眼睛。 旋转反光镜，使光线投射到反光镜中央，并调节聚光器旋转反光镜，使光线投射到反光镜中央，并调节聚光器或调节光圈大小，使视野得到均匀的照明。或调节光圈大小，使视野得到均匀的照明。三三. . 实验步骤实验步骤.40（2)2)调节聚光镜和物镜数值孔径相一致，取下目镜直接向调节聚光镜和物镜数值孔径相一致，取下目镜直接向镜筒内观察，先将可交光阑缩到最小，再轻轻地打开，便镜筒内观察，

37、先将可交光阑缩到最小，再轻轻地打开，便聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜。这聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜。这一操作的目的是使入射光所展开的角度与镜口角的角度相一操作的目的是使入射光所展开的角度与镜口角的角度相符合，否则因光圈开得太大而超过物镜的数值孔径时，会符合，否则因光圈开得太大而超过物镜的数值孔径时，会产生光斑，如光圈收得太小则降低分辨力，从面影响了物产生光斑，如光圈收得太小则降低分辨力，从面影响了物像的清晰度。因为各物镜的数值孔径不同，所以每转换一像的清晰度。因为各物镜的数值孔径不同，所以每转换一次物镜都要进行调节。次物镜都要进行调节。 在实际操作中观察者住

38、往只根据视野的亮度和标本明在实际操作中观察者住往只根据视野的亮度和标本明暗对比度来侧节光圈大小，而不考虑聚光器与物镜数值孔暗对比度来侧节光圈大小，而不考虑聚光器与物镜数值孔径的配合。只要能达到较好的效果，这种调节法也是可取径的配合。只要能达到较好的效果，这种调节法也是可取的。但是，对于使用显微镜的工作者来讲，必须了解这一的。但是，对于使用显微镜的工作者来讲，必须了解这一操作的目的和原理，这样在操作时就能运用自如。操作的目的和原理，这样在操作时就能运用自如。 .41(3)(3)放置标本放置标本 上升镜筒，将酵母水封片放在镜台上，用玻上升镜筒，将酵母水封片放在镜台上，用玻片夹夹住，然后降下低倍物镜

39、，使其下端接近于玻片。片夹夹住，然后降下低倍物镜，使其下端接近于玻片。(4)(4)调焦调焦 转动粗螺旋，使镜筒逐渐上升到看见模糊物像时，转动粗螺旋，使镜筒逐渐上升到看见模糊物像时，再转动细螺旋，调节到物像清晰时为止。再转动细螺旋，调节到物像清晰时为止。(5)(5)观察观察 观察并绘制酵母菌形态。如要精细观察可转换高倍观察并绘制酵母菌形态。如要精细观察可转换高倍镜。镜。 .422.2.高倍镜观察高倍镜观察（1 1）将在低倍镜下找到的合适部位移至视好当中。）将在低倍镜下找到的合适部位移至视好当中。（2 2）转换高倍镜）转换高倍镜 用手按住转换器慢慢地旋转，当听用手按住转换器慢慢地旋转，当听“咔嗦咔

40、嗦” 一声即表物镜已转到正确的工作位置上。一声即表物镜已转到正确的工作位置上。（3 3）调焦）调焦 使用齐焦物镜时，只要从低倍镜转到高倍镜再稍使用齐焦物镜时，只要从低倍镜转到高倍镜再稍 调一下细螺旋即可看清物像。如用不齐焦的物镜时，每转换调一下细螺旋即可看清物像。如用不齐焦的物镜时，每转换 一次物镜都要进行调焦，即先使物镜降至非常靠近玻片的位一次物镜都要进行调焦，即先使物镜降至非常靠近玻片的位 置然后再慢慢上升镜筒，并细心调节粗、细螺旋，直至物象置然后再慢慢上升镜筒，并细心调节粗、细螺旋，直至物象 清晰为止。清晰为止。（4 4）观察）观察: :仔细地观察酵母菌的结构。仔细地观察酵母菌的结构。.

41、433.3.用油镜观察细菌用油镜观察细菌 (1)(1)放置标本放置标本 将染色的细菌涂片置于镜台上。将染色的细菌涂片置于镜台上。 (2)(2)找合适的视野找合适的视野 先用低倍镜寻找合适的视野，并将欲观先用低倍镜寻找合适的视野，并将欲观察的部位移到视野中央。察的部位移到视野中央。 (3)(3)转换油镜，将油镜转到工作位置。转换油镜，将油镜转到工作位置。 (4)(4)调节聚光器与油镜数值孔径相一致调节聚光器与油镜数值孔径相一致: :只要将聚光器上升只要将聚光器上升到最高位置，可变光阑开到最大，此时两者的数值孔径即达到到最高位置，可变光阑开到最大，此时两者的数值孔径即达到一致。一致。 .44 (5

42、) (5)加香柏油加香柏油 从双层瓶的内层小管中取香柏油从双层瓶的内层小管中取香柏油1 12 2滴加到滴加到欲观察部位的徐片上欲观察部位的徐片上( (切勿加多切勿加多) )，然后将油镜转到工作位置，然后将油镜转到工作位置，下降镜筒，使油镜浸入香柏油中，并从侧面观察，使镜头降至下降镜筒，使油镜浸入香柏油中，并从侧面观察，使镜头降至既非常接近玻片，又不能与玻片相撞的合适位置。既非常接近玻片，又不能与玻片相撞的合适位置。 (6)(6)调焦调焦 左眼从目镜中观察，同时转动粗螺旋左眼从目镜中观察，同时转动粗螺旋( (切忌反方切忌反方向旋转向旋转) )，缓慢地提升油镜至出现模糊的物像时再用细螺旋调节，缓慢

43、地提升油镜至出现模糊的物像时再用细螺旋调节至物像清晰为止。如按上述操作还找不到目的物，一种可能是至物像清晰为止。如按上述操作还找不到目的物，一种可能是油镜头下降还未到位，另一种可能是油镜上升太快，以至眼睛油镜头下降还未到位，另一种可能是油镜上升太快，以至眼睛捕捉不到一闪而过的物像。遇此情况，应重新操作。捕捉不到一闪而过的物像。遇此情况，应重新操作。 (7)(7)观察观察 仔细观察细菌形态。仔细观察细菌形态。.454.4.显微镜用毕后的处理显微镜用毕后的处理（1 1）上升镜筒取下玻片。）上升镜筒取下玻片。（2 2）清洁显微镜）清洁显微镜清洁油镜：先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用沾少许二甲清洁油

44、镜：先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用沾少许二甲 苯的擦镜纸擦掉残留的香柏油，后再用干净的擦镜苯的擦镜纸擦掉残留的香柏油，后再用干净的擦镜 纸抹去残留的二甲苯。纸抹去残留的二甲苯。清洁目镜和其他物镜：用擦镜纸擦净其他的物镜和目镜。清洁目镜和其他物镜：用擦镜纸擦净其他的物镜和目镜。用柔软的绸布擦净机械部分的灰尘。用柔软的绸布擦净机械部分的灰尘。（3 3）清洁后应将物镜转成）清洁后应将物镜转成“八八”字式，缓慢下降镜筒，使物字式，缓慢下降镜筒，使物镜镜搁在镜台上。将聚光器降到最低位置，反光镜转成垂直状。搁在镜台上。将聚光器降到最低位置，反光镜转成垂直状。（4 4）去除细菌涂片上的香柏油）去除细菌涂

45、片上的香柏油 加加2 23 3滴二甲苯于涂片上，滴二甲苯于涂片上，使香柏油溶解，再用毛边纸轻轻压在涂片上，吸掉二甲苯和香使香柏油溶解，再用毛边纸轻轻压在涂片上，吸掉二甲苯和香柏油，以免损坏涂片。柏油，以免损坏涂片。.465.5.注意事项注意事项（1 1）搬动显微镜时应用右手握住镜臂，左手托住底座，使）搬动显微镜时应用右手握住镜臂，左手托住底座，使镜身保持直立，并紧靠身体。切忌单手拎提。镜身保持直立，并紧靠身体。切忌单手拎提。（2 2）各个镜面切忌用手涂抹，以免手上的油、汗污损镜）各个镜面切忌用手涂抹，以免手上的油、汗污损镜面，造成日后发霉。面，造成日后发霉。（3 3）用二甲苯擦镜头时用量要少，

46、不宜久抹，以防溶解胶）用二甲苯擦镜头时用量要少，不宜久抹，以防溶解胶粘透镜的树脂。切勿用乙醇擦镜头和支架。粘透镜的树脂。切勿用乙醇擦镜头和支架。（4 4）因油镜的工作距离甚短，故操作时要特别谨慎，切忌）因油镜的工作距离甚短，故操作时要特别谨慎，切忌采用眼睛对着目镜边观察边下降镜筒的错误操作。采用眼睛对着目镜边观察边下降镜筒的错误操作。.47四四. .显微镜保养中的注意事项显微镜保养中的注意事项 1.1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件, ,以免损坏。以免损坏。2.2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。

47、 3.3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。以免压碎玻片或损伤镜面。4.4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。更

48、不可倾斜拿。6.6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。.48目的要求目的要求 认识酵母菌的形态结构，掌握其观察方法。认识酵母菌的形态结构，掌握其观察方法。 实验程序实验程序 观察酵母菌的形态观察酵母菌的形态 .49观察酵母菌的形态观察酵母菌的形态菌落特征的观察：菌落特征的观察： 取少量酿酒酵母划线接种在麦芽糖取少量酿酒酵母划线接种在麦芽糖平板培养基上，平板培养基上，28283030培养培养3 35d5d。用肉眼观察菌落。用肉眼观察菌落特征，项目包括菌落表面湿润或干燥、有无光泽、边特征，项目包括菌落表面湿润或干燥、有无光泽

49、、边缘形状、大小、颜色等缘形状、大小、颜色等观察酵母菌形态和无性繁殖：观察酵母菌形态和无性繁殖： 在洁净载玻片上滴加一在洁净载玻片上滴加一滴无菌水或滴无菌水或0.10.1美蓝液一滴，用接种环取菌苔少许与美蓝液一滴，用接种环取菌苔少许与无菌水或美蓝液混匀，盖上盖玻片，即成为水浸片。无菌水或美蓝液混匀，盖上盖玻片，即成为水浸片。用高倍镜观察啤酒酵母的形态和出芽繁殖。用高倍镜观察啤酒酵母的形态和出芽繁殖。 .50实验结果实验结果绘出酵母菌的形态图并注明各部位的名称绘出酵母菌的形态图并注明各部位的名称. .51 实验四实验四 霉菌形态观察霉菌形态观察一、实验目的一、实验目的1 1学习掌握插片法和水浸片

50、法观察霉菌的方法。学习掌握插片法和水浸片法观察霉菌的方法。2 2学习掌握低倍镜和高倍镜观察丝状菌体的技能。学习掌握低倍镜和高倍镜观察丝状菌体的技能。.52二、实验内容二、实验内容 用用水浸片法水浸片法观察：青霉、曲霉的形态和分生孢子。根霉观察：青霉、曲霉的形态和分生孢子。根霉的假根和孢囊孢子。的假根和孢囊孢子。 霉菌菌丝一般可从培养体上直接调取，作成水浸片。霉菌菌丝一般可从培养体上直接调取，作成水浸片。具体方法：在清洁载玻片中央，加蒸馏水一滴，用解针挑具体方法：在清洁载玻片中央，加蒸馏水一滴，用解针挑取少量菌丝放入水滴中，这时两手各持针一支，将菌丝取少量菌丝放入水滴中，这时两手各持针一支，将菌

51、丝分开，不使缠结成团。挑开菌丝后，轻轻加上盖玻片，注分开，不使缠结成团。挑开菌丝后，轻轻加上盖玻片，注意不要产生气泡，先用低倍镜后用高倍镜观察。意不要产生气泡，先用低倍镜后用高倍镜观察。.53三、作业三、作业 绘图、记录青霉、曲霉和根霉的形态。绘图、记录青霉、曲霉和根霉的形态。.54实验五实验五 染色与制片技术染色与制片技术一、实验目的一、实验目的 学习微生物的染色原理、染色的基本操作技术，学习微生物的染色原理、染色的基本操作技术，从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法及细从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法及细菌制片方法。菌制片方法。.55二、染色原理二、染色原理 由于微生物细胞含有大

52、量水分，对光线的吸收和反射与水由于微生物细胞含有大量水分，对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大溶液的差别不大, ,机体是无色透明的，与周围背景没有明显的机体是无色透明的，与周围背景没有明显的反差反差, ,在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解

53、组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。 经测定，细菌等电点经测定，细菌等电点pHpH在在2 25 5之间，故在中性、碱性或偏之间，故在中性、碱性或偏酸性溶液中，细菌的等电点均低于上述溶液的酸性溶液中，细菌的等电点均低于上述溶液的pHpH值，所以细菌值，所以细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的较多。微生物体内

54、各结构与染料结合力不同，故可用各种色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。染料分别染微生物的各结构以便观察。 .56三、染色方法三、染色方法( (一一) )简单染色法简单染色法 微生物不但个体微小，且无色半透明。要在显微镜下观微生物不但个体微小，且无色半透明。要在显微镜下观察清楚，必须染上颜色察清楚，必须染上颜色 。微生物细胞中含有大量的蛋白质等。微生物细胞中含有大量的蛋白质等一类两性电解质：在酸性溶液中结合质子带正电；在碱性溶液一类两性电解质：在酸性溶液中结合质子带正电；在碱性溶液中给出质子而带负电。等电点一般在中给出质子而带负电。等电点一般在

55、pH=25pH=25。所以，在中性、。所以，在中性、碱性或弱酸性溶液中，微生物细胞通常带负电荷。碱性染料在碱性或弱酸性溶液中，微生物细胞通常带负电荷。碱性染料在电离时，染色部分是带正电荷的，容易与带负电荷的菌体结合电离时，染色部分是带正电荷的，容易与带负电荷的菌体结合使之着色。经染色后的菌体细胞与背景形成鲜明的对比，在显使之着色。经染色后的菌体细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下很容易观察。微镜下很容易观察。 简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上颜色，如果仅为了在显微镜下看清细菌的形态，用简单染色即颜色，如果仅为了在显微镜下看清细

56、菌的形态，用简单染色即可。可。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法难于辨别细菌细胞的构造。法难于辨别细菌细胞的构造。.57三、染色方法三、染色方法( (二二) )复染色法复染色法 用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。抗酸性染色法。 革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大

57、类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用用G G+ +表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用菌，用G G- -表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成份和结构不同而造成的。胞壁的成份和结构不同而造成的。 .58三、染色方法三、染色方法( (二二) )复染色法复染色法 革兰氏染色法将细菌分为革兰氏染色法将细菌分为G G和和G G- -，这由两类细菌细胞壁的，这由两类细菌细胞壁的结构和组成的不同而决定。用结晶紫初

58、染后，所有的细菌都染结构和组成的不同而决定。用结晶紫初染后，所有的细菌都染上蓝紫色。碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫上蓝紫色。碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫- -碘的复碘的复合物，增强了染料与菌体的结合力。用乙醇脱色处理时，两类合物，增强了染料与菌体的结合力。用乙醇脱色处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。细菌的脱色效果是不同的。G G细菌的细胞壁主要由肽聚糖形细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，且壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色时使细成的网状结构组成，且壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色时使细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得

59、结晶紫碘碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保的复合物不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。持初染剂的蓝紫色。G G- -细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以在脱色处理时，类脂被乙醇溶解，细胞薄，类脂含量高，所以在脱色处理时，类脂被乙醇溶解，细胞壁的通透性增大，使结晶紫壁的通透性增大，使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来，碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。 .59四、压滴法制片技术四、压滴法制片技术（1 1）将洁净无油腻的载

60、片放于自己右边前方，在中央放一小）将洁净无油腻的载片放于自己右边前方，在中央放一小滴无菌水。滴无菌水。（2 2）将酒精灯放于自己正前方，点燃。）将酒精灯放于自己正前方，点燃。（3 3）用无菌操作方法从枯草芽孢杆菌斜面中沾取少量菌体，）用无菌操作方法从枯草芽孢杆菌斜面中沾取少量菌体， 与载片上的水滴充分混匀，把接种环上残留的菌体杀灭后，与载片上的水滴充分混匀，把接种环上残留的菌体杀灭后， 放回试管架。放回试管架。（4 4）用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液然后）用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液然后 将整个盖玻片慢慢放下，注意不要产生气泡。如菌液过多，将整个盖玻片慢慢放下，注意不