pcr实习自我鉴定

1、第1页共 15 页竭诚为您提供优质文档 /双击可除per 实习自我鉴定篇一：实验实习总结在这两年半的硕士研究生生涯里，从各位老师尤其是我 的导师喻红教授和各位师兄师姐、师弟师妹那里学到了很多， 这里面不仅有科研技术和理论知识，还包括很多为人处事的 道理。总之，两年多的时间里我成长了很多，懂得了很多， 学到了很多，我明白这些对于我今后的人生都是一笔宝贵的 财富。还记得刚一进实验室的那段时间，本就好奇心重的我对 什么都有兴趣。师兄师姐们做实验时我都会从一边看着，不 时的还会问很多问题。有时我的问题很浅薄幼稚，但是师兄 师姐们都一一详细地给我解答。有时因为自己的知识积累不 足，一时还听不明白，翻看文

2、献的效率又是非常的慢，自己 很是沮丧。这时，导师和师兄师姐们就会开导并引导我一步 一步来。让我以最快的速度融入科研生活中来。通过这两年半的磨练，我从一个刚入门的菜鸟逐渐成长为一个能单独完成各种实验的科研小能手。比如：基因组 DnA总 RnA 的提取，引物设计，RT-pcR 技术、荧光定量 pcR 技术，免疫组化技术，转基因小鼠的饲养与管理，动物取材与处理，第 2 页共 15 页细胞培养及 w-bloting 技术等。尤其是荧光定量pcR 技术，整板复孔之间误差基本能控制在绝对cT 值 0.2 以下，得到了老师和师兄师姐的肯定和认可。在这两年多的时间里，我 也曾遇到过很多困难，面对不理想的实验数

3、据和结果也曾沮 丧懊恼过。有段时间还一度怀疑自己的科研能力。比如刚一 上手引物设计的时候，有很多不懂的地方，设计出来的引物 扩增效率不高，bLAsT 方面的知识很多不会，不会摸退火温 度条件等。后来通过一步一步努力和别人的帮助，这些很快 都能做的得心应手。总之，一路走来让我成长了许多，学会了许多。更是导 师和同学帮我打开了科研世界的大门，面对这个有很多未知 的世界我不知道我能走多远登多高，但是我想我不会轻言放 弃。在这里我要感谢我的导师喻红教授及其它亦师亦友的老 师，还有这些朝夕相处的师兄师姐师弟师妹们。*老师您好：我叫谢光辉，是武汉大学基础医学院生物化学与分子生 物学专业的一名硕士三年级学生

4、，本科是武汉大学医学检验 专业（5 年制）。意向报考 16 年上海交通大学的博士研究生。 之前了解到上海交大的招生制度是一个导师每年只能招一 个博士生。所以想咨询一下您16 年还有没有博士研究生的指标，本人可否报考您的博士生。百忙打扰，望见谅！另附个人简历一份。篇二：20XX 年分子生物学组实习小结分子生物学室实习报告刖言分子诊断学作为一门新兴的学科，在疾病的诊断、疗效 监测等多方面都逐第3页共 15 页渐扮演起了重要的角色，但真正能很好的 将分子生物学诊断信息运用好的医务工作者还只是少数，不 少医生目前仍对传统的检验项目的临床意义和可信度仍然 怀有质疑的态度，更不用说一些刚发展起来的检验项目

5、。因 此检验专业的实习生不仅要掌握分子诊断学常用检验项目 的原理、方法，更应该孰知其临床意义，更好的与临床进行 沟通，才能更好的运用先进的检验诊断技术为患者服务。实 习目的：熟悉分子室常规的检查项目，掌握标本的签收和处理，掌握 pcR 的原理，核酸（DnA 和 RnA 的提取，pcR 仪的使用， 熟悉核酸杂交的原理和操作方法及杂交仪的使用。了解各检 测项目的临床意义。实习内容：1. hbVDnA 检测（定性和定量）、hcVRnA 检测（定量）：核酸提取是扩增前最主要的步骤，每个环节都要注意防止交 叉污染。主要步骤：每个 ep 管加 100 微升 DnA 浓缩液，再加 100 微升待测血清，震荡

6、混匀，离心12000rpmx10min，用加样枪弃上清，加 30 微升 DnA 提取液，震荡，金属浴（100C）10min，离心12000rpmx5min。提取后，配试剂，加样，扩增 1h45min，扩增仪型号为 7300。分析结果。注意，金属浴过 程中，金属浴箱要盖上，每个ep 管要盖严，防止加热过程中发生爆管，造成实验室的污染。若发生爆管，详细记录好 发生爆管的标本编号，爆管发生的原因，时间等情况。hsV-ll 型病毒 DnA 检测（定量）、hpV 病毒（6、11 型和 16、18 型） DnA 检测（定量）的标本均为分泌物，标本加生理盐第4页共 15 页水，震 荡，取 1ml 至 ep

7、管，离心 12000rpmx5min，弃上清，注意沉 淀易漂起，不要讲沉淀弃掉，加 50 微升 DnA 提取液，震荡， 金属浴（100C）10min。然后配试剂，加样，扩增 1h20min , pcR 仪为 7600。检验结果需要与患者的病史、临床信息综合 分析，绝对不可仅仅只凭pcR 结果进行疾病的诊断。2. 核酸杂交主要是指 hpV21 型检测，标本多为女性的阴道分泌物，首先提取 DnA,进行核酸体外扩增，得到扩增 产物，然后金属浴煮沸，淬火，得到大量单链的DnA 片段，将单链 DnA 片段加入到 500 微升杂交液中（之前的 DnA 提取 及淬火等操作在标本处理间进行，扩增在核酸扩增间进

8、行）,并到产物分析间进行核酸的杂交，每台杂交仪可一次做15个标本，应注意防止漏液和交叉污染。3. 其他流式细胞术等，但由于标本量较少，平时多的不多。实习存在的问题和不足分子生物学室的实习感觉还是太过短暂，再加之实习人 数多，操作的机会少，特别是标本少的项目，基本还是处于 见习的状态，而且相比其他组的实习，缺乏主动思考的的动 力，也许事理论知识学习不够扎实，也许是跟老师交流太少，在以后的学习和工作中，应加强相关学习，真正掌握好这这 一门新兴的学科，为今后的学习、该工作或者科研服务实习感想：一个月的实习很快结束了，每天其实都在做着大量的重 复工作，但是我并第5页共 15 页没有因此而感到厌烦，相反

9、我觉得这是一 门艺术，因为没有谁能保证 2 次加样的量是完全一样的，而 我们能做的就是是通过不断的练习，规范我们的操作，使每 次加样量尽可能的减小误差，会做不代表能做好，真正的快 乐就在于，将别人认为枯燥无聊的工作做的完美无瑕。分子诊断学是一门有力的科研武器，不仅可以运用于临 床诊断，在今后的工作中我们也可以运用这一门学科，在学 术上进行更深入的探索在实习结束之际，我要感谢分子生物学室每一位老师， 感谢他们耐心、亲切的教导，是他们严谨、一丝不苟的工作 态度教育了我，是他们团结协作、融洽的工作气氛感染了我。 他们循循善诱给我讲解，他们耐心规范了我的操作，他们给 予我很大的信任与鼓励，。而我能做的

10、是在今后的学习和工 作中带着一颗感恩的心认真负责地工作，培养高尚的职业道 德、严肃的科学态度和一丝不苟的工作作风，使自己成为一 名合格的检验专业的的优秀人员。祝福分子生物学室每一位老师工作顺利、阖家幸福篇三：关于 pcR 总结pcR 总结若模板为环状质粒，最好先用酶将其切开成线性分子。酵母、细菌及质粒基因组，每次反应的模板最大加入量 分别为 10ng，1ng和 1pg。引物的设计原则1.引物的长度应适宜，一般要求 1825bp, 对引物中两个引物之间的长度差异应小于3bp。第6页共 15 页2 .基本成分：g+c 的含量一般为 40%60%四种碱基应随机的分布，避免碱基堆积的现象。尤其引物的3

11、端，不应有连续的 3 个 g 或 c,否则会使引物与核酸的 g 或 c 富集 区互补从而影响 pcR的特异性。3. 引物自身：引物自身不应有反向重复序列或者大于 3bp 的自身互补序列，否则引物自身会折叠形成发夹结构， 将影响引物与待增 DnA 中的靶序列的杂交结合。4. 引物之间：引物之间不应存在互补序列，尤其应避免 3端的互补重叠以免形成引物二聚体。由于pcR 反应体系中含有高浓度的引物，即使引物之间存在极为微弱的互补作用也会使引物相互杂交，最终得到引物二聚体的扩增产物。若引物二聚体在 pcR 反应的早期形成，它们将通过竞争DnA聚合酶、引物及四种单核苷酸从而抑制待增DnA 的扩增。通过精

12、心设计引物、应用热启动pcR(hotstartpcR) 或者降落pcR(touchdownpcR)及特制的 DnA 聚合酶，可以减少引物二 聚体的生成。5.3末端：引物的 3端(羟基端)是引发延伸的起 点，因此一定要与模板准确配对，应尽量避免在引物3端 的第一位碱基是 A。引物 3端最佳碱基的选择是 g 和 c,因 为他们形成的碱基配对比较稳定。6. 溶解温度：3端引物和 5端引物应有相似的 Tm 值第7页共 15 页(不同序列的 DnA Tm 值不同。DnA 中 g-c 含量越高，Tm 值 越高，成正比关系。),其差别不应大于 5C。扩增产物与引 物的 Tm 值的差别应小于 10C,以确保

13、pcR 循环中的扩增产 物有效的变性。8. 引物的特异性：引物与非特异扩增序列的同源性不要 超过 70%或有连续8 个碱基同源。9. 引物的简并性：引物的 3端应为保守的氨基酸序列，即采用简并密码较少的氨基酸如met、Trp ,且要避免三联体密码第三个碱基的摆动位置位于引物的3端。设计引物时保证在最后 5 个核苷中含有 3 个 A 或 To引物的用量在 pcR 反应体系中，引物的浓度一般要求在 0.10.5 卩 m之间，这一引物浓度足以使1kb 的 DnA 片段在 pcR 反应体系中循环扩增 30 次。引物浓度过低，则产物量低；引物浓度 过高则会促进引物二聚体的形成以及非特异性产物的形成。反应缓冲系统反应缓冲系统提供 pcR 反应所必需的合适的酸碱度和某些离子。目前最常用的缓冲液是1050mmol/L 的Tris-hcl(ph8.38.8, 20C)，在 72C时，其 ph 值为 7.2 左右。反应缓冲系统中还含有Kcl , 50mm 以内的 Kcl 有利于引物的退火，而 50mn 以上的 Kcl 则抑制 TaqDnA 聚合酶的活性。然而，也有人认为含有 50mmKcl 的缓冲系统有利于大于 500bp第8页共 15 页的 DnA 片段的扩增，然而将缓冲系统中的Kcl 浓度提高到70100mm 则有利于提高较小的 DnA 片段的扩增产量。mg