CD4CD2 5调节性T细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究

1、孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究中文摘要点分离脾细胞和引流淋巴结淋巴细胞，使用流式细胞术( F C M ) 检测表达F o x p 3的C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞比例的变化。结果：与正常小鼠相比，R T - P C R 结果显示，在建立模型后的第7 天F o x p 3 表达增高( p _ 0 0 0 1 ) ，1 4 天时达到高峰( p o 0 0 1 ) ，后一直维持在较高的水平直至检测的免疫后2 8 天。F C M 结果显示脾脏C D 4 + F o x p 3 + T 细胞的比例在第

2、7 天时开始增高( 1 3 5 7 ，p 0 0 0 1 ) ，1 4 天时达到高峰( 1 9 7 3 ，p 0 0 0 1 ) ，后维持在一个较高的水平( 2 1 天1 6 8 5 ，p 0 0 0 1 ；2 8 天1 7 9 6 ，p 0 0 0 1 ；4 2 天1 7 4 1 ，p 0 0 0 1 ) 。脾脏C D 4 + C D 2 5 + F o x p 3 + T 细胞频率变化与C D 4 + F o x p 3 + T 细胞的频率变化趋势基本一致，即免疫后7 天开始增高，1 4 天达到高峰，后一直维持在较高的水平，直至检测到的免疫后4 2 天。淋巴结C D 4 + F o x p

3、 3 + T 细胞和C D 4 + C D 2 5 + F o x p 3 + T 细胞频率变化与脾脏这两群细胞的频率变化趋势一致。结论：在E A U 炎症发生发展过程中，F o x p 3 的表达和C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞频率的变化与炎症的发展密切相关。第三部分E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞增殖抑制功能变化的研究目的：检测E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对C D 4 + C D 2 5 T 细胞增殖的抑制功能。方法：分离1 4 天和2 8 天E A U 小鼠和对照组小鼠引流淋巴结

4、淋巴细胞，采用免疫磁珠细胞分离法( M A C S ) 分选出C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞和C D 4 + C D 2 5 T 细胞。取注射巯基乙酸盐小鼠腹腔渗出细胞作为抗原递呈细胞( A P C s ) 。在A P C s 和可溶性l t a g m la n t i C D 3 存在条件下，E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 T 细胞以不同比例与自体C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞共同培养或以l ：l 比例与对照组小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g细胞共同培养，共计培养7 2 小时后加入1 0 1 L t

5、lW S T 8 ，再培养4 小时，采用酶标仪读数检测细胞增殖。结果：E A U 小鼠和对照组小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞在多克隆刺激下无明显增殖。孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究中文摘要炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对C D 4 + C D 2 5 T 细胞抑制功能显著强于对照组小鼠( 1 4 天8 9 3 ，p 0 0 0 1 ；2 8 天6 4 0 ，p = 0 0 2 7 ；对照组4 4 2 ) 。结论sE A U 炎症期、恢

6、复期和对照组小鼠C D 4 + C D 2 5 * T r e g 细胞均具有无能和抑制特征。炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞的抑制增殖功能显著上调，可能与E A U 疾病的恢复关系密切。第四部分E A U 小鼠C I ) 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对细胞因子分泌抑制功能变化的研究目的：检测E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 十T r e g 细胞对C D 4 + C D 2 5 T 细胞产生细胞因子的抑制功能。方法。取1 4 天和2 8 天E A U 小鼠以及对照组小鼠引流淋巴结，分离淋巴细胞。C D 4

7、 + C D 2 5 + T r e g 细胞、C D 4 + C D 2 5 T 细胞和A P C s 的分选和处理如前所述。在可溶性的l l a g m la n t i C D 3 和A P C s 存在的条件下，E A U 小鼠或对照组小鼠C D 4 + C D 2 5 T 细胞分别以l ：l 比例与对照组小鼠或E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g细胞共同培养。在培养3 天时，移取上清，用E L I S A 方法检测上清中I F N 吖和I L 1 7 水平。结果：炎症期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 T 细胞培养上清中I F N 吖的水平

8、( 2 5 5 5 + 4 8 5 p g m 1 ) 显著高于对照组小鼠( 1 4 3 1 士2 4 7 p g m lp 0 0 0 1 ) ，恢复期小鼠C D 4 + C D 2 5 T 细胞培养上清中I F N 吖的水平( 1 0 7 3 士3 4 5 p g n ：1 1 ) 显著低于对照组小鼠( p = 0 0 3 2 ) 炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 十C D 2 5 T 细胞与C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞共同培养上清中I F N 吖的水平显著低于对照组小鼠( 炎症期3 5 8 士4 5 p g r n lp 0 0 0 1 ；恢复期5 0

9、 2 士1 1 8 p g n ap = 0 0 0 3 ：对照组7 5 8 士1 6 1 p g m l 。炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 T 细胞培养上清中I L - 1 7的水平显著高于对照组小鼠( 炎症期1 9 4 9 0 士5 7 6 8 p g m lp 0 0 0 1 ；恢复期V孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免瘦性葡萄膜炎中作用的研究中文摘要5 4 9 0 4 - 1 8 7 5 p g m lp O 0 0 1 ；对照组2 1 6 4 4 - 6 8 5 p g m 1 ) ，E A U 炎症期、恢

10、复期和对照组小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对C D 4 + C D 2 5 。T 细胞分泌I L 1 7 无显著抑制和促进作用。结论s炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对I F N - 1 , 的分泌强于对照组小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞，而对上调的I L 1 7 无显著抑制或促进作用。第五部分过继转移C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对E A U 影响的研究目的：探讨过继转移C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞对E A U 发病的影响。方

11、法：取1 4 天和2 8 天E A U 小鼠和对照组小鼠引流淋巴结，分离淋巴细胞。采用M A C S 法分选出C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞，通过鼠尾静脉注射到正常小鼠体内，同时建立E A U 模型。建立E A U 模型后1 4 天，病理切片观察炎症的严重程度结果：过继转移炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞可以显著抑制E A U 的严重程度( 炎症期1 3 4 - 0 3p - - - - 0 0 0 1 ；恢复期1 5 4 - 0 6p - - - - 0 0 2 7 ) ，过继转移对照组小鼠C D 4 + C D

12、 2 5 + T r e g 细胞虽然可以轻度抑制炎症的严重程度，但并无统计学意义( 2 4 4 - 0 5p = 0 2 3 5 ) 。结论：通过体内实验进一步证明炎症期和恢复期E A U 小鼠C D 4 + C D 2 5 + T r e g 抑制功能增强，可能参与抑制炎症活动，加速了E A U 的恢复。全文总结：本研究中C D 4 + C D 2 5 + 1 r c g 细胞表达和抑制功能在炎症期和恢复期E A U 小鼠体内显著上调的结果表明C D 4 + C D 2 5 + T r e g 细胞数量增加和功能增强可能加速E A U 炎症的迅速恢复。关键词：C D 4 + C D 2 5

13、 + 调节性T 细胞、实验性自身免疫性葡萄膜炎E A U 、叉头翼状螺旋转录因子F o x p 3 、I F N 吖、I L 1 7V I孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究英文摘要T h er o l eo fC D 4 + C D 2 5 + r e g u l a t o r yTc e l l si nt h ed e v e l o p m e n to fE x p e r i m e n t a lA u t o i m m u n eU v e o r e t i n i t i sM a jo r：O p

14、h t h a l m o l o g yP h DC a n d i d a t e ：M i nS u nS u p e r v i s o r：P r o f P e i z e n gY a n gA b s t r a c tB a c k g r o u n d ：C D 4 + C D 2 5 + r e g u l a t o r yTc e l l s ( T r e gc e l l s ) ，af u n c t i o n a l l yd i a i n c ts u b p o p u l m i o no fTc e l l sd i f f e r e n t

15、i a t e di nt h en o r m a lt h y m u s ，p l a yac r i t i c a lr o l ei nt h em a i n t e n a n c eo fp e r i p h e r a ls e l f - t o l e r a n c et h r o u g h o u tt h el i f e s p a no fa ni n d i v i d u a l F u n c t i o n a la b r o g a t i o no rd e f i c i e n c yo fC D 4 + C D 2 5 + T r e

16、 gc e l l sh a sb e e ns h o w nt ob er e s p o n s i b l ef o rt h ed e v e l o p m e n to fv a r i o u sa u t o i m m u n ed i s e a s e s C D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l ss p e c i f i c a l l ye x p r e s sF o x p 3 ，at r a n s c r i p t i o nf a c t o rt h a ti sg e n e r a l l yc o n s i d e

17、r e da sas p e c i f i cm o l e c u l a rm a r k e rf o rC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l si n I nt h ea b s e n c eo fF o x p 3 - e x p r e s s i n gC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l s ，a u t o r e a c t i v eT c e l lc l o n e sm a yb e c o m ea c t i v a t e da n di n d u c es e v e r ea n dw i d

18、e s p r e a da u t o i m m u n ed i s e a s e E x p e r i m e n t a la u t o i m r n u n eu v e o r e t i n i t i s ( E A U ) ，a no r g a n - s p e c i f i ca u t o i m m u n ed i s e a s em o d e l ，h a sb e e nw i d e l yu s e da sam o d e lf o rh u m a ni n t r a o c u l a ri n f l a m m a t i o

19、n H i s t o p a t h o l o g i c a l l y E A Ui ss i m i l a rt oh u m a nu v e i t i s An u m b e ro fg r o u p sh a v er e c e n t l ys h o w nt h a tb o t hT h l a n dT h l7 e f f e c t o rTc e l l s ( T e f fc e l l s ) p l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nt h ed e v e l o p m e n ta n dm a i n t

20、 e n a n c eo fE A U E A Ud i f f e r sf r o mh u m a nu v e i t i sb yt h ef a c tt h a tt h em o d e lh a sas t r i k i n gm o n o p h a s i en a t u r e ，w h e r e a sh u m a nd i s e a s eo f t e np r e s e n t sa sac h r o n i cr e l a p s i n gc o n d i t i o n T r e gc e l l sm a ye v o l v e

21、d u r i n gE A Ua n do f f e ra ne x p l a n m i o nf o ri t sm o n o p h a s i cn a t u r e V I I孙敏博士学位论文：C I M + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究英文摘要F i v es e c t i o n sw e r ei n c l u d e di nt h i ss t u d y ：P a r tIP u r p o s e ：T oo b s e r v et h ed i s e a s ep r o c e s sa n dp a t

22、 h o l o g i c a lc h a n g e so fE A U M e t h o d s ：F o ri n d u c t i o no fE A U ，B10 R I I Im i c ew e r ei m m u n i z e ds u b c u t a n e o u s l yw i t ha2 0 0 p Ie m u l s i o nc o n m i m n g5 0 肛gI R B P l 6 1 1 8 0i nC F A P T X ( 1 O p g ) W a sc o n c u r r e n t l yi n j e c t e di

23、n t r a p e r i t o n e a l l ya sa na d d i t i o n a la d j u v a n t C o n t r o lg r o u p so fm i c er e c e i v e da ne m u l s i o no f5 0 I _ t lP B Sa n d15 0 1 a lC F A R e s u l t s ：T h i si n f l a m m a t i o nw a sa l r e a d ye v i d e n to nd a y8 - 9a n dr e a c h e di t sp e a kb

24、yd a y14 ，f o l l o w e db yar a p i dr e g r e s s i o n T h ei n f l a m m a t i o nw a sc h a r a c t e r i z e dc l i n i c a l l yb ya q u e o u sf l a r e ，c e l l s ，e x u d a t e sa n ds e v e r ec h a n g e si nt h er e t i n aa n du v e a T h e r ew a sn oi n f l a m m a t i o ni nt h en o

25、 r m a lm i c eo rc o n t r o lm i c ei m m u n i z e dw i t hC F Ao n l y C o n c l u s i o n ：C o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p s ，E A Um i c eh a de v i d e n ti n f l a m m a t i o nw i t has t r i k i n gm o n o p h a s i cn a t u r e P a r tI IP u r p o s e ：T oi n v e s t i g a t e

26、t h ee x p r e s s i o no fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l so fE A Um i c e M e t h o d s ：S p l e n o c y t e sw e r eo b t a i n e df r o mn o r m a lm i c ea n dt h o s eE A Um i c ea f t e ri m m u n i z a t i o no n , l a y s7 ，14 ，21a n d2 8 T h em R N Al e v e lo fF o x p 3f r o md i f f e r

27、 e n tt i m ep o i n t sW a sd e t e r m i n e db yr e v e r s et r a n s c r i p t i o n p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n( R T - P C R ) T h ef r e q u e n c i e so fC D 4 + F o x p 3 + Tc e l l sa n dC D 4 十C D 2 5 + F o x p 3 + Tc e l l si ns p l e n o c y t e sa n dl y m p h c y t e s

28、w e r ea s s e s s e db yf l o wc y t o m e t r ya tt h ea f o r e m e n t i o n e dt i m ep o i n t s R e s u l U ：F o x p 3m R N Al e v e l si nt h es p l e n o c y t e si n c r e a s e do nd a y70 - - 0 0 01 ) ，r e a c h e dap e a l 【o nd a y1 4 ( p O 0 0 1 ) ，a n dt h e nm a i n t a i n e dah i

29、曲l e v e lu n t i ld a y2 8 F C Ma n a l y s i ss h o w e dt h a tt h ef r e q u e n c i e so fC D 4 + F o x p 3 + Tc e l l sa n dC D 4 + C D 2 5 + F o x p 3 + Tc e l l sw a sh i g h e ro nd a y7 ，r e a c h e di t sp e a ko nd a y14a n dt h e nm a i n t a i n e da tah i g h e rl e v e l 孙敏博士学位论文：C D

30、 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究英文摘要C o n c l u s i o n ：A ni n c r e a s e de x p r e s s i o no fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sw a so b s e r v e di nt h eE A Um i c e ，a n dt h eu p r e g u l a t i o no fF o x p 3p o s i t i v er e g u l a t o r yTc e l l sp a r a l l e l e dt h er e

31、 s o l u t i o no fu v e i t i s P a r t P u r p o s e ：T oa s s a yt h ei n h i b i t o r ye f f e c to fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l so np r o l i f e r a t i o no fC D 4 + C D 2 5 Tc e l lp o p u l a t i o ni nE A Um i c e M e t h o d s ：A td a y s14o r2 8f o l l o w i n gI R B Pi m m u n i z

32、 a t i o n C D 霹C D 2 5 + Tc e l l sa n dC D 4 + C D 2 5 Tc e l l sw e r ei s o l a t e df r o mm o u s el y m p h o c y t e so b t a i n e df r o md r a i n i n gl y m p hn o d e su s i n gM A C S I n t r a p e r i t o n e a li n j e c f i o no ft h i o g l y c o l a t eW a sp e r f o r m e da n dp

33、 e r i t o n e a le x u d a t e sc e l l s ( P E C s ) w e r ch a r v e s t e dt h r e ed a y sl a t e ra n du s e da sa n t i g e n p r e s e n t i n gc e l l s ( A P C s ) I nt h ep r e s e n c eo fP E C 锻A P C s ，C D 4 + C D 2 5 rc e l l sf r o mE A Um i c ew e r ec u l t u r e dw i t ho rw i t h

34、 o u tv a r i o u sn u m b e r so fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l s F o rc r o s s o v c l e x p e r i m e n t s ，C D 4 + C D 2 5 Tc e l l sf r o mc o n t r o lg r o u p si nt h ep r e s e n c eo fA P Cw e r em i x e da tar a t i oo f1 ：1w i t hC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sf r o mE A Um i c e

35、 ，a n dv i c ev e r s a A n t i - - C D 3m A ba taf i n a lc o n c e n t r a t i o no flp g m lw a sa d d e dt ot h ec u l t u r ef o rs t i m u l a t i o n E v e n t u a l l y 10 l _ t lW S T - 8( 2 一( 2 一m e t h o x y 一4 一n i t r o p h e n y l ) 3 ( 4 n i t r o p h e n y l ) 5 一( 2 ，4 一d i s u l f

36、 o p h e n y l ) 2 H t e t r a z o l i u m ，m o n o s o d i u r ns a l 0w a sa d d e da n di n c u b a t e df o r4 h T h ea b s o r b a n c eW a sd e t e r m i n e da t4 5 0 n mu s i n ga ne n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e ma s s a y R e s u l t s ：T h er e s u l t sr e v e a l e dt h a t

37、，a tar a t i oo f1 ：1 ，C D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l si s o l a t e df r o mE A Um i c eo nd a y14o r2 8a f t e ri m m u n i z a t i o ns u p p r e s s e dC D 4 + C D 2 5 rc e l lp r o l i f e r a t i o nb ya l la v e r a g eo f8 9 3 o r6 4 0 r e s p e c t i v e l y ，w h i c hW a ss i g n i f i c

38、 a n t l yh i g h e rt h a nt h a to b s e r v e dw h e nu s i n gc e l l so b t a i n e df r o mc o n t r o lm i c e ( 4 4 2 ) ( d a y1 4p 0 0 01 ；d a y2 8p = 0 0 2 7 ) C o n c l u s i o n ：T h ea n e r g i ca n ds u p p r e s s i v ep r o p e r t yo fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l si nb o t hE A

39、 Um i c e a n dc o n t r o lg r o u p sw e r eo b s e r v e d T h ef u n c t i o no fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sW a si n d e e ds t r e n g t h e n e di nE A Um i c e ，w h i c hm a yb ec l o s e l ya s s o c i a t e dw i t ht h er e g r e s s i o no fE A U I X孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细

40、胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究英文摘要P a r t P u r p o s e ：T oi n v e s t i g a t et h ee f f e c to ft h eC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l so nt h ec y t o k i n e sp r o d u c t i o nb yT h l T h l 7c e l l sf r o mE A Um i c e M e t h o d s ：A td a y s14o r2 8f o l l o w i n gI R B Pi m m u n i z a t i o n ，

41、C D 4 十C D 2 5 Tc e l l s ，C D 4 十C D 2 5 + Tc e l l sa n dA P C sw e r ei s o l a t e da n dt r e a t e da sp r e v i o u sd e p i c t i o n W i t ht h es t i m u l a t i o no fa n t i C D 3m A ba tac o n c e n t r a t i o no f1l a g m l ，C D 4 十C D 2 5 Tc e l l sf r o mE A Um i c eo rc o n t r o l

42、g r o u p si nt h ep r e s e n c eo fA P C sw e r ec u l t u r e dw i t hC D 4 十C D 2 5 + T r e gc e l l sf r o mc o n t r o lg r o u p so rE A Um i c ef o r3d a y s T h es u p e r n a t a n tW a sr e m o v e df r o mc u l t u r e sf o ra n a l y s i so fc y t o k i n ep r o d u c t i o n L e v e l

43、so fI L 17a n dI F N 吖w e r em e a s u r e du s i n gm o u s eD u o s e tE L I S Ad e v e l o p m e n tk i t s R e s u l t s ：T h er e s u l t so ft h eE L I S Ao ns u p e m a t a n t so b t a i n e df r o mt h ep r o l i f e r a t i o ne x p e r i m e n t sd e s c r i b e da b o v es h o w e das i

44、g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dI F N 吖l e v e lo nd a y14( d a y l 4V Sc o n t r o l ，p 0 0 0 1 ) ，b u tal o w e rl e v e lo ft h i sc y t o k i n eo nd a y2 8 ( d a y 2 8v sc o n t r o l ，p = 0 0 3 2 ) W h e nc u l t u r e dw i t hC D 4 十C D 2 5 十T r e gc e l l s ，I F N - q , p r o d u c t i

45、 o nb yC D 4 十C D 2 5 Tc e l l sW a ss i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e db o t hi nc o n t r o lg r o u p sa n di nt h eE A Um i c eo nd a y1 4a n d2 8a f t e ri m m u n i z a t i o n As t r o n g e ri n h i b i t i o nW a sn o t e di nt h ei m m u n i z e dm i c ea sc o m p a r e dw i mt h a

46、ti nc o n t r o lg r o u p s ( d a yl4P 0 0 01 ；d a y 2 8P = 0 0 0 3 ) As i g n i f i c a n t l yh i g h e rp r o d u c t i o no fI L 17b yC D 4 + C D 2 5 Tc e l l sW a so b s e r v e di nt h em i c ef o l l o w i n gi m m u n i z a t i o no nd a y14 ，a sc o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p

47、s ( P 0 0 01 ) A ni n c r e a s e dp r o d u c t i o no ft h i sc y t o k i n e ，a l t h o u g hl o w e rt h a nt h a to b s e r v e di nt h em i c eo nd a y14 ，W a sa l s on o t e di nt h em i c eo nd a y2 8 ( p 0 0 01 ) W h e nt h e s ec e l l sw e r ec o c u l t u r e dw i t hC D 4 + C D 2 5 + T

48、r e gc e l l se i t h e rf r o mi m m u n i z e dm i c eo rf r o mc o n t r o lg r o u p s ，w ed i dn o to b s e r v eas i g n i f i c a n tc h a n g ei nt h ep r o d u c t i o no fl L 17b yC D 4 十C D 2 5 Tc e l l s C o n c l u s i o n ：C D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sf r o mE A Um i c ew e r ei n

49、 h a n c e di ni n h i b i t i n gt h es e c r e t i o no fI F N l , ，b u tc o u l dn o ti n f l u e n c et h es e c r e t i o no fl L 17P a r tVP u r p o s e ：T of u r t h e ri d e n t i f yt h ei n h i b i t o r yf u n c t i o no fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sd u r i n gX孙敏博士学位论文：C D 4 + C D

50、2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究英文摘要t h ed e v e l o p m e n to fE A U M e t h o d s ：C D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sw e r es o r t e da n dr e s u s p e n d e di np h y s i o l o g i c a lp h o s p h a t e - b u f f e r e ds a l i n e ( P B S ) f r o mc o n t r o lm i c ea n di m m u n i z e dg

51、r o u p so nd a y s14o r2 8a n dw e r ei n j e c t e di n t r a v e n o u s l yi n t on a f v es y n g e n e i cm i c eo nt h ed a yo fi m m u n i z a t i o n 、 ，i mI R B P l 6 1 1 8 0t oi n d u c eE A U O nd a y1 4 ，e y e sw e r ee n u e l e a t e df r o me a c hg r o u pa n ds t a i n e db ys t a

52、n d a r dH Es t a i n i n g R e s u l t s ：T r a n s f e ro fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l so b t a i n e df r o mi m m u n i z e dm i c eo nd a y14o r2 8c o u l ds u p p r e s st h ea c t i v i t yo fE A U ( d a yl4p 0 0 01 ；d a y 2 8p = O 0 0 4 ) T r a n s f e ro fT r e gc e l l so b t a i n e

53、df r o mc o n t r o lg r o u p ss h o w e das l i g h td e c r e a s ei nt h ei n t e n s i t yo fE A U ，w h i c hd i dn o tr e a c hs t a t i s t i c a ld i f f e r e n c ew h e nc o m p a r e d 研t l lt h ei m m u n i z e dm i c et h a th a dn o tr e c e i v e dc e l l s ( p = O 2 3 5 ) C o n c l u

54、 s i o n ：U s i n gt h ei nv i v oe x p e r i m e n t s ，w ec o u l dg e tt h ec o n c l u s i o nt h a tt h ef u n c t i o no fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sf r o mE A Um i c eW a ss t r e n g t h e n e d ，s u g g e s t i n gt h a tC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l sm a yp l a ya l li m p o r t

55、a n tr o l ei nt h er e c o v e r yp h a s eo fE A U S u m m a r y ：As i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e de x p r e s s i o na n di m m u n o r e g u l a t o r ya c t i o no fC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l si sa s s o c i a t e dw i t ht h ed e v e l o p m e n ta n dr e g r e s s i o no fE A

56、U ，s u g g e s t i n gt h a tC D 4 + C D 2 5 + T r e gc e l l so r ei n d u c e dd u r i n gE A Ua n dm a yb ei n v o l v e di ni t sr e g r e s s i o n K e yw o r d s ：C D 4 + C D 2 5 + r e g u l a t o r yTc e l l s ，E A U ，F o x p 3 ，I F N 吖，I L 1 7I孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中

57、作用的研究缩写词汇表英文缩写词汇表( T a b l eo fE n g l i s hA b b r e v i a t i o n )6 7孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究缩写词汇表孙敏博士学位论文；C D 4 * C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究原创性声明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文

58、中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者：劲】、耻W 口年占月卅日学位论文使用授权声明本人完全了解中山大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆、院系资料室被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其他方法保存学位论文。学位论文作者签名：孑) 、秕日期：弘I 口年与月J 日孙敏博士学位论文：C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中作用的研究引言引言一、国内外研究现状

59、：l 、C D 4 * C D 2 5 + 调节性T 细胞在7 0 年代初，G e r s h o n 等人【1 捌最早描述了调节性T 细胞，并称之为抑制性T细胞。5 年后，S e h o n 研究小组【3 】提出在小鼠体内，这群细胞可以负性调节肿瘤免疫从而有助于肿瘤的生长。又一个5 年之后，N o r t h 研究小组【4 吲进行了一系列的实验研究证明，在肿瘤生长的小鼠体内，C D 4 + C D 2 5 + T 细胞能够抑制肿瘤的排斥反应，证实了肿瘤抑制性T 细胞的存在。这些前期的研究证实调节性T 细胞在肿瘤免疫中发挥着重要作用。不幸的是，尽管这些研究非常重要，在免疫学领域存在调节性T 细

60、胞这一事实仍然引起了人们的怀疑，导致关于抑制性T 细胞的研究滞后数十年。1 9 9 5 年，S a k a g u S h i 研究小组【7 】发现，白细胞介素2 ( i n t e r l e u k i n 2 ，I L 2 )受体a 链，C D 2 5 ，可以作为C D 4 + 抑制性T 细胞或者C D 4 + 调节性T 细胞的表型标志1 1C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞的来源和作用机制大量的研究证明，C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞由胸腺产生。其主要证据包括以下几个方面：首先，胸腺内与外周C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞具有相似的