乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法

1、乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1乳酸菌精简方法及显微镜使用方法第一部分：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法。第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检，下而是具体的染色方法和镜检方法，请参考。第一部分二乳酸菌革兰氏染色方法1目的在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。2原理通过结晶紫初染和碘液媒染后， 在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复 合物，革兰氏阳性菌山于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇 脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它 不

2、含类脂，故乙醇处理不会出现缝 隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在墜内，使其仍呈紫色：而革兰氏阴性菌因 其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂 为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因 此 通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性 菌呈红 色。3实验用品准备：灭菌玻片、10-lOOu 1 移液器、lO-lOOu 1 灭菌移液吸头、lOOul- lOOOul 移 液器、lOOul-lOOOul 移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革 兰氏染色液、吸水 纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器4操作：1 涂片：取灭过菌

3、的载玻片于实验台上，用移液枪吸取 10ul 待检样品滴在载 玻片的 中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜 过大。2 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加 热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标 本烤枯而变 形。固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处 尽快的来回通过 2-3 次，共约 2-3 秒种，并不时以载玻片背面 加热 触及皮肤，不觉过烫为宜(不超过 6 (rc)，放置待冷后，进行染 色。初染：在涂片薄膜上滴加草酸银结晶紫2 滴，使染色液覆盖涂片，染色约Imino水洗：斜置载玻片，在自来水龙头

4、下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色 为止。媒染：用 100-1000U1 移液枪吸取约 300U1 碘液滴在涂片薄膜上，使染色液 覆盖涂片染色约 Imino水洗：斜置载玻片，毎練冰龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无 斜置载玻片，脱色：滴加 95%乙醇脱色，至流岀的乙醇不现紫色为止，大约需时 20-30S,随即水洗。复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液2 滴，使染色液覆盖涂片，染色约 Imirio 10 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无 色为止。11 干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观 察，发现 U 的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观

5、察细菌的形态 及颜色，紫色的是革兰 氏阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。5清场实验结束后，将显微镜油镜上的残留的香柏油用擦镜纸轻轻擦去，将载物台移至最底处， 将灯光调到最暗并将其关闭电源，拔下电源插头，罩上防尘罩第二部分显微镜使用方法以XSZ-3G型号的生物显微镜为例介绍显微镜操作规程及注意事项，乳酸菌形态观察要用油镜。XSZ-3G生物显微镜操作规程及注意事项1操作规程1.1安放右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌而要淸洁、平稳，要选择临窗或 光线充足的 地方，距离桌边3 “4厘米处。1. 2清洁检査显微镜是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭，如有 胶或粘污，可用少

6、量二屮苯清洁之。1. 3对光镜筒升至距载物台2厘米处，低倍镜对准通光孔。调节光亮度的旋钮。1.4安装标木将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定，转动平 台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。1 5调焦调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧而仔细观察，直到物镜贴近玻片标本，然后左眼 自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬升镜简，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调淸晰。1 6观察镜检时应将标本按一左方向移动视野，直至整个标本观察完毕，以便不漏检，不重复。低倍镜观察：观察任何标本时，都必须先使用低倍镜，因为苴视野大，易发现目标和确定要观察 的部位。高倍镜观

7、察：从低倍镜转至高倍时，只需略微调动细调焦旋钮，即可使物像淸晰。使用高倍镜时 切勿使用粗调焦旋钮，否则易压碎盖玻片并损伤镜头。汕镜的观察：先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后，再换油镜观察。油镜观察前，应 将显微镜亮度调整至最亮，光圈完全打开。使用汕镜时，先在盖玻片上滴加一滴香柏汕（镜汕），然后降低镜简井从侧而仔细观察，直到油 镜浸入香柏汕并贴近玻片标本，然后用目镜观察，并用细调焦旋钮抬升镜筒，直到看淸标本的焦段时停 止井调节淸晰。香柏汕滴加要适量。汕镜使用完毕后一世要用擦镜纸沾取二甲苯擦去香柏汕，井再用 干的擦镜纸 擦去多余二甲苯。1. 7结束操作观察完毕，移去样品，扭转转换器使镜头v字型偏于两旁，擦抹干净，将光亮度调至最暗，再关 闭电源按钮，以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯，并套上镜套o2注意事项2.1光强的调节：一般情况下，染色标本光线宜强，无色或未染色标本光线宜弱：低倍镜观察光线 宜弱，高倍镜观察光线宜强。2. 2不应在高倍镜下直接调焦：镜简下降时.应从侧而观察镜筒和标本间的间距：要了解物距的临 界值。2. 3在进行高倍镜头的切换的时候，一泄要从低倍到高倍顺序，否则容易打坏镜头，还 会污染低 倍物镜。2.