最低检测限与ppt课件

1、( (双缩脲法测定血清总蛋白双缩脲法测定血清总蛋白) )教学要求与目的教学要求与目的掌握：掌握：1.1.线性实验的原理、用途。线性实验的原理、用途。2.2.最低检测限的定义及其评价方法。最低检测限的定义及其评价方法。3.3.血清总蛋白的测定原理及操作方法。血清总蛋白的测定原理及操作方法。熟习：熟习：1.1.可报告范围、分析丈量范围的概念。可报告范围、分析丈量范围的概念。2.2.生物检测限与功能灵敏度的概念。生物检测限与功能灵敏度的概念。3.3.血清总蛋白测定的临床意义。血清总蛋白测定的临床意义。一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定凯氏定氮法凯氏定氮法 参考方法参考方法 双缩脲法双缩脲法 常规测

2、定方法常规测定方法酚试剂法酚试剂法染料结合法染料结合法浊度法、紫外光谱法浊度法、紫外光谱法一实验原理一实验原理 蛋白质蛋白质 + + Cu在在540nm540nm波优点有吸收峰，在一定浓度范波优点有吸收峰，在一定浓度范围内其吸光度添加与蛋白含量成正比，由围内其吸光度添加与蛋白含量成正比，由此可求得蛋白质含量。此可求得蛋白质含量。OH2+紫红色络合物紫红色络合物二实验试剂二实验试剂 1 1、双缩脲试剂、双缩脲试剂2 2、规范液本试剂盒为总蛋白、规范液本试剂盒为总蛋白50g/L50g/L氢氧化钠氢氧化钠 酒石酸钾钠酒石酸钾钠 硫酸铜硫酸铜 碘化钾碘化钾 三操作方法三操作方法 1、操作参数：波长：5

3、40nm温度：37测定方式：终点法 2.2.操作步骤操作步骤（ul）BSUDH2O20标准液20血清20双缩脲试剂100010001000 混匀，37水浴10分钟，在540nm波优点，用空白管调零，读取各管吸光度。3 3、计算、计算血清总蛋白血清总蛋白(g/L)(g/L)=测定管吸光度测定管吸光度规范管吸光度规范管吸光度蛋白规范液浓度蛋白规范液浓度50g/L参考值：参考值：606083g/L83g/L四本卷须知四本卷须知 严重溶血和黄疸可使测定结果偏高严重溶血和黄疸可使测定结果偏高, ,可可 作标本空白管消除。作标本空白管消除。 2.2.脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。脂肪乳糜干扰比色，可加丙

4、酮离心。 3.3.右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。4.4.灵敏度较低。灵敏度较低。 1.1.精细度较好、准确度较高，精细度较好、准确度较高，WHOWHO引荐方法。引荐方法。 五方法学评价五方法学评价3.3.操作简便他、快速，本钱低廉。操作简便他、快速，本钱低廉。 2.2.线性范围宽线性范围宽10-120g/L10-120g/L。 六临床意义六临床意义1.1.蛋白浓度升高蛋白浓度升高1 1血液浓缩：脱水、外伤性休克等。血液浓缩：脱水、外伤性休克等。 2 2蛋白质合成添加：多发性骨髓瘤、蛋白质合成添加：多发性骨髓瘤、免疫增殖病等。免疫增殖病等。3 3蛋白质合成妨

5、碍：如肝脏疾病。蛋白质合成妨碍：如肝脏疾病。1 1蛋白丧失：如肾病综合征。蛋白丧失：如肾病综合征。 2.2.蛋白浓度降低蛋白浓度降低2 2摄入缺乏：营养不良。摄入缺乏：营养不良。 二、检测低限实验二、检测低限实验 检测低限检测低限LLD：指当标本中不含有待：指当标本中不含有待测分析物时，反响呼应量能够出现的数值范测分析物时，反响呼应量能够出现的数值范围，即单次丈量可到达的非空白检测呼应量围，即单次丈量可到达的非空白检测呼应量对应的分析物量。对应的分析物量。 生物检测限生物检测限BLD：某样品单次检测能：某样品单次检测能够具有的最小呼应量刚大于空白检测低限响够具有的最小呼应量刚大于空白检测低限响

6、 应量时，该样品内含有的分析物浓度或其它应量时，该样品内含有的分析物浓度或其它量值。量值。 功能灵敏度功能灵敏度FS：以日间反复：以日间反复CV为为20%时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值度或其它量值 。一原理一原理 选择适宜的空白标本，该标本与待测标本选择适宜的空白标本，该标本与待测标本的区别在于不含有待测物质，普通用途置过的区别在于不含有待测物质，普通用途置过的标本或普通标本，在分析步骤中省去关键的标本或普通标本，在分析步骤中省去关键试剂或操作。本次实验采用蒸馏

7、水作为空白试剂或操作。本次实验采用蒸馏水作为空白标本，采用双缩脲法进展多次测定，求出吸标本，采用双缩脲法进展多次测定，求出吸光度的均值及规范差，计算最低检测限。光度的均值及规范差，计算最低检测限。二操作步骤二操作步骤（ul）BSU（1-10）DH2O20标准液标准液20双缩脲试剂双缩脲试剂100010001000 混匀，37水浴10分钟，在540nm波优点，用空白管调零，读取各管吸光度。三计算三计算 1.计算计算10次测定的平均吸光度及规范差。次测定的平均吸光度及规范差。 2.计算最低检测限：平均吸光度计算最低检测限：平均吸光度+3S 3.将吸光度值转换成浓度单位。将吸光度值转换成浓度单位。

8、LLD=A低低/A标标C标标 可报告范围可报告范围RRRR：指可以报告的一切结：指可以报告的一切结果的范围，包含两种类型的范围，即分析丈果的范围，包含两种类型的范围，即分析丈量范围和临床可报告范围。量范围和临床可报告范围。三、线性范围实验三、线性范围实验 分析丈量范围分析丈量范围AMRAMR：指对没有进展任何：指对没有进展任何预处置稀释、浓度等的标本，由检测系预处置稀释、浓度等的标本，由检测系统直接丈量得到的待测物的可靠结果范围，统直接丈量得到的待测物的可靠结果范围，在此范围内一系列不同样本分析物的丈量值在此范围内一系列不同样本分析物的丈量值与其实践浓度真值呈线性比例关系。也与其实践浓度真值呈

9、线性比例关系。也即线性范围。即线性范围。 临床可报告范围临床可报告范围CRRCRR：指定量检测工程：指定量检测工程向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其它预处置。释、浓缩或其它预处置。一原理一原理 线性范围是指系统最终输出值浓度或活线性范围是指系统最终输出值浓度或活性与被分析物浓度或活性成比例的范围。性与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特征。程度，它反映整个系统的输出特征。 本实验运用不同浓度的总蛋白规范溶液，本实验运用不同浓度的总蛋白规范溶液

10、，用双缩脲试剂测定各自的浓度，以规范液预用双缩脲试剂测定各自的浓度，以规范液预期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量反响曲线。反响曲线。二试剂二试剂 1.蛋白质规范液蛋白质规范液50g/L 2.混合血清混合血清100g/L 3.双缩脲试剂双缩脲试剂三操作步骤三操作步骤 各测定管均测定双份，混匀，37水浴10分钟，在540nm波优点，用空白管调零，读取各管吸光度。（ul）BSU1U2U3U4U5DH2O20161284标准液标准液20血清血清48121620试剂试剂100010001

11、0001000100010001000四记录实验数据四记录实验数据五评价五评价 1.目测法：是评价几个不同浓度样本的多目测法：是评价几个不同浓度样本的多次丈量均值与实践值之间能否具有肉眼上的次丈量均值与实践值之间能否具有肉眼上的直线关系。没有用到统计学方法来验证线性。直线关系。没有用到统计学方法来验证线性。 2.平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作统计分析方法。以总蛋白浓度预期值为横坐统计分析方法。以总蛋白浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，假标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，假设一切实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，设一切实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，建立回归方程建立回归方程y=a+bx，要求，要求a接近于接近于0，b在在0.971.03之间，假设满足此条件，那么可直之间，假设满足此条件，那么可直接判别该测定方法能否在所要求的线性范围。接判别该测定方法能否在所要求的线性范围。 假设假设a较大，较大，b1.03或或0.97那么以为在高那么以为在高浓度