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文档简介
1、禽流感 禽流感血凝素HA功能HA表位文献综述噬菌体原理文献综述制备抗H5亚型禽流感病毒HA的单克隆抗体单抗纯化单抗鉴定噬菌体淘筛测序鉴定阳性噬菌体抗血清制备技技术术路路线线HI试验中和试验模拟肽功能确定单克隆抗体的制备流程单克隆抗体的制备流程技术路线噬菌体技术 技术路线结果与分析结果与分析杂交瘤细胞的制备l杂交瘤细胞染色体数目均高于两亲本细胞染色体数目 l 腹水HI效价要比上清高611个滴度 注:+表示HI试验阳性,表示HI试验阴性 1C4 2E124G2 5E121E124C121D41C42E12, 5E124G2 4C121E121D4M: protein marker1: Mcab 1
2、C4单抗单抗1C4提纯后提纯后SDS-PAGE(12)电泳图)电泳图 提纯后的抗体可见有两条带,一条重链带50Kd左右,一条轻链带27Kd左右 四轮亲和筛选对噬菌体的富集 以纯化单抗1C41C4为筛选配基,进行了四轮淘筛,随着淘筛次数增加,产出率都在提高图图3 3- -2 2 噬噬菌菌体体结结合合活活性性分分析析Fig.3-2 The detection binding of phage clone to BSA andMcAb1C4 by ELISA00.10.20.30.40.50.60.70.80.9123456789101112131415噬菌体克隆A630BSAMcAb 1C4竞争抑制实验结果竞争抑制实验结果取其中阳性噬菌体扩增液上清与不同浓度的H5亚型禽流感病毒等体积混合,加入到单抗1C4包被的酶标板中,其余操作步骤同ELISA抑制率(未抑制630-抑制630)/未抑制630100。124816320102030405060率制抑病毒稀释倍数 %小小 结结 共获得13株特异性的针对HA的单克隆抗体,其中有5株单抗的HI效价大于214,最高可达218。这些单抗具有良好的亚型特异性,为流感诊断方法的建立提供了有效的手段。 从噬菌体随机十二肽库中筛选到中和性单抗1C4所识别的模拟肽 ,氨基酸为D
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