仪器设备使用及维护保养_1

1、蓝色海洋书的海洋仪器设备使用及维护保养 一、高效液相色谱仪的用法注重事项 (1)更换流淌相时，若欲更换的流淌相与前一种流淌相混溶，可打开排液阀，用欲更换的流淌相以l0ml/min的流量工作5-10min，预置排出从前的流淌相，然后关闭排液阀，以1.0ml/min流量清洗色谱柱，再接上柱后检测器，清洗囫囵流路；若新的流淌相与原流淌相不相溶，则要用一个与两种流淌相都混溶的流淌相举行过渡清洗。(2)高压泵应避开长时光在高压下工作。假如发觉泵的工作压力过高，流量减小，可能由以下缘由造成：色谱柱、庇护柱、管路、检测池或检测器的入口管部分阻塞、过滤器和柱子上端接头等阻塞或输液流量太大，此时应立刻停止泵的工

2、作，待查清故障缘由再开泵继续举行工作。(3)试验开头前和试验结束后，用纯甲醇冲洗管路和色谱柱若干时光，可以避开许多意想不到的棘手。(4）泵与进样阀的衔接用不锈钢管（配衔接螺钉和密封刃环）衔接恒流泵液体出口与进样阀入口（为了保证样品较少蔓延，进样阀与色谱柱之间以及色谱柱与检测器之间的衔接管应尽量要短）。新购买的管路需经过清洗后才干用法，清洗挨次为：氯仿甲醇（或无水乙醇）水lmol/l硝酸水甲醇氮气流吹干；聚三氟乙烯管用法前用甲醇冲洗即可。(5)溶剂过滤装置全部溶剂在用法之前必需经过严格过滤，除去极小的机械杂质，以防这些微量杂质磨损泵的活塞、阻塞柱头垫片、堵塞进样阀或输液管道。除去机械杂质最容易的

3、方法是用法真空泵的微膜过滤除去杂质。(6)溶剂脱气装置流淌相进入高压泵之前必需举行脱气处理，否则流淌相通过色谱柱时气泡受到高压而压缩，流至检测器时因压力降低而将气泡释放，增强基线噪声，严峻时会造成分析敏捷度下降、基线不稳，使仪器不能正常工作，在梯度洗脱时这种状况尤其突出。常用的脱气办法有超声波振荡脱气、惰性气体鼓泡吹扫脱气以及在线（真空）脱气三种。二、高效液相色谱柱系统的日常维护(1)在进样阀后加流路过滤器（(0.5m烧结不锈钢片），拦住来源于样品和进样阀垫圈的微粒。(2)在流路过滤器和分析柱之间加上“庇护柱”，“庇护柱”装填有与分析柱相同的固定相，柱长普通为5-30mm，收集堵塞柱进口的来自

4、样品的降低柱效的化学“垃圾”；庇护柱是易耗品，试验室应有备用庇护柱，以便常常便利地举行更换。(3)样品量不应过大，流淌相流速也不应一次转变过大，色谱柱应避开骤然变幻的高压冲击。(4)色谱柱应在要求的ph范围和柱温范围下用法，应用法不损坏柱的流淌相，以免进样后对色谱柱造成损伤。(5)每次工作结束后，都应用流淌相出冲洗色谱柱10-20min，并继续用强溶剂（乙腈或甲醇）冲洗色谱柱。三、高效液相色谱柱的制备技术1色谱柱的制备色谱柱的材料通常用不锈钢，内壁要抛光才干用法。当柱压不超过7mpa时，也可用厚壁玻璃或石英管柱。柱子用法前要依次用氯仿、甲醇、水清洗，再用50硝酸对内壁作钝化处理l0min以上，

5、使内壁生成钝化的氧化物膜层。假如试验室具备一定条件的话可以自行填充液相色谱柱，填充液相色谱柱的办法主要有干法和匀浆填充法两种。(1)干法原则上微粒大于20m的填料可以用这个办法填充液相色谱柱。详细办法为：将填料通过一端漏斗分多次加入到垂直放置的柱管中，另一端装上筛板，同时要边填充边敲打或振动柱管，直至填满为止。除去漏斗，再小扣柱子数分钟，至确认已装满，然后装上筛板，接上高压泵，在高于用法的柱压下，用载液冲洗数小时，以逐去空气，得到填充紧密而匀称的色谱柱。(2)匀浆填充法匀浆填充法装柱又称湿法装柱，无论大粒径还是小粒径固定相均可采纳此法装柱，但直径小于l0m的填料，不能用干法填充，必需采纳湿法。

6、详细办法是：用二氧六环和三氯化碳，或三氯乙烯和三溴乙烷等溶剂，按固定相的密度不同，采纳不同的溶剂比例，配制成密度与固定相相近的溶液，经超声处理使填料颗粒在此溶液中高度簇拥，展现乳浊液状态，成为无显然结块的半透亮匀浆，脱气后装入匀浆罐中。然后用加压介质（己烷或甲醇等）在高压下将匀浆压入柱管中，便制成具有匀称、紧密填充床的高效液相色谱柱。匀浆填充法的关键是匀浆的制备，并需要一台性能优良的大流量泵。2梯度洗脱技术当用组成一定的流淌相达不到分别要求时，可按一定程序不断转变流淌相组成，使组分得到较好的分别，即采纳梯度洗脱。梯度洗脱技术可以改进复杂样品的分别，充实峰形，削减脱尾并缩短分析时光，提高分别效能

7、，而且还能降低最小检测量和提高分别精度。梯度洗脱对复杂混合物、特殊是保留值相差较大的混合物的分别是极为重要的手段，由于这些样品的k/范围宽，不能用等度办法容易地处置。有些样品用等度洗脱可能分别得也很好，但色谱柱中可能滞留有少量强保留组分，使柱子逐步失活，而且还可能干扰到下一个样品的分析。这种状况也可以采纳梯度洗脱技术来解决。梯度洗脱分低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）两种方式。(1)低压梯度常压下将两种溶剂在在混合器中混合匀称，再用泵加压输入色谱柱。其优点是只需一个高压输液泵，价廉，用法便利。(2)高压梯度是先用两台高压输液泵将极性强度不同的两种溶剂打入混合室举行混合，然后以一定的流量输出

8、进入色谱柱。两种溶剂进入混合室的比例可由程序控制器或计算机来调整，两输液泵的流量可自立控制，可获得随意梯度的程序，精度高，易于实现自动化控制。但起码需要两台高压输液泵，仪器价格昂贵。虽然梯度洗脱技术比等度洗脱复杂，有用办法的建立比较困难，而且梯度洗脱时基线经常飘移不定，但是随着近期设备、材料的发展以及对这种技术更好的理解，上述问题基本上已被克服，因此，梯度洗脱技术仍然是液相色谱试验室常用的重要技术之一。梯度洗脱，流淌相组成不断发生变幻，不宜用法折光检测器。四、薄层色谱法操作技术1仪器与材料(1)玻板用5cm×20cm或10cm×20cm的规格，要求光洁、平整，洗净后不附水珠

9、，晾干。(2）固定相常用固定相有硅胶g、硅胶gf254、硅胶h、硅胶hf254等。其颗粒大小，普通要求直径为10-40m。按各品种项下规定取一定量的固定相，按“薄层板制备”办法制备薄层板。(3)薄层涂布普通可分无黏合剂和含黏合剂两种；前者系将固定相挺直涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，普通常用10%-15%锻石膏（caso4 2h2o在140加热4h)，混匀后加水适量用法，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5%-0.7%）适量调成糊状，匀称涂布于玻板上。(4)绽开室应用法适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱绽开缸，并有严密的盖子，底部应平整光洁，便于观看。2操作办法(1）薄层板制备按照各品种项下规定，取1份固定相和3份水（或黏合剂）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，用倾注法或平铺法或涂布器法，在玻板上涂布成厚度为0.2-0.3mm的薄层板，将涂好薄层的玻板置水平台上，于室温下晾干后在110烘30min，即置有干燥剂的干燥箱中备用。用法前检查其匀称度（可通过透射光和反射光检视）。(2)点样用微量注射器或微量吸管吸取规定量样品溶液，点样于薄层板上，普通为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径为2-4mm，点间距离为1.5-2.0cm，点样时必需注重勿损伤薄层表面。(3)绽开绽开缸如需预先用绽开剂饱和，可在缸中加