关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析

1、蓝色海洋书的海洋关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析 link链接猪肉是否含瘦肉精的迅速推断办法 看该猪肉的脂肪(猪油)，如该猪肉在皮下就是瘦肉或仅有少量脂肪，则该猪肉就可能含有“瘦肉精(clb)”。含有“瘦肉精”的瘦肉外观特殊鲜红，纤维比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特殊薄。而普通健康的瘦猪肉是淡红色，肉质弹性好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印章和检疫合格证实。一、样品迅速检测办法1.胶体金检测卡法(1)特点操作容易、检测速度快，尿样检测时光约5min，组织约10min。无需其他仪器设备

2、。样品量需求少。适用于大量样本的迅速步筛。结果推断容易明白。(2)推断结果阴性:c线条显色，t线条肉眼可见，无论色彩深浅均判为阴性。阳性:c线条显色，t线条不显色，判为阳性。无效:c线条不显色，无论t线条是否显色，该试纸均判为无效。(3)检测对象猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。(4)适用单位生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。2.酶联免疫(elisa)法(1)检测原理测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对克伦特罗igg的包被抗体。克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标志物、标准或试样溶液。克伦特罗与竞争性酶标志物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体衔接的克伦特罗酶标志物在洗

3、涤步骤中除去。将底物(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入孔中孵育，结合的标志酶将无色的发色剂转化为蓝色产物。加入反应停止液后使色彩由蓝色改变为黄色。在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦特罗浓度的自然对数成反比。(2)试剂磷酸二氢钠、高氯酸、异丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/l高氯酸溶液、1mol/l氢氧化钠溶液、ph=6的0.1mol/l磷酸二氢钠缓冲溶液、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、针孔式微孔过滤膜(0.45m，水相)、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板(12调×8孔)包被有针对克伦特罗igg的包被抗体、克伦特罗系列标准液(最少5倍比稀释浓度水平，外加1个空白、过氧化

4、物酶标志物(浓缩液)、克伦特罗抗体(浓缩液)、酶底物(过氧化尿素)、发色剂(四甲基联苯胺)、反应停止液(1mol/l硫酸)、缓冲液(酶标志物及抗体浓缩液稀释用)。(3)仪器超声波清洗器、磨口玻璃离心管:11.5cm(长)×3.5cm(内径)，具塞、酸度计、离心机、震荡机、旋转蒸发器、涡旋式混合器、匀浆器、酶标仪(配备450nm滤光片)、微量移液器:单道20l、50l、100l和多道(50250)l可调。(4)试样测定肌肉、肝脏及肾脏试样称取肌肉、肝脏或肾脏试样10g(精确到0.01g)，用20ml0.1mol/l高氯酸溶液均浆，置于膜口玻璃离心管中；然后置于超声波清洗器中超声20mi

5、n，取出置于80水浴中加热30min。取出冷却后离心(4500r/min)15min。倾出上清液，沉淀用5ml0.1mol/l高氯酸溶液洗涤，再离心，将两次上清液合并。用1mol/l氢氧化钠溶液ph值调至9.5±0.1，若有沉淀产生，再离心10min将上清液转移至磨口玻璃离心管中，加入8g氯化钠，混匀，加入25ml异丙醇+乙酸乙酯(40+60)，置于振荡器上振荡提取20min。提取完毕，放置5min(若有乳化层稍离心一下)。用吸管当心将上层有机相移至旋转蒸发瓶中，用20ml异丙醇+乙酸乙酯(40+60)再重复萃取一次，合并有机相，于60在旋转蒸发器上浓缩至近干。用1ml0.1mol/

6、l磷酸二氢钠缓冲(ph=6.0)充分溶解残留物，经针筒式微孔过滤膜过滤，洗涤3次后彻低转移至5ml玻璃离心管中，并用0.1mol/l磷酸二氢钠缓冲液(ph=6.0)定容至刻度。尿样试样若尿液浑浊先离心(3000r/min)10min，将上清液适当稀释后上酶标板举行酶联免疫法筛选实验。血液试样将血清或血浆离心(3000r/min)10min，将上清液适当稀释后上酶标板举行酶联免疫法筛选实验。(5)检测步骤将标准试样(起码按双平行试验计算)所用数量的孔条插入微孔架，记录标准和试样的位置。加入100l稀释后的抗体溶液到每个微孔中,充分混合并在温室孵育15min。倒入孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上

7、拍打(每行拍打3次)，以保证彻低除去孔中的液体。将250l蒸馏水充入孔中，再次倒入孔中液体，再重复操作两遍以上。加入20l的标准或处理好的试样到各自的微孔中。标准和试样起码做两个平行实验。加入100l稀释的酶标志物，温室孵育30min。加入50l酶底物和50l发色试剂到微孔中，充分混合并在温室暗处孵育15min。加入100l反应停止液到微孔中,混合好尽快在450nm波特长测量吸光度值。(6)结果计算用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值与空白溶液的比值计算。相对吸光度值(%)=b/b0×100%式中:b标准溶液的吸光度；b0空白(浓度为0的标准溶液)的吸光度。将计算的相对吸光度值(%)

8、对应克伦特罗浓度(ng/l)的自然对数作为坐标系统曲线图，校正曲线在(0.0040.054)ng(200ng/l2000ng/l)范围内呈线性，对应的试样浓度可通过校正曲线算出。x=(a×f)/(m×1000)式中:x试样中克伦特罗的含量，g/kg；a试样的相对吸光度值(%)对应的克伦特罗含量，ng/l；f试样稀释倍数；m试样的取样量，g。计算结果精确到小数点后两位。二、其他办法目前，检测瘦肉精的常用办法有高效液相色谱法(hplc)、气相色谱-质谱法(gc-ms)、毛细管区带电泳法(ce)、高效液相色谱-质谱联使用(hplc-ms)、气相色谱-傅立叶红外联使用(gc-fti

9、r)、薄层色谱法(tlc)。而我国结合自己的实际状况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标准。该标准挑选确定了两种测定办法:高效液相色谱法(hplc)、气相色谱-质谱法(gc-ms)。1.高效液相色谱法(hplc)hplc法适合测定热不稳定和强极性的-感动剂及其代谢产物，而且hplc法可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(ms)等系统联用，简单实现分析过程的自动化。目前，我国已将hplc法作为检测clb残留的半确证性办法，最低检测限范围为(115)ng/g，其优点是专属性好、挑选性强、检测精确度较高，而且假阳性率低；缺点是样品处理时光长，检测过程繁琐、难以操作，需

10、贵重仪器，在实际应用中受到一定限制。2.气相色谱-质谱法(gc-ms)gc-ms法的优点是把色谱高效迅速的分别效果和质谱高敏捷度的定性分析有机结合起来，能在多种残留物同时存在的状况下对某种特定的残留物举行定性、定量分析，而且具有更高的检测极限。另外，gc-ms法与hplc法相比，检测敏捷度更高，假阳性率更低。因此，我国将gc-ms法定为检测clb确实证性办法(ny/t468-2001)。3.液相色谱-质谱/质谱法(hplc-ms/ms)参见sn/t1924-2007进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测办法。本标准适用于动物源性食品肌肉和内脏中克伦特罗、莱克多巴

11、胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测。试样中的药物残留采纳ph值为5.2的乙酸铵缓冲液提取，同时加入-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶举行酶解后，提取液经c18和scx双spe柱净化，液相色谱-质谱举行测定，内标法定量。三、展望按照目前国内外检测clb各种方法的发展状况以及clb滥用及残留的严重性，建立多种克服上述各种检测办法缺点的简便、迅速、精确、可实现在线检测的clb技术势在必行。滴金免疫技术(digfa)和生物传感技术(biosensor，bs)是两种迅速、高效的残留物分析技术。其中，digfa技术已胜利运用于早孕诊断、弓形虫病诊断、血吸虫病诊断等，敏捷度及精确度均很抱负。对于生物传感器技术，其原理为当分子识别部分与被识别