酶解活性蛋白

1、 酶工程技术开发乳蛋白生物活性肽酶工程技术开发乳蛋白生物活性肽冯翠萍 内容内容 o酪蛋白组成酪蛋白组成o酪蛋白组分的特点酪蛋白组分的特点o酪蛋白组分的分离技术酪蛋白组分的分离技术o酪蛋白酶解产物的类型和特性酪蛋白酶解产物的类型和特性1.1.酪蛋白的组成特点：酪蛋白的组成特点：o 结构开放松散（由于酪蛋白含有大量脯氨酸，它结构开放松散（由于酪蛋白含有大量脯氨酸，它们在多肽链上分布不均匀，限制了们在多肽链上分布不均匀，限制了- -螺旋和螺旋和- -折折叠的形成）叠的形成）o pH4 pH45 5范围内范围内 溶解性最低溶解性最低 o 天然存在少量天然存在少量 磷蛋白的代表之一磷蛋白的代表之一(摘自

2、 Dairy processing handbook)表表1 1 酪酪 蛋蛋 白白 组组 成成成分成分含量含量（g/100g干干品酪蛋白）品酪蛋白）分子量分子量氨基酸残基数氨基酸残基数等电点等电点s1-酪蛋白酪蛋白35.6 约约23000199 4.1s2-酪蛋白酪蛋白9.9207-酪蛋白酪蛋白33.6约约240002094.5-酪蛋白酪蛋白11.9 约约19000169 4.1 2.2.酪蛋白组分的分离依据酪蛋白组分的分离依据分离目的：分离目的： 开发酪蛋白源生物活性肽开发酪蛋白源生物活性肽分离依据：分离依据：o等电点等电点o不同温度下的溶解性不同温度下的溶解性o对钙的敏感性差异对钙的敏感性

3、差异 3.3.酪蛋白组分的分离技术酪蛋白组分的分离技术o聚丙烯酰氨凝胶电泳法（聚丙烯酰氨凝胶电泳法（SDS-PAGESDS-PAGE）o离子交换色谱法离子交换色谱法o凝胶过滤法凝胶过滤法o高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）o快速蛋白质液相色谱（快速蛋白质液相色谱（FPLCFPLC） HPLCHPLC法因其可以快速、有效、精确分析复杂的混合物而法因其可以快速、有效、精确分析复杂的混合物而在酪蛋白酶解产物的分析中广泛应用，更适于制备毫克在酪蛋白酶解产物的分析中广泛应用，更适于制备毫克级的高纯度肽。但是对于大量肽段的粗提纯还是主要依级的高纯度肽。但是对于大量肽段的粗提纯还是主要依赖于

4、赖于离子交换色谱法离子交换色谱法。目前，寻求切实有效的大规模目前，寻求切实有效的大规模分离手段应是研究人员努力的方向。分离手段应是研究人员努力的方向。PAGE电泳结果电泳结果4.4.酪蛋白酶解产物酪蛋白酶解产物o近十几年来，欧洲和日本的一些学者对食物源近十几年来，欧洲和日本的一些学者对食物源蛋白质酶解产生的生理活性物质进行了多方面蛋白质酶解产生的生理活性物质进行了多方面的研究，已证明酪蛋白源的生理活性肽是以无的研究，已证明酪蛋白源的生理活性肽是以无活性的形式隐藏在母体蛋白的氨基酸序列中的，活性的形式隐藏在母体蛋白的氨基酸序列中的，必须经过适当酶解才能被释放出来，发挥出多必须经过适当酶解才能被释

5、放出来，发挥出多种生物学功能，调节人体生理机能。酶法制备种生物学功能，调节人体生理机能。酶法制备的活性肽具有较高活性，而且不会产生有害的的活性肽具有较高活性，而且不会产生有害的副产物。副产物。 4.4.酪蛋白酶解产物酪蛋白酶解产物o表面活性肽表面活性肽o营养性肽营养性肽o生理活性肽生理活性肽 酪蛋白磷酸肽酪蛋白磷酸肽(CPP) 阿片样肽阿片样肽(Opioid peptides) 阿片样拮抗肽阿片样拮抗肽(Opioid antagonist peptides) 降血压肽（降血压肽（Antihypertension peptides） 免疫调节肽（免疫调节肽（Immunoregulatory pe

6、ptides） 抗血栓肽（抗血栓肽（Antithrombotic activity peptides） （1）表面活性肽表面活性肽o例如，酪蛋白水解产生的片段例如，酪蛋白水解产生的片段s1-CNs1-CN（1-1-2323）、）、-CN-CN（193-209193-209）和和-CN-CN（1-251-25）可用于食品中作为可用于食品中作为稳定剂稳定剂和和乳化剂乳化剂。此外，。此外，受控条件下酪蛋白的水解可增强起泡性和乳受控条件下酪蛋白的水解可增强起泡性和乳化性，表面活性肽和一些其他肽的衍生物对化性，表面活性肽和一些其他肽的衍生物对食品和饮料的稳定性有重要作用。高分子量食品和饮料的稳定性有重要

7、作用。高分子量的多肽可以促进啤酒起泡并维持其泡沫的稳的多肽可以促进啤酒起泡并维持其泡沫的稳定性。定性。（2）营养性肽）营养性肽o大量研究结果表明，摄入人体的蛋白质经过大量研究结果表明，摄入人体的蛋白质经过消化道酶的作用，并不是彻底降解为游离氨消化道酶的作用，并不是彻底降解为游离氨基酸被吸收，而是多以寡肽（二、三肽）的基酸被吸收，而是多以寡肽（二、三肽）的形式被吸收。所以添加游离的必需氨基酸来形式被吸收。所以添加游离的必需氨基酸来平衡营养并不一定能满足人体的需求。对于平衡营养并不一定能满足人体的需求。对于营养不良和蛋白质消化吸收不利的病人来说，营养不良和蛋白质消化吸收不利的病人来说，在膳食中，用

8、短肽的混合物和蛋白质水解物在膳食中，用短肽的混合物和蛋白质水解物代替游离氨基酸或多肽的混合物作为食品原代替游离氨基酸或多肽的混合物作为食品原料配方中的氮源。料配方中的氮源。 （2）营养性肽）营养性肽o当常规的蛋白质水解物因为特殊氨基酸的不当常规的蛋白质水解物因为特殊氨基酸的不耐症而不能添加到食品中时，其它短肽却可耐症而不能添加到食品中时，其它短肽却可以作为替代物添加。以作为替代物添加。一个典型的例子是缺乏一个典型的例子是缺乏苯丙氨酸的肽可以用于患有苯酮尿症的病人苯丙氨酸的肽可以用于患有苯酮尿症的病人的膳食中。的膳食中。对于那些对牛乳中对于那些对牛乳中s1-CNs1-CN和和-乳球蛋白过敏的婴儿

9、来说，低抗原性肽比相乳球蛋白过敏的婴儿来说，低抗原性肽比相应的天然蛋白质更能降低婴儿的过敏反应。应的天然蛋白质更能降低婴儿的过敏反应。这种肽也是目前市场上研制开发最多的一种这种肽也是目前市场上研制开发最多的一种。（3 3）生理活性肽）生理活性肽 酪蛋白磷酸肽酪蛋白磷酸肽(CPP) 阿片样肽阿片样肽(Opioid peptides) 阿片样拮抗肽阿片样拮抗肽(Opioid antagonist peptides) 降血压肽（降血压肽（Antihypertension peptides） 免疫调节肽（免疫调节肽（Immunoregulatory peptides） 抗血栓肽（抗血栓肽（Antith

10、rombotic activity peptides） 酪蛋白磷酸肽（酪蛋白磷酸肽（CPPCPP）o-CN-CN和和-CN-CN的磷酸丝氨酸残基。的磷酸丝氨酸残基。 -CN-CN（66-66-7474和和43-78943-789）、）、 -CN-CN（1-251-25）可促进小鼠对可促进小鼠对钙的吸收。钙的吸收。o由于这种磷酸肽上具有高密度的由于这种磷酸肽上具有高密度的负电荷负电荷，可以，可以抵抗进一步酶水解。另外，磷酸丝氨酸残基能抵抗进一步酶水解。另外，磷酸丝氨酸残基能够结合二价的金属离子，如，钙、锌、铜、铁。够结合二价的金属离子，如，钙、锌、铜、铁。酪蛋白磷酸肽在酪蛋白磷酸肽在pH7pH7

11、8 8的条件下，可与的条件下，可与CaCa2+2+结合结合形成可溶性复合物，增加了可溶性钙的浓度，形成可溶性复合物，增加了可溶性钙的浓度，防止在中性到偏碱性的小肠环境内不溶性磷酸防止在中性到偏碱性的小肠环境内不溶性磷酸钙的沉淀。钙的沉淀。 酪蛋白磷酸肽（酪蛋白磷酸肽（CPPCPP）o酪蛋白磷酸肽可用作食品钙强化剂，增酪蛋白磷酸肽可用作食品钙强化剂，增强肠道对钙在体内的保持，这种钙强化强肠道对钙在体内的保持，这种钙强化剂在体内的吸收不需要剂在体内的吸收不需要V VD D的参与。的参与。o还可作为许多矿质元素如铁、铜、锰及还可作为许多矿质元素如铁、铜、锰及硒的载体，对肠道内痕量元素的吸收有硒的载体

12、，对肠道内痕量元素的吸收有重要影响。重要影响。酪蛋白磷酸肽（酪蛋白磷酸肽（CPPCPP）o工业生产工业生产CPPCPP以酪蛋白或牛乳为原料，用以酪蛋白或牛乳为原料，用胰酶水解，使胰酶水解，使CPPCPP游离，再用树脂或酶除游离，再用树脂或酶除去或分解其中的苦味成分，用钙去或分解其中的苦味成分，用钙- -乙醇沉乙醇沉淀法分离。淀法分离。阿片样肽（阿片样肽（Opioid peptide）o具有类吗啡肽活性可与肠道上皮细胞或其具有类吗啡肽活性可与肠道上皮细胞或其它细胞的阿片样受体结合，能够镇静止痛、它细胞的阿片样受体结合，能够镇静止痛、诱导睡眠、延长胃肠蠕动和刺激胃肠激素诱导睡眠、延长胃肠蠕动和刺激

13、胃肠激素的释放，是神经活性肽的一种。的释放，是神经活性肽的一种。阿片样肽（阿片样肽（Opioid peptideOpioid peptide）o活性最强的是五肽（活性最强的是五肽（- - 酪啡肽酪啡肽-5-5），），即即Tyr-Pro-Phe-Pro-GlyTyr-Pro-Phe-Pro-Gly（位于牛乳酪蛋位于牛乳酪蛋白残基白残基60-6460-64）和）和-酪蛋白类吗啡酪蛋白类吗啡-4-4，它们的它们的C-C-末端氨基酸被酰化后活性较强，末端氨基酸被酰化后活性较强，称为称为morphiceptinmorphiceptin（- - 酪啡肽酪啡肽-4-4-酰酰氨），即氨），即Tyr-Pro-P

14、he-ProTyr-Pro-Phe-Pro。阿片样肽（阿片样肽（Opioid peptideOpioid peptide）o-酪蛋白类吗啡及酪蛋白类吗啡及- 酪啡肽酪啡肽-4-酰氨具有吗酰氨具有吗啡的一切生理作用，如镇静、嗜睡、抑制啡的一切生理作用，如镇静、嗜睡、抑制呼吸、心搏徐缓（呼吸、心搏徐缓（bradycardia)等作用。等作用。o若在预消化的婴儿乳中添加高含量的若在预消化的婴儿乳中添加高含量的-酪蛋白类吗啡和酪蛋白类吗啡和- - 酪啡肽酪啡肽-4-4-酰氨，可酰氨，可减少婴儿的啼哭，促进婴儿睡眠。减少婴儿的啼哭，促进婴儿睡眠。 名名 称称 来来 源源序列序列-酪蛋白类吗啡酪蛋白类吗啡

15、-4-4 牛牛-CN-CN 人人-CN-CN TyrTyr6060-Pro-Phe-Pro-Pro-Phe-Pro6363TyrTyr5151-Pro-Phe-Val-Pro-Phe-Val5454-酪蛋白类吗啡酪蛋白类吗啡-5-5 牛-CN-CN 人人-CN-CNTyrTyr6060-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Phe-Pro-Gly6464TyrTyr5151-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Phe-Val-Glu5555-酪蛋白类吗啡酪蛋白类吗啡-7-7 牛-CN-CN 人人-CN-CNTyrTyr6060-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Pro-Ph

16、e-Pro-Gly-Pro-Ile6666TyrTyr5151-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile5757-酪蛋白类吗啡酪蛋白类吗啡-8-8 牛-CN-CN 人人-CN-CNTyrTyr6060-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Pro-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Pro6767TyrTyr5151-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile-Pro5858-酪蛋白类吗啡酪蛋白类吗啡-9-9 牛-CN-CN 人人-CN-CNTyrTyr606

17、0-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Pro-Asn(His)-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Pro-Asn(His)6767TyrTyr5151-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr5959来自于乳蛋白质的吗啡样活性肽来自于乳蛋白质的吗啡样活性肽表1名称名称来源来源序列序列MorphiceptinMorphiceptin牛牛-CN-CNTyrTyr6060-Pro-Phe-Pro-Pro-Phe-Pro6363-CONH-CONH2 2ValmuceptinValmuce

18、ptin人人-CN-CNTyrTyr5151-Pro-Phe-Val-Pro-Phe-Val5454-CONH-CONH2 2DevalmuceptinDevalmuceptin人人-CN-CNTyrTyr6060-Pro-Phe-Asp-Pro-Phe-Asp6363-外源性吗啡外源性吗啡牛牛s1 s1 -CN-CNArgArg9090-Tye-Leu-Gly-Tyr-Ile-Glu-Tye-Leu-Gly-Tyr-Ile-Glu9696-酪蛋白吗啡酪蛋白吗啡人人-CN-CN人人-CN-CNTyrTyr4141-Pro-Ser-Phe-Pro-Ser-Phe4444TyrTyr5959-Gl

19、y-Phe-Leu-Pro-Gly-Phe-Leu-Pro6363- -乳类吗啡乳类吗啡牛牛-la-la人人-la-laTyrTyr5050-Gly-Leu-Phe-Gly-Leu-Phe6363-乳类吗啡乳类吗啡牛牛-la-laTyrTyr102102-Leu-Leu-Phe-Leu-Leu-Phe105105注：注：CNCN为酪蛋白；为酪蛋白； -la-la为为-乳白蛋白；乳白蛋白；-la-la为为- -乳球蛋白乳球蛋白续表续表 来自于乳蛋白质的吗啡样活性肽来自于乳蛋白质的吗啡样活性肽名称名称来源来源AAAA序列序列酪蛋白素酪蛋白素-4-4牛牛k -CNk -CNTyrTyr3535-Pr

20、o-Ser-Tye-Pro-Ser-Tye3838-OCH-OCH3 3酪蛋白素酪蛋白素-5-5牛牛k k CNCNArgArg3434-Tyr-Pro-Ser-Tyr-Tyr-Pro-Ser-Tyr3838-OCH-OCH3 3酪蛋白素酪蛋白素-6-6牛牛k k CNCNSerSer3434-Arg-Tyr-Pro-Ser-Tyr-Arg-Tyr-Pro-Ser-Tyr3838-OCH-OCH3 3非甲基六肽非甲基六肽牛牛k k CNCNSerSer3333-Arg-Tyr-Pro-Ser-Tyr-Arg-Tyr-Pro-Ser-Tyr3838酪蛋白素酪蛋白素A A牛牛k k CNCNTyr

21、Tyr3535-Pro-Ser-Tyr-Gly-Ile-Asn-Pro-Ser-Tyr-Gly-Ile-Asn4141酪蛋白素酪蛋白素B B牛牛k k CNCNTyrTyr5858-Pro-Tyr-Tyr-Pro-Tyr-Tyr6161TyrTyr3131-Pro-Tyr-Tyr-Pro-Tyr-Tyr3434酪蛋白素酪蛋白素C C牛牛k k CNCNTyrTyr2525-Ile-Pro-Ile-Glu-Tyr-Val-Leu-Ser-Ile-Pro-Ile-Glu-Tyr-Val-Leu-Ser-ArgArg3434乳铁蛋白素乳铁蛋白素A A人人LFLFTyr-leu-Gly-Ser-Gly

22、-Tyr-OCHTyr-leu-Gly-Ser-Gly-Tyr-OCH3 3乳铁蛋白素乳铁蛋白素B B人人LFLFArg-Tyr-Tyr-Gly-Tyr-OCHArg-Tyr-Tyr-Gly-Tyr-OCH3 3乳铁蛋白素乳铁蛋白素C C人人LFLFLys-Tyr-Leu-Gly-Pro-Gln-Tyr-OCHLys-Tyr-Leu-Gly-Pro-Gln-Tyr-OCH3 3表表2 2 来源于乳蛋白的吗啡样拮抗肽来源于乳蛋白的吗啡样拮抗肽降血压肽降血压肽（Antihypertension peptides） o人们已将牛乳酪蛋白经胰蛋白酶酶解成功地获人们已将牛乳酪蛋白经胰蛋白酶酶解成功地获得

23、降血压肽，因其又可以抑制得降血压肽，因其又可以抑制ACEACE（血管紧张素血管紧张素转换酶转换酶 ) )的活性也称的活性也称ACEACE抑制肽，并研究了它们抑制肽，并研究了它们的构效关系。的构效关系。 主要是指那些以无活性形式隐藏在酪蛋白主要是指那些以无活性形式隐藏在酪蛋白氨基酸序列中具有降血压活性的肽段，从牛乳氨基酸序列中具有降血压活性的肽段，从牛乳中发现有胰蛋白酶酶解产物中的五种降血压肽中发现有胰蛋白酶酶解产物中的五种降血压肽分别位于分别位于 s1s1- -酪蛋白中酪蛋白中23-3423-34、23-2723-27、194-194-199199与与-酪蛋白中的酪蛋白中的173-183173

24、-183、193-202193-202残基间。残基间。这些肽在这些肽在C-C-端有端有ProPro（脯氨酸）、脯氨酸）、LysLys或或ArgArg（精氨酸）残基，结构活性数据表明，精氨酸）残基，结构活性数据表明，C-C-端端ArgArg和和LysLys侧链上的胍基或侧链上的胍基或-NH-NH2 2所带的正电荷所带的正电荷对降血压肽的活性有重要影响。对降血压肽的活性有重要影响。 酪蛋白源降血压活性成分酪蛋白源降血压活性成分:酪蛋白源降血压肽活性成分酪蛋白源降血压肽活性成分名称名称来源来源AAAA序列序列CEICEI1212s1 s1 - -CNCNPhePhe2323-Phe-Val-Ala-

25、Pro-Phe-Pro_Phe-Glu-Val-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro_Phe-Glu-Val-Phe-Gly-LysPhe-Gly-Lys3434CEICEI5 5s1 s1 - -CNCNPhePhe2323-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Val-Ala-Pro2727CEI-CCEI-C5 5s1 s1 - -CNCNThrThr194194-Thr-Met-Pro-Leu-TryAla-Pro-Thr-Met-Pro-Leu-TryAla-Pro199199CEI-CEI-5 5-CN-CN AlaAla177177-Val-Pro-Tyr-Pro-G

26、ln-Arg-Val-Pro-Tyr-Pro-Gln-Arg183183-CN-CNSerSer4343-Phe-Gln-Pro-Gln-Pro-Leu-Ile-Tyr-Pro-Phe-Gln-Pro-Gln-Pro-Leu-Ile-Tyr-Pro5252k k -CN -CNVal63-Arg-Pro65Val63-Arg-Pro65CEICEI为为ACEACE抑制物抑制物ACEACE抑制肽的抑制机理抑制肽的抑制机理 （杨咏祥，1999）降血压肽的降压原理降血压肽的降压原理o降血压肽可以与降血压肽可以与ACEACE活性区域发生亲和力较活性区域发生亲和力较强的竞争性结合，而且结合后不易释放，阻

27、强的竞争性结合，而且结合后不易释放，阻碍了碍了ACEACE的作用，从而起到防治高血压的目的作用，从而起到防治高血压的目的。的。o在发酵乳制作过程中，乳酸菌的胞外蛋白酶在发酵乳制作过程中，乳酸菌的胞外蛋白酶可将乳蛋白分解成肽并释放到发酵乳中。在可将乳蛋白分解成肽并释放到发酵乳中。在乳酸菌中，植物乳杆菌具有较强的蛋白质分乳酸菌中，植物乳杆菌具有较强的蛋白质分解活性。解活性。免疫调节肽（免疫调节肽（Immunoregulatory peptidesImmunoregulatory peptides）o乳汁不仅为新生儿提供其生长的必需营养素，而乳汁不仅为新生儿提供其生长的必需营养素，而且还可提供来源于

28、母亲的一些复杂的生物因子，且还可提供来源于母亲的一些复杂的生物因子，如免疫感受细胞（如免疫感受细胞（Immunocompetent cellImmunocompetent cell）、）、酶、酶、生长因子、保护因子等，这些保护因子和细胞可生长因子、保护因子等，这些保护因子和细胞可以对新生儿直接起作用，使其能够抵抗细菌和病以对新生儿直接起作用，使其能够抵抗细菌和病毒的感染。此外，乳蛋白质进入婴儿消化道后，毒的感染。此外，乳蛋白质进入婴儿消化道后，被酶消化会产生一些具有生物活性的肽，继从牛被酶消化会产生一些具有生物活性的肽，继从牛乳消化物中发现了吗啡样肽后，人们也从乳蛋白乳消化物中发现了吗啡样肽后

29、，人们也从乳蛋白质中获得了具有免疫刺激作用的肽。质中获得了具有免疫刺激作用的肽。免疫调节肽（免疫调节肽（Immunoregulatory peptidesImmunoregulatory peptides）o不同体内和体外实验证明了免疫调节肽的生不同体内和体外实验证明了免疫调节肽的生物活性。酪蛋白的胰蛋白酶物活性。酪蛋白的胰蛋白酶- -胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶的降解产物中分离出的免疫活性肽，能激活的降解产物中分离出的免疫活性肽，能激活巨噬细胞的吞噬功能，影响淋巴细胞的增殖巨噬细胞的吞噬功能，影响淋巴细胞的增殖与分化，还可以调节对系统性疾病和食物过与分化，还可以调节对系统性疾病和食物过敏症的免疫

30、反应。敏症的免疫反应。 牛乳酪蛋白源免疫调节肽牛乳酪蛋白源免疫调节肽免疫调节肽免疫调节肽前体蛋白或片段前体蛋白或片段氨基酸序列氨基酸序列s1-Casokinkin-6s1-CN(f194-199)Thr-Thr-Met-Pro-Leu-TrpImmunopeptide-CN (f191-193)Leu-Leu-Tyr-Casokinin-10-CN (f193-202)Tyr-Gln-Gln-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-ArgImmunopeptide-CN (f63-68)Pro-Gly-Pro-Ile-Pro-Asn-Casokinkin-7-CN (f60-66)Ty

31、r-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile三肽刺激鼠腹膜巨噬细胞所需剂量为三肽刺激鼠腹膜巨噬细胞所需剂量为0.10.1mol/Lmol/L。而六肽的活性更强，而六肽的活性更强， 0.05 0.05mol/Lmol/L。其它一些具有免疫活性的物质其它一些具有免疫活性的物质oACEACE抑制物抑制物- -CEICEI。ACEACE可催化血管紧张素可催化血管紧张素2 2的活化，的活化，钝化血管舒缓激肽，血管舒缓激肽能刺激巨噬钝化血管舒缓激肽，血管舒缓激肽能刺激巨噬细胞，促进淋巴细胞的迁移，并增加淋巴细胞细胞，促进淋巴细胞的迁移，并增加淋巴细胞活素之分泌。活素之分泌。ACEACE抑制物通过这一

32、机制发挥免疫抑制物通过这一机制发挥免疫调节物的作用。调节物的作用。o吗啡肽也与免疫调节有关。吗啡肽也与免疫调节有关。抗血栓肽（抗血栓肽（Antithrombotic activity peptides）oCasoplatelins是由是由-酪蛋白酪蛋白C端的酪蛋白糖端的酪蛋白糖多肽获得，能够抑制多肽获得，能够抑制ADP诱导的血小板凝诱导的血小板凝集。集。-酪蛋白的主要抗血栓肽为酪蛋白的主要抗血栓肽为106-116（Met-Ala-Ile-Pro-Pro-Lys-Lys-Gln-Asp-Lys）以及更小的以及更小的106-112、112-116、113-116。抗菌肽（抗菌肽（Antibacte

33、rial peptideAntibacterial peptide）oLahvaLahva报道了牛乳酪蛋白的温和水解物具报道了牛乳酪蛋白的温和水解物具有抗菌特性，认为起作用的是来自有抗菌特性，认为起作用的是来自s1 s1 - -酪蛋白中酪蛋白中1-231-23氨基酸序列的肽段。氨基酸序列的肽段。o近来研究人员还发现近来研究人员还发现s2s2- -酪蛋白（酪蛋白（165-165-203203），具有抗菌性，这一片段含有高比），具有抗菌性，这一片段含有高比例的碱性氨基酸（例的碱性氨基酸（10/3910/39），能够抑制大），能够抑制大肠杆菌和葡萄球菌。肠杆菌和葡萄球菌。抗菌肽（抗菌肽（Antiba

34、cterial peptideAntibacterial peptide）o具有抗菌活性的肽可作为食品的天然防具有抗菌活性的肽可作为食品的天然防腐剂，也可作为新一代疗效性食品的功腐剂，也可作为新一代疗效性食品的功能组分，或用于胃肠疾病的治疗。能组分，或用于胃肠疾病的治疗。抗癌细胞肽（抗癌细胞肽（Anticancer peptideAnticancer peptide）o流行病学调查表明，经常饮用发酵乳的人群癌流行病学调查表明，经常饮用发酵乳的人群癌症发病率较低，其机理目前还不十分明确。乳症发病率较低，其机理目前还不十分明确。乳在发酵过程中乳酸菌胞外蛋白酶会分解乳蛋白在发酵过程中乳酸菌胞外蛋白酶

35、会分解乳蛋白产生一些活性物质，例如，产生一些活性物质，例如，RuthRuth等人利用体外等人利用体外细胞培养模型发现，酸奶发酵剂对酪蛋白分解细胞培养模型发现，酸奶发酵剂对酪蛋白分解产生的肽类物质会影响直肠细胞生长的动力学，产生的肽类物质会影响直肠细胞生长的动力学，这可能是发酵乳能够降低直肠发病率的一个原这可能是发酵乳能够降低直肠发病率的一个原因。因。促进双歧杆菌生长的肽促进双歧杆菌生长的肽o婴儿肠道中双歧杆菌的生长、定植对维持其婴儿肠道中双歧杆菌的生长、定植对维持其健康十分重要。健康十分重要。Bezkorovainy Bezkorovainy 等人从人乳等人从人乳蛋白中分离出的糖肽可促进两歧杆

36、菌生长，蛋白中分离出的糖肽可促进两歧杆菌生长，来自牛乳来自牛乳- -酪蛋白酪蛋白C-C-末端的糖聚大肽亦有末端的糖聚大肽亦有此供效，此供效，-酪蛋白糖肽可抑制胃酸和促胃酪蛋白糖肽可抑制胃酸和促胃酸激素的分泌，还可抑制蛋白酶的活性。酸激素的分泌，还可抑制蛋白酶的活性。酪蛋白功能研究技术路线酪蛋白功能研究技术路线分子量分布分子量分布 理化特性分析理化特性分析 免疫活性测定免疫活性测定抑菌活性测定抑菌活性测定超滤处理超滤处理酶解混合物酶解混合物 分离组分分离组分免疫活性测定免疫活性测定抑菌活性测定抑菌活性测定冷冻干燥冷冻干燥凝胶过滤层析凝胶过滤层析酪蛋白酪蛋白今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向今后酪蛋

37、白源生物活性肽的研究方向 o（1 1）酪蛋白酶解产物可以作为营养和生理活性）酪蛋白酶解产物可以作为营养和生理活性物质的来源，然而对于大多数生理活性肽来说物质的来源，然而对于大多数生理活性肽来说 ，尽管大量体外实验证明活性及作用方式，但是尽管大量体外实验证明活性及作用方式，但是仍没有明确的证据表明这些物质在人体内的重仍没有明确的证据表明这些物质在人体内的重要性。直到目前为止，只有酪蛋白磷酸肽被证要性。直到目前为止，只有酪蛋白磷酸肽被证实为人体内的消化产物。因此我们还要继续明实为人体内的消化产物。因此我们还要继续明确生理活性肽的功能特性，为其广泛应用打下确生理活性肽的功能特性，为其广泛应用打下坚实

38、的理论基础。坚实的理论基础。o（2 2）人们对于生物活性肽最关注的是它）人们对于生物活性肽最关注的是它们的活性与作用剂量，所以，我们要针们的活性与作用剂量，所以，我们要针对所需酶解产物建立相应的检测定方法，对所需酶解产物建立相应的检测定方法，以便在整个生产流程中可以灵敏、简单、以便在整个生产流程中可以灵敏、简单、快捷地进行定时检测，同时，这种检测快捷地进行定时检测，同时，这种检测方法也对各酶解条件的选择和分离方法方法也对各酶解条件的选择和分离方法的建立起决定性作用。的建立起决定性作用。今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向 今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向今后酪蛋白源

39、生物活性肽的研究方向o（3 3）酪蛋白在特定的条件下进行酶解，）酪蛋白在特定的条件下进行酶解，其产物也是多种多样，在得到所需的肽其产物也是多种多样，在得到所需的肽段后，剩余产物的提取利用也需要进行段后，剩余产物的提取利用也需要进行综合考虑，以免浪费原料。综合考虑，以免浪费原料。今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向o（4 4）一般情况下，所得目标产物仅为酪蛋）一般情况下，所得目标产物仅为酪蛋白自重的百分之几或千分之几，含量之低使白自重的百分之几或千分之几，含量之低使得常规的分离方法无用武之地，而近年来发得常规的分离方法无用武之地，而近年来发展起来的现代分离技术，如离子交换法、凝展起来的现代分离技术，如离子交换法、凝胶过滤法、膜分离法、双水相萃取法，则是胶过滤法、膜分离法、双水相萃取法，则是探寻生物活性肽简便、有效的分离方法的基探寻生物活性肽简便、有效的分离方法的基础，也是决定产品走向市场的关键。础，也是决定产品走向市场的关键。今后酪蛋白源生物活性肽的研究方向今后酪蛋白