尼古丁对舌鳞状细胞癌增殖迁移及侵袭的作用和初步机制研究

1、尼古丁对舌鳞状细胞癌增殖、迁移及侵袭的作用和初步机制研究舌鳞状细胞癌TSCC是头颈部最常见的癌症之一 1,有文献报道，2021年在美国新发的舌鳞状细胞癌为14320例，死亡2190例。TSCC会严重影响患者的 咀 嚼、语言、外貌等功能，经过手术放化疗等综合治疗,TSCC患者的五年生存率 仍只有 50? 70%有研究说明，吸烟为舌癌的重要危险因素之一，烟草滥用与TSCC勺高发生率 有关。然而,吸烟对舌癌发生的影响及机制却仍不清楚。已有文献报道烟草中的尼古丁能促进肺癌及食道癌细胞的增殖及侵袭。但目前仍少有关于尼古丁对于TSCC影响的研究。所以，我们拟探索烟草中的尼古丁对于 TSCC勺作用及初步机制

2、。Wnt信号通路 被证明与各种肿瘤发生、开展及转移相关。其中经典的Wnt/ B -catenin信号通路与肿瘤细胞的增殖分化相关，而非经 典的 Wnt/PCP信号通路与肿瘤细胞的极性及迁移相关。有研究发现 ，在舌癌标本 中Wnt 信号多个关键蛋白表达量升高，且与患者的生存率、转移及复发等预后密 切相关。然而作为危险因素的吸烟与TSCC中Wnt信号通路的异常激活是否有相关性仍 研究较少。研究的目的如下：1检测在33例舌鳞状细胞癌TSCC中,吸烟与TSCC 标本中Wnt信号关键蛋白表达的相关性。2检测烟草中的尼古丁在体外对舌鳞状癌细胞系 Cal27增殖迁移、侵袭能力的 影响及其初步机制。第一局部吸

3、烟与舌癌标本 Wnt信号通路关键蛋白表达的相关性目 的：检测在33例舌鳞状细胞癌TSCC中,吸烟与Wnt信号通路关键蛋白表 达Wnt5a、Ror2、B -catenin、c-jun的相关性。方法:采用免疫组织化学染色技术，检测33例舌鳞状细胞癌（TSCC）中Wnt信 号 蛋白的表达情况，统计学分析与吸烟的相关性。结果 ：IHC染色显示，吸烟患者 的肿瘤 组织中的 Wnt5a(IRS = 5.58 ±2.32)和 Ror2(IRS = 6.05 ±2.13)明显高 于非吸烟者 的 Wnt5a(IRS = 3.53 ±2.17)和 Ror2(IRS = 4.33 &#

4、177;2.02),且都具有 统计学意义，(p =0.013 和 p = 0.019)。在吸烟组中,有89.47%的患者有B -catenin异常表达 , 但在非吸烟组只有53.33%(p = 0.018)。另夕卜c-jun的表达与吸烟史无显着相关性(IRS = 4.53 ± 2.01vs.IRS = 4.00 ± 1.89,p = 0.442)。结论:TSCC标本中Wnt信号通路的关键蛋白 B -catenin,Wnt5和Ror2的表达 升高可能与吸烟有关，吸烟患者TSCC中Wnt信号通路可能存在异常激活。第二部 分尼古丁诱导舌鳞状细胞系 Cal27增殖、迁移、侵袭及 W

5、nt通路激活目的：检测尼古丁在体外对Cal27增殖、迁移及侵袭能力的作用和对Wnt信号关键蛋白的影 响。方法:根据培养基中尼古丁浓度不同分为四组：对照组(DMSO&)、低浓度组(0.1uM)、中浓度组(1 uM)、高浓度组(10 uM) o (1)以舌鳞癌细胞系Cal27为研 究对像采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测 B -catenin、c-Myc、E-cadherin、 p-GSK3b Ror2、Wnt5a和c-jun的表达;(2)TOP/FOP荧光素报告系统，检测B -catenin下游转录因子TCF的转录活性变化；(3)免疫荧光染色(IF)检测B -catenin

6、在细胞水平定位的变化；(4)CCK8细胞增殖实验检测尼古丁对舌鳞癌细胞系增殖能力的影响;(5)克隆形成实验检测尼古丁对舌鳞癌细胞系增殖能力的影响;(6)划痕实验检测尼古丁对舌鳞癌细胞系迁移速度的影响。(7)Transwell小室细胞侵袭实验检测尼古丁对舌鳞癌细胞系侵袭能力的影响；(8)利用尼古丁受体a 7 nAChR勺特异性抑制剂a -BTX,明确尼古丁促进Cal27增殖、侵袭的影响及对 Wnt信号蛋白的影响是否通过尼古丁受体。结果 ：尼古丁在体外能够浓度依赖性地促进 Wnt/ B -catenin和Wnt/PCp言号通路的激活；尼古 丁能够显著提高Cal27的增殖活性)加快Cal27的迁移)增加Cal27的侵袭能力；上述作用需要尼古丁与尼古丁受