HPLC仪器实践中具有实际使用价值的100个问题（五）

1、hplc仪器实践中具有实际使用价值的100个问题（五） 41. hplc中产生色谱峰扩展的主要因素是什么？如何削减谱带扩张？ 答：hplc中引起色谱峰扩展的主要因素是涡流蔓延、流淌相的流速过小、柱外效应等。在hplc中，要减小色谱峰扩展或削减峰变形，可以采纳提高柱效、增强流淌相的流速、采纳提高检测器敏捷度的量程等方法。还可以用削减填料颗粒直径，减小填料孔穴深度，提高装填的匀称性，采纳低黏度溶剂作流淌相。流淌相的流速尽可能低，同时要尽可能采纳死体积较小的进样器、检测器(流淌池)、接头和传输管线等。 42. hplc的流淌相为什么要预先脱气？常用的脱气办法有哪几种？ 答：hplc的流淌相中溶解气体

2、后，存在以下几个方面的害处：气泡进入检测器，引起光汲取变幻(电信号的变幻)，基线骤然跳跃，出异样峰、干扰检测正常工作；溶解在溶剂中的气体进入色谱柱时，可能与流淌相或固定相发生化学反应；溶解气体还会引起某些样品的氧化降解，给分别和分析结果带来误差，严峻时还会引起色谱柱损坏。因此，用法前必需对流淌相举行脱气处理。 常用的脱气法有以下几种：加热脱气法；抽吸脱气法；吹氦脱气法；超声波振荡脱气法。最常用、最容易的是抽吸脱气法和超声波振荡脱气法。 43. hplc的色谱柱有哪几种类型？细径柱有什么优点？ 答：hplc色谱柱大致可分为三种类型：内径小于2mm的称为细管径或微管径柱；内径在25mm范围内的是常

3、规高效液相色谱柱；内径大于5mm的普通称为半制备柱或制备柱。细管径柱的主要优点是：分别效能高；流淌相最佳流速低，消耗量少；可采纳多种检测器，便于联用(lc-ms, lgftir等)；采纳细而短的毛细管柱可以提高分析速度，实现迅速分析。 44对 hplc的流淌相有哪些基本要求？ 答：用作液相色谱流淌相的溶剂，其纯度和化学特性必需满足色谱过程中稳定性和重复性的要求。对样品要有一定的溶解能力，黏度小，化学稳定性好，避开发生不行逆的化学吸附。溶剂应与检测器相匹配，不干涉所用法检测器的工作，制备色谱的溶剂应不干扰对分别各组分的回收。除此以外，挑选的溶剂要对所给定的样品组分具有合适的极性和良好的挑选性，还

4、要具有合适的ph。 概括起来说，我们平日用作hplc流淌相的溶剂，普通起码应当有以下五个基本特点：价格比较廉价，最好毒性较小；其纯度和化学特性必需满足色谱过程中稳定性和重复性的要求；对样品要有一定的溶解能力，并且黏度要小，化学稳定性要好，避开发生不行逆的化学吸附；溶剂应与检测器相匹配，不干涉所用法检测器的工作，制备色谱的溶剂应不干扰对分别各组分的回收；挑选的溶剂对所给定的样品组分具有合适的极性和良好的挑选性。 45在硅胶柱上，用甲苯做流淌相，某组分的保留时光为30min；假如改用四氯化碳或乙醚做流淌相，哪一种溶剂可以削减该组分的保留时光？为什么？ 答：该体系是一种正向色谱体系。在该体系中流淌相

5、的极性增大时，保留时光的值会减小，而流淌相甲苯、和的溶剂强度参数分离是0.29、0.18、0.38,因此，选用溶剂强度参数大于甲苯的，可缩短该化合物的保留时光；但是详细能缩短多少保留时光，还应当考虑流淌相的流速等因素。 46在hplc中，组分和溶剂分子之间存在哪几种作用力？ 答：色谱理论告知我们：在hplc中，组分和溶剂之间存在色散力作用、偶极作用、氢键作用和介电作用等四种作用力。 47什么是溶剂极性参数与溶剂强度？它们之间的关系如何？ 答：我们把溶剂分子与溶质分子以色散力、偶极作用力、氢键作用力及介电作用力四种方式举行互相作用的能力称为分子的“极性”。溶剂的这种互相作用的能力以溶剂极性参数表

6、示，溶剂极性参数值越大，溶剂的极性就越强。 溶剂强度是指用作流淌相的溶剂将组分从色谱柱上洗脱下来的能力，溶剂强度与溶剂的极性挺直相关，而且随不同色谱体系转变。普通来讲，在正相色谱体系中，溶剂极性(p')增强，使组分从柱上洗脱下来的能力增强，即溶剂极性参数(p')越大的溶剂，溶剂强度越大。在反相色谱中，溶剂极性减小，使组分从柱上洗脱下来的能力增强，即溶剂极性参数(p')越小的溶剂，溶剂强度越大。 48在正相色谱与反相色谱体系中，普通组分的出峰次序如何？ 答：流淌相的极性比固定相的极性强的色谱体系叫反相色谱，例如以十八烷基硅胶键合相(ods)为固定相，以/水作流淌相，是典型

7、的反相色谱。流淌相的极性比固定相的极性弱的色谱体系叫正相色谱。在正相色谱体系中组分的出峰次序为：极性弱的组分，在流淌相中溶解度较大，因此分配系数k值小，先出峰。极性强的组分，在固定相中的溶解度较大，因此分配系数k值大，后出峰。 在反相色谱中组分的出峰次序为：极性弱的组分在固定相上的溶解度大，分配系数k值大，后出峰，相反极性强的组分在流淌相中溶解度大，k值小，所以先出峰。 49在ods固定相上，以甲醇为流淌相。某组分的分配容量k=1.2，如以为流淌相，其k增强还是削减？为什么？ 答：在ods固定相上，如将以为流淌相改为为流淌相，其k值绝对是增强了。由于在反相色谱体系中，流淌相由变为乙腈，溶剂极性参数由5.1变为5.8；但组分在流淌相中的溶解度反而减小，所以k值增大了，由1.2增大为2.24。 50什么叫离子色谱？ 答：在低交换容量的分别柱上分别样品离子，而在高