如何看反应曲线

1、如何看反应曲线BS-300 的反应曲线是BS-300 的一大亮点。通过曲线和反应数据，给我们的工程师和用户一个完整的反应过程，这对我们发现和解决问题提供了一个极好的线索，几乎所有与结果有关的故障，我们都可以在反应曲线上找到原因。下面我就讲述一些观察反应曲线的基本方法，在此基础上，大家再仔细的研究试剂说明书和实际的故障情况，在短期内一定会有大的提高。下图是一个R GT 测试，双试剂的反应曲线，以此为例，我们来说明反应曲线的几个重点。上图所示的反应曲线涵盖了我们需要的大部分测试过程。1.1 反应曲线的纵轴为吸光度。1.1.1 注意这里的数值是真正的吸光度乘以10000。上图中吸光度为6500 的实

2、际吸光度应该是0.65A 。1.1.2 反应曲线的纵轴间隔是不固定的。所以仅仅从反应曲线我们无法确认吸光度的波动是否超限，必须配合相应的反应数据才能确认。1.2 反应曲线的横轴为测量周期。BS-300 的测量周期为12 秒。1.3 我们把一个正常的双试剂反应曲线分为6 个部分，如图中所示：A、加入R1（试剂1）;B、R1 升温；C 、加入 S （样本）；D 、 S+R1 孵育时间；E、加入R2（试剂2）;F、反应开始直到结束。单试剂的测试只是少了D 、 E 两步，所以不再单独说明。下面我们就这六个过程（点）进行描述：反应曲线测试周期为0 的一点为杯空白，在A 点，即第1 个测试周期，试剂1 加

3、入反应杯中，这一点的吸光度应该为试剂1 的试剂空白。这一点必然和杯空白有不同。针对不同的试剂，A 点的吸光度会有不同，我们要认真阅读试剂说明书。例如ALT 的第一试剂中含有主要的吸光物质NADH ,而试剂说明书中对试剂空白的要求是必须大于1.0，这就决定了A 点的吸光度在图中的纵轴应该在10000以上，常见的应该在17000 到20000 之间；而R GT 的第一试剂中并不含任何主要的吸光物质，试剂说明书当中对试剂空白的要求是小于0.7 ，所以上图中的-800 左右是正常的。如果一旦出现吸光度大于7000，可以考虑试剂失效；另一方面，大部分设备的吸光度检测范围都不超过2.5 ，如果A点的吸光度

4、达到了 50000以上（唯一例外的是 CO2的试剂），要考虑是否有可能在反应 杯中出现了污染物或者气泡。此时取出相应的反应杯进行肉眼观察是最好的办法。1.3.2 B 、 R1 升温：试剂一在升温的过程中吸光度应该是没有什么变化的，其中某些试剂在此过程中吸光度会缓慢上升共计200（ 0.02A ）左右也是有的，但是连续的两个检测周期吸光度的波动范围正常的是20 以内。如果远远超过这个限制，比如100 以上，我们要考虑：a） 反应杯中有干扰因素：常见的是气泡或杯子不干净。可以通过肉眼观察进行验证。同时这种波动也局限于个别杯子中，其他大部分杯子会是好的。b） 光电采集时间和光路配合不好：常见的是光电

5、采集位置参数变化或反应盘转动不稳定。这种波动会在几乎所有的杯子中出现，而且波动的程度也相对较大。c） 光路本身不稳定：常见原因是光源灯老化。光源灯使用2000 小时以上便无法再保证性能。可以通过更换光源灯进行确认。1.3.3 C 、加入 S （样本）：在加入样本的一瞬间，由于样本本身是有颜色的，必然导致这一点吸光度的上升。根据样本颜色的深浅，这一点的吸光度会比之前一点（加入样本之前）升高200 到 1000，唯一的例外是我们用蒸馏水作样本的时候，吸光度会下降200 左右。如果我们在反应曲线或者反应数据中可以清楚的观察到这一点的吸光度变化，我们就可以确认样本是加进反应杯中了。同时比较重复性测试的

6、几个相同测试的反应曲线变化值，我们就可以大致确认样本的加入量是否一致。样本加入出现的问题一般是由于样本针甩样、样本针液面检测故障、液路泄漏、样本注射器位置不固定导致的。1.3.4 D 、S+R1孵育时间:这段时间里，样本和试剂一在37 度的环境下会进行孵育的反应，从而吸光度会有一些变化，根据项目的不同，变化的情况会不一样，但是基本上变化的程度都不大，而且这段的反应曲线应该是平稳的或者是连续变化的。如果出现明显的波动（相邻的采样周期吸光度波动超过50 ），要考虑是否搅拌杆有打杯的情况。1.3.5 E 、加入 R2 （试剂 2）:加入试剂2 的瞬间，理论上这一刻的吸光度应该是双试剂试剂空白+样本空

7、白的吸光度的和，但是由于 BS300的检测时间和加入试剂的时间有一定的延迟，导致吸光度偏离我 们的理论值。尽管有一定的偏差，这一刻的吸光度应该依然会有一个合理的变化。比如ALT 是一个下降的反应，第二试剂中没有 NADH ,而总体积变大，所以在加入第二试剂这一刻，吸光 度应该比D段有一个明显的下降；而 R GT是一个上升的反应，第二试剂中的有效成分 会导致吸光度一个明显的上升，但是总的吸光度应该在试剂空白（0.7 ）附近，如上图的E点为 6500 左右。如果E 点没有吸光度的变化，我们可以考虑第二试剂是否没有加入。如果E 点的吸光度变化太大，比如升到50000 以上，我们必须考虑是否有可能是试

8、剂加入过程中产生了气泡或者有污染物带入。当然，搅拌杆打杯也会导致类似的情况。1.3.6 F ：反应开始直到结束：这时的曲线变化完全取决于当前测试的方法。终点法、动力学法、固定时间法都应该符合各自典型的反应曲线，同时要注意说明书中对反应上升和下降的描述。如果出现与预期的方法学和反应方向完全不匹配的反应曲线，我们要考虑是否试剂失效、试剂摆放错误、对试剂说明书解读错误。这一段反应曲线是生化仪获得反应度并计算出浓度的基础，如果这段反应曲线出现不正常的波动，常常会导致结果的错误。a） 反应度不足：比如葡萄糖的测试，作为终点法，F 段最后一点的吸光度和 D 段后端的吸光度的差值就是我们要测量的反应度。5.55g/l 的反应度应该在0.3A这个数量级，从反应曲线上看吸光度的变化量应该在3000 以上，如果出现反应度在不同的数量级，比如500 或者20000，都应该考虑是否试剂失效或其他异常情况。b） 反应曲线波动：稳定状态的反应曲线的波动应该不会大于20，由于不同的试剂配方和反应的不尽相同，很难给出一个确定的值来界定波动的范围。但是一般测试的波动如果大于100，就很有可能会有问题。例如搅拌杆打杯、气泡等等。同时，由于各个测试的反应度不同，吸光度的波动对测试的影响就不尽相同。比如搅拌杆打杯引起的吸光度波动一般在50 到 300 之间，对于葡萄