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文档简介

1、n电泳电泳 (electrophoresis) 基本原理：基本原理：层析由层析由流动相流动相和和固定相固定相组成组成样品作为流动样品作为流动相流过固定相相流过固定相各组分在两相中各组分在两相中分布程度不同分布程度不同各成分各成分迁移迁移率不同率不同分离分离 凝胶过滤层析凝胶过滤层析 (分子排阻层析分子排阻层析 、分子筛层析、分子筛层析 ） （Gel-filtration chromatography）n根据根据蛋白质分子大小不同蛋白质分子大小不同来分离纯化蛋白来分离纯化蛋白质的一种方法。质的一种方法。n介质：介质：凝胶颗粒凝胶颗粒（多孔的网状结构）（多孔的网状结构） 交联度或孔度（网孔大小）交

2、联度或孔度（网孔大小）凝胶的分级凝胶的分级分离范围分离范围n交联葡聚糖交联葡聚糖Sephadex G-50（1500-30000）n琼脂糖琼脂糖 Sepharose或或Bio-Gel An聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺Bio-Gel P原理：原理：n根据蛋白质根据蛋白质所带电荷的不同所带电荷的不同进行分离纯化。进行分离纯化。n介质：介质：离子交换树脂离子交换树脂n溶液中的离子与树脂上的带电基团进行交换反应；溶液中的离子与树脂上的带电基团进行交换反应；n各种离子交换能力不同，与树脂结合的牢固程度就各种离子交换能力不同，与树脂结合的牢固程度就不同；不同；n在洗脱过程中，各种离子迁移率不同，达到分离的在洗脱过程中，各种离子迁移率不同，达到分离的目的。目的。 蛋白质蛋白质 配体配体 蛋白质配体复合物蛋白质配体复合物 高效液相层析高效液相层析（High-Performance liquid chromatography , HPLC）电泳仪电泳仪水平电泳槽水平电泳槽垂直电泳槽垂直电泳槽+凝胶凝胶加样加样迁移率主要取决于蛋白质相对分子量迁移率主要取决于蛋白质相对分子量迁移率迁移率电泳时，每种蛋白迁移至电泳时，每种蛋白迁移至与它的与它的pI相一致的相一致的pH处处加入加入蛋白样品蛋白样品电场作用下在凝胶中建电场作用下在凝胶中建立稳定的一个立稳定的一个pH梯度梯度pI降低降低分子

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