实验酵母菌观察及计数

1、一、目的要求v1.1.观察酵母菌的形态特征及出芽生殖方式，学习区分观察酵母菌的形态特征及出芽生殖方式，学习区分 酵母菌死活细胞的实验方法。酵母菌死活细胞的实验方法。v2.2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。v3.3.明确血细胞计数板计数的原理，并掌握用其进行微明确血细胞计数板计数的原理，并掌握用其进行微 生物计数的方法。生物计数的方法。二、基本原理-形态观察v 酵母菌是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形，细胞大酵母菌是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形，细胞大小约为小约为1515mm530530mm，多数以出芽方式进行无性繁殖，多数以出芽方式进行

2、无性繁殖，有性繁殖是通过子囊孢子的方式进行。有性繁殖是通过子囊孢子的方式进行。v美蓝染液的氧化型为蓝色，还原美蓝染液的氧化型为蓝色，还原型为无色。由于酵母细胞的新陈型为无色。由于酵母细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而死细胞或变为无色的还原型，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。色或淡蓝色。如何鉴定死活细胞如何鉴定死活细胞二、基本原理-计数v 用血细胞计数板计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是用血细胞计数板计数是一种常用的微生物计数方法。该计

3、数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格框共分横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格框共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。为九个大方格，中间的大方格即为计数室。v 计数室的刻度有两种规格：计数室的刻度有两种规格：2525x16x16；16x25 16x25 。计数室的容积为计数室的容积为0.10.1mmmm3 3（万分之一毫升）万分之一毫升） 。计数时，先数五个中方格的总菌数，求。计数时，先数五个中方格的总菌数，求得每个中方格的平均值

4、，再乘以得每个中方格的平均值，再乘以2525或或1616，得出大方格的总菌数，再，得出大方格的总菌数，再换算成换算成1 1mlml菌液中的总菌数。菌液中的总菌数。三、器材v1.1.菌种菌种 酿酒酵母酿酒酵母 （Saccharomyces cerevisiae)平板菌落及菌悬液平板菌落及菌悬液 v2.2.溶液或试剂溶液或试剂 吕氏碱性美蓝染液吕氏碱性美蓝染液 v3.3.仪器及用具仪器及用具 显微镜显微镜 血细胞计数板血细胞计数板 无菌毛细滴管无菌毛细滴管 载玻片载玻片 盖玻片盖玻片 双层瓶双层瓶 擦镜纸擦镜纸 四、操作步骤（一）酵母菌形态观察（一）酵母菌形态观察v1. 1. 在载玻片中央滴一滴在

5、载玻片中央滴一滴0.1%0.1%吕氏碱性美蓝染液吕氏碱性美蓝染液 ，然后按无，然后按无 菌操作挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。菌操作挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。v2. 2. 用镊子取一盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将用镊子取一盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将 盖玻片放下使其盖在菌液上。盖玻片放下使其盖在菌液上。v3. 3. 将制片放置约将制片放置约3 3minmin后镜检，先用后镜检，先用1010X X，再用再用4040X X观察酵观察酵 母的出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。母的出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。v 4. 4. 染色约染色约0.50.5h h后

6、再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。（二）血细胞计数板计数（二）血细胞计数板计数v1. 1. 菌悬液的制备菌悬液的制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 v2.2.镜检镜检 在加样前，先对计数室进行镜检。在加样前，先对计数室进行镜检。v3.3.加样品加样品 计数板上盖上盖玻片，用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬计数板上盖上盖玻片，用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。自动进入计数室。 v4. 4

7、. 显微镜计数显微镜计数 加样后静止加样后静止5min，先用先用10X观察，再用观察，再用40X进行计数。进行计数。 a. 光线的强弱适当；光线的强弱适当； b. 一般样品稀释度要求每小格内约有一般样品稀释度要求每小格内约有510个菌体；个菌体； c. 每个计数室选每个计数室选5个中格中的菌体进行计数，位于格线上的个中格中的菌体进行计数，位于格线上的 菌体一般只数上方和右边线的；菌体一般只数上方和右边线的； d. 芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数；芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数； e. 从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5. 清洗清洗 使用完毕后，将计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用