生物化学实验教学大纲

1、湖北大学生物化学实验（课程代码）实验教学大纲（第2版）生命科学学院生化教研室2010年7月课程名称：生物化学实验学时：64>适用专业：生物科学、生物技术、生物工程 课程性质：必修一、实验课程简介生物化学实验课程是生命科学本科实验教学的一个重要组成部分，实验性质有基础性、综 合性、设计（创新）性三层次，实验项目数共25个，按照学时要求完成必做与选做实验。在实 验过程中要求学生自己动手，独立观察并完成实验报告，注重培养学生创新思维与能力。二、课程目的通过实验教学可以加强学生对生物化学基本知识和基本理论的理解，掌握现代生物科学与 技术的实验原理与技能；同时，通过实验培养学生独立观察、思考和分析

2、问题、解决问题和提 出问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度，提高学生的科学素养以及敢于创新的开 拓精神。三、考核方式及成绩评定标准生物化学实验课程考核采用笔试与操作能力二种方式：期末成绩评定标准为：平时成绩60%：笔试10%：操作能力30% o四、实验指导书及主要参考书1.陈均辉等，生物化学实验科学出版社，2003年4月第三版2,蒋立科等，生物化学实验设计与实践高等教育出版社，2007年10月第1版五、实验项目实验项目一览表序号实验项目名称实验类型实验学时必做/选做实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应与甲醛 滴定法测定负基氮验证性3必做实验二皴基酸的分离鉴定一一纸层析法验证性3必做实验三醋酸

3、纤维薄膜电泳分离血清蛋白验证性3 必做实验四双缩眼法测定蛋白质浓度验证性3必做实验五酪蛋白的制备与定量测定综合性4必做实验六影响酶促反应的因素验证性3必做实验七枯草杆菌蛋白酶活力的测定验证性3必做实验八米氏常数的测定验证性3选做实验九维生素c的定量测定验证性3必做实验十核黄素的荧光光度定量测定验证性3必做实验H-植物组织中蔗糖酶的提取与酶活力综合性5嬴实验十二紫外分光光度法测定核酸含量验证性3选做实验十三腺甘三磷酸的测定（电泳法）验证性3选做实验十四酵母核糖核酸的提取、鉴定与定量 分析综合性5必做5实验十五糖的旋光性和变旋现象验证性3必做实验十六还原糖的测定一3, 5-二硝基水杨酸 法验证性3

4、必做实验十七脂肪酸的B 一氧化作用验证性3必做实验十八A大豆中粗脂肪含量测定和组分分析综合性5选做实验十九卵磷脂的提取、鉴定与定量测定综合性5>必做实验二十阳离子交换树脂摄取氯化钠验证性3必做实验二十一离子交换柱层析法分离缎基酸4必做实验二十二发酵过程中无机磷的利用综合性4必做>实验二十三乳酸脱氢酶活力测定综合性4选做实验二十四凝胶过滤法测定蛋白质分子量综合性4选做实验二十五脂蛋白的分离与鉴定一琼脂糖电泳综合性4选做合计64实验类型：演示性、验证性、综合性、设计性、其它实验一 蛋白质及氨基酸呈色反应与甲醛滴定法测定氨基氮（3课时） 实验类型：验证性实验目的：学习几种常用的鉴定蛋白质

5、与亚基酸的方法，掌握甲醛滴定法测定皴基酸含量的原理和操作要 点0实验内容：1、葡三酮反应：（1）取两支试管分别加入蛋白质和氨基酸溶液1ml,再各加荀三胴水溶液，混匀，沸水浴加热 l-2min,观察颜色由粉色变紫红再变蓝。（2）在一小块滤纸上滴上一滴Gly溶液，风干后，再在原处滴上一滴的印三酮乙醉溶液，在 微火旁烘干显色，观察紫红斑点的出现。2、黄色反应：向7个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微 火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。管号1234567）材料 （滴）鸡蛋清 溶液4大豆 提取液4指甲 少许） 头发

6、少许% 苯酚4%色氨酸4%酪氨酸4%浓硝酸（滴）2440404443、甲醛滴定（1）标准Gly溶液的滴定。（2）计算：Gly级基氮的回收率=实际测得量/加入理论值xlOO%4、未知浓度Gly溶液的滴定皴基氮（mg/ml） = （V 未一VQ xNnsohx实验要求：要求仔细观察并记录实验现象，如颜色等变化，分析实验结果。实验二 氨基酸的分离鉴定一一纸层析法（3课时）实验类型：验证性实验目的：学习分配层析的原理：掌握氨基酸纸层析法的操作技术要点：以及氨基酸的呈色反应原理。实验内容：1、平衡：将展层剂置于层析缸中进行平衡。2、标记：取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2-3cm处用铅笔划一直线，在此直

7、线上, 每隔2 - 3cm做一记号（点样点）。3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，干后在原来点样位置再点一 次（可用吹风机吹干，但要控制温度不能太高）。注意，每点的扩散直径不能超过3mm。4、展层：用线将滤纸缝成筒状（用透明胶粘也可以），注意滤纸的两边不能接触。缝好后, 将滤纸直立于层析缸中。（点样端在下，展层剂的液面需低于点样线）待溶剂上升15cm左右 （约40min）,取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，吹风机吹干。5、显色：用喷雾器均匀喷上荀三酮显色液（要离开滤纸一定距离且要直立喷洒，显色液 在滤纸上不能成柱状流下）；热风吹干，可见显色的各层析斑点。6、计算：计用直尺量出

8、原点到溶剂前沿及各层析点中心的距离，分别计算Rf值：并通过 比较单种级基酸样品与混合液中氨基酸的Rf值，指出相对应的氨基酸。实验要求：要求仔细观察并记录实验现象，计算并分析实验结果。实验三 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白（3课时）实验类型：验证性实验目的：学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，掌握电泳技术的原理。实验内容：1、浸泡：用木筷取醋酸纤维素薄膜，识别光泽面和非光泽而，并做记号，放在缓冲液中浸 泡 20 min。2、点样：用木筷取出膜条（不能用手接触），夹在两层滤纸之间，轻轻按一下，吸干膜表 面水分，膜无光泽而向上平铺在玻璃板上，点样器蘸取少许血清在距膜条一端2-3cm处点样。3、电泳：将膜条平悬

9、于电泳槽支架的滤纸桥上，点样面朝下，点样端靠近负极，盖严电泳 室,通电，调节电压为160V,电泳25min.4、染色：用木筷取出膜条，浸泡于染色液中约10mino5、漂洗：染色后，在浸泡于漂洗液中，漂洗2 3次，洗至无蛋白区底色脱净为止。实验要求：要求仔细观察并记录实验现象，计算并分析实验结果。实验四 双缩胭法测定蛋白质浓度（3课时）实验类型：验证性实验目的：学习并掌握双缩脉法测定蛋白质含量的原理与方法及标准曲线的绘制。实验内容：1、绘制标准曲线管号012345标准蛋白液/ml1蛋白质浓度（mg/ml）246810蒸储水/ml10双缩腺试剂/mlI 444444充分混匀，室温（2025）下放置

10、30minA5402、样品测定管号01样品液/ml蒸馀水/ml11双缩眼试剂/ml44充分混匀，室温（2025）下放置30minA 5403、计算 ¥样品中蛋白质含量（g/100ml） =YxN/VxlO-3xlOO丫为从标准曲线上查得的蛋白质浓度（mg/ml）,N为稀释倍数，V为样品体积（ml）实验要求：定量实验要求正确使用移液管准确加量，计算并分析实验结果。实验五 酪蛋白的制备与紫外定量分析（4课时）实验类型：综合性实验目的：1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法：2、掌握酪蛋白紫外分光光度法定量分析原理与方法实验内容：1、酪蛋白的制备（1）制备酪蛋白粗制品：将一定量牛奶与的醋酸

11、缓冲液加热至40。调pH至。将上 述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。取沉淀，得酪蛋白粗制品。（2）多次水洗沉淀并离心15分钟（3000r/min）,弃上清。（3）有机溶剂洗沉淀：分别用一定量乙醉洗沉淀，布氏漏斗中抽滤。用乙醇重复洗一 次后改用乙股洗沉淀并抽干。风干，可得酪蛋白纯品。（4）称重并计算含量和得率。含量：酪蛋白g/100 ml牛乳得率：测得含量/理论含量xlOO%理论含量为3.5 g/100 ml牛乳2、酪蛋白的定量测定采用紫外分光光度法，波长280nm,读取吸光度。以标准蛋白浓度为参照。实验要求：要求掌握提取蛋白质的原理和方法；学习紫外分光光度计的基本原理和使

12、用方法，计算 并分析实验结果。实验六 影响酶促反应的因素（3课时）实验类型：验证性实验目的：加深对酶的性质以及影响酶活因素的认识和理解实验内容：1、温度对酶活力的影响取三支试管，编号后按下表加入试剂：管号123淀粉溶液（ml） 稀释唾液（ml） 煮沸过的稀释唾液111摇匀后，将1，3号两试管放入37恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后取 出（将2号管内液体分为两半），用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉 酶水解的程度。2号管剩下的一半溶液放入37水浴中继续保温lOmin后，再用碘液实验2、唾液淀粉睡的活化和抑制管号1234%淀粉溶液（ml）稀释唾液（ml）?1%硫酸铜溶液

13、（ml）1%氯化钠溶液（ml）1%硫酸钠溶液（ml）*蒸馀水（ml）37恒温水浴，保温lOmin碘化钾一一碘溶液（滴）23232323实验要求:要求仔细观察并记录实验现象，计算并分析实验结果。实验七 枯草杆菌蛋白酶活力的测定（3课时）实验类型：验证性实验目的：学习测定蛋白酶活力的方法，掌握72型分光光度计的原理和使用方法实验内容：1、绘制标准曲线2、酶活测定Na2cO3溶液酚试剂30 放置 15minA68011ml5ml1mlI21ml5ml1ml31ml5ml1ml3、计算酶活1克枯草杆菌蛋白酶在30,的条件下所具有的活力单位为:（A祥-A对）实验要求：要求掌握测定蛋白酶活力的原理和方法；

14、准确进行定量实验，计算并分析实验结果。实验八米氏常数的测定（3课时）实验类型：验证性实验目的：了解底物浓度对酶促反应速度的影响，学习测定米氏常数的原理和方法实验内容：1、向6个小锥形瓶中分别加入5ml甲醛与1滴酚酣并用L标准氢氧化钠溶液滴定至 微粉红色2、100ml酪蛋白溶液与胰蛋白溶液分别在37水浴lOmin,准确称量10ml酶液加到 酪蛋白溶液中（同时计时），混匀后，取出10ml反应液作为零时样品。向反应液中加入甲 醛、酚酿并用氢氧化钠滴定至终点，记下所用的氢氧化钠的ml数。在2、4、6、8min时分 别取10ml消化样品。按上述方法操作，每个样品滴定终点颜色应一致，用增加的地定都对 时间

15、作图测定初速度。3、配制不同浓度的酪蛋白溶液，测定不同底物浓度时的活力4、用测得的实验结果，以W对V作图，求出丫和Km的数值实验要求：要求掌握测定酶Km的原理和方法：画图、计算并分析实验结果。实验九 维生素C的定量测定（3课时）实验类型：验证性实验目的：掌握2, 6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法实验内容：1、不同样品用不同方法提取（1）松针：用水将松针洗净，用滤纸吸去表面水分。称取1g，放入研钵中，加1%HCI 溶液5ml 一起研磨。放置片刻，将提取液转入50ml容量瓶中，如此反复23次。最后用 1%HCI溶液稀释到刻度并混匀，静置lOmin,过滤，滤液备用。（2）新鲜蔬菜和水果类：水

16、洗净，用纱布或吸水纸吸干表而水分。然后称取，加2%草酸100 ml置组织搅碎机中打成浆状。称取浆状物，倒入50ml容量瓶中以2%草酸溶液稀释至刻度。静置lOmin,过滤。滤液备用。2、滴定（1）标准液滴定。准确吸取维生素C溶液（含维生素C）置100ml锥形瓶中，加9mll% 草酸，用微量滴定管以2, 6-二氯酚靛酚滴定滴定至淡红色，并保持15秒钟即为终点。由 消耗染料体枳计算出1 ml染料相当于多少mg维生素Co（2）样液滴定。准确吸取滤液两份，每份分别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同 前。3、计算：m = VT/ moxlOO实验要求：I要求掌握滴定法测定维生素C的原理和方法：计算并分

17、析实验结果。实验十核黄素的荧光光度定量测定实验类型：验证性实验目的：1、把握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，把握其基本操作。实验内容：1、系列标准溶液的制备2、激发光谱的绘制设置入em = 540nm为发射波长，在250500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长 的关系曲线，便得到激发光谱。从激发光谱图上可找出其最大激发波长入ex.3、标准溶液及样品的荧光测定将激发波长固定在最大激发波长，荧光发射波长固定在最大荧光发射波优点。测量上述系列标 准维生素B2溶液的荧光发射强度。数据记录于表2中。以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准 溶液浓度

18、为横坐标，制作标准曲线。在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度，计算 待测样品溶液中的维生素B2的含量。4、数据记录与结果分析1）激发光谱绘制过程中实验数据记录2）标准溶液及待测溶液的浓度和荧光强度数据记录：3）系列标准溶液浓度与荧光发射强度的标准曲线图：4）则待测溶液的浓度的测量实验要求：要求掌握荧光分光光度法测定维生素B2的原理和方法：计算并分析实验结果。实验十一植物组织中蔗糖酶的活力测定（5课时）实验类型：综合性实验目的：掌握植物组织中蔗糖酶的提取方法，以及蔗糖酶活力测定的原理实验内容：1、绘制标准曲线：取8支具塞试管按下表加入各试剂室温静置5mi

19、n后，向每支试管中加7ml蒸饰水，混匀，在510nm下测光吸收值，以前萄糖含量为横坐标，吸光度为纵坐 标绘制标准曲线管号12345678葡萄糖(ml) (4mmol/L)1水（ml）AANelson 试剂(ml)1111111¥1混匀，盖上塞子，置于沸水浴中水浴20min后冷却至室温硅铝酸试剂（ml）11111>1112、蔗糖酶的提取与活力测定：（1）提取蔗糖酶：称取绿豆芽3.672g于研钵中,以工ml/g加入乙酸缓冲液,在冰浴中用研 钵研磨成糊状，以12000r/min离心lOmin,留取上清夜用于酶活力测定（2）测定吸光值：取两支具塞试管，按下表加入各试剂室温静置5min后

20、，向每管中加7ml 蒸储水,510nm下比色,测定光吸收值管号空白管t样品管lml/g乙酸缓冲液（ml）L蔗糖溶液（ml）稀释5倍绿豆芽酶液（ml）%1蒸馀水（ml）1混匀，室温下放置lOminNelson 试剂（ml）1S1混匀，盖上塞子，置于沸水浴中水浴20min后冷却至室温伸铝酸试剂（ml）113、酶活力计算：室温，条件下，每分钟水解产生lumol葡萄糖所需的酶的量定义为酶的一个活力单位酶活力=测得还原糖的含量（mg） XnXvX1000/WXt上式中：n为稀释倍数9V为酶液总体积W为样品重t为反应时间lOmin实验要求：要求掌握提取酶蛋白提取与活力测定的原理和方法；准确进行定量实验，计

21、算并分析实 验结果。实验十二 紫外分光光度法测定核酸的含量（3课时）实验类型：验证性I实验目的：1、 2、学习用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法实验内容：1、分析天平准确称取核酸样品500mg,少量水调成糊状，再加水稀释，叁水调节到pH7,定容到50ml2、紫外光吸收值的测定管号样品管对照管核酸样品溶液（ml）22蒸储水（ml）2沉淀剂溶液（ml）2混匀，在冰浴中放置30min后离心（3000r7min40min）分别取两管中的上清液，蒸馈水定容至50ml, 260nm处测定其光吸收值 3、计算实验要求：要求掌握紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法；计算并分析实验结果,实验十三

22、腺甘三磷酸的测定（电泳法）实验类型：验证性实验目的：掌握纸电泳法分析腺甘三磷酸的原理和方法。实验内容：1 .样液的制备用称量瓶称取样品（可用腺昔三磷酸粗品或药用结晶品）100. Omg,用34ml蒸储水溶 解，仔细倾入10ml容量瓶中，再加12ml蒸懦水洗称量瓶2次，一并倒入容量瓶，最后用 蒸储水稀释至刻度，混匀。此溶液每亳升含样品10mgo2 .点样 .取3eraX30era滤纸3条，距滤纸一端约7cm处，用铅笔轻轻划一基线（图24）。用点样管吸取样液10tA<j）t,将样液轻轻点在滤纸基线上，用冷风吹干（三条滤纸作三个重复 测定）。于另一同样大小的滤纸条上，按同样方法点标准腺甘三磷酸

23、溶液，作标准试验。3 .电泳电泳槽两端贮液槽内都注以pH4. 8柠檬酸缓冲液。将上述滤纸条的两端用柠檬酸缓冲 液浸湿后（注意：点样处勿浸入缓冲液中!），将滤纸放在电泳槽中.点样端置负极，另一端在 正极。盖好电泳槽盖子，等滤纸条完全被缓冲液渗湿后，接通电源，调“电压至400V, 30min 后切断电源，取出灌纸条，挂在架上，置50c烘箱烘干，或用电吹风吹干。将烘干的滤纸条置紫外灯上观察，并用铅笔将斑点划出。根据标准试验腺昔三磷酸斑点 的位置，决定另三条滤纸上哪一个斑点是腺昔三磷酸。4 .洗脱取4支清洁干燥的小试管，标以0、1、2、3号码。将三条滤纸上的腺背三磷酸斑点剪 下，再剪成宽约1mm的细条

24、，分别放在1、2、3号试管内。另在无斑点处剪一和腺昔三磷酸 斑点大小相仿的滤纸，亦剪成细条，放在0号管内，作空白试验。向上述4支试管内各加5. 0ml 0. OlmOl/LHCI溶液浸提滤纸条，将腺背三磷酸洗脱浸 提2h,浸提期间经常摇动试管。5 .测定将试管内浸提液分别倒入4只石英比色杯，以0号管的浸提液调零（A=0）测定1、 2、3管浸提液A260im,计算样品中腺昔三磷酸的质量分数。实验要求：掌握纸电泳法分析腺甘三磷酸的原理及计算样品中腺昔三磷酸质量分数的方法。实验十四酵母核糖核酸的提取、鉴定与定量分析（5课时）实验类型：综合性实验目的：了解核酸的组分，学习并掌握提取、鉴定与定量测定核糖

25、核酸的方法实验内容：1、酵母核糖核酸的提取：15g酵母悬浮于90ml L氢氧化钠溶液中并研磨均匀，悬浮液移至锥形瓶沸水浴加热30min, 冷却。悬浮液中缓慢加入30ml酸性乙醉溶液并搅拌。待核酸核糖完全沉淀，3000r/min离心 3mino弃上清，沉淀用95%乙醇洗涤沉淀两次，乙酷洗涤沉淀一次后抽滤，空气中干燥沉淀。2、核糖核酸组分的鉴定：（1）水解液的制作：200g提取的核酸加入L硫酸溶液10mL沸水浴中加热lOmin制成 水解液进行组分鉴定（2）噂吟碱的鉴定：干净试管中加入水解液1ml,过量疑水及1ml L硝酸银溶液，观察 有无噂吟碱的银化合物沉淀（3）核糖的鉴定：干净试管中加入水解液1

26、ml,三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醉溶 液，沸水浴lOmin,观察溶液是否变为绿色（4）磷酸的鉴定：干净试管中加入水解液1ml及定磷试剂1mL水浴加热，观察溶液是否 变成蓝色3.酵母核糖核酸的组分定量测定（1） RNA标准曲线的绘制（2）样品液中RNA含量的测定：取2支试管，一支加入样品液（实验十四中提取的沉淀用水溶解即得）2ml和苔黑酚试剂 2mL另一支试管加入蒸储水2ml和苔黑酚试剂2ml（为对照管），混匀后，置沸水浴中显色15min, 用分光光度计在波长640nm处测光吸收值，查标准曲线，计算RNA含量实验要求：要求掌握核酸提取鉴定以及分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法：计算并

27、分析实 验结果。实验十五 糖的旋光性和变旋现象（3课时）实验类型：验证性实验目的：1、了解糖的变旋现象，掌握利用糖的旋光性测定糖浓度的方法2、学会使用旋光仪实验内容：1、标准曲线的绘制2、样品液的测定实验要求：要求掌握糖的旋光鉴定以及测定糖浓度的原理和操作方法：计算并分析实验结果。实验十六 还原糖的测定一3, 5-二硝基水杨酸法（3课时）实验类型：验证性实验目的：掌握3, 5-二硝基水杨酸法测定还原糖的基本原理，进一步学习比色法测定还原糖的操 作方法和分光光度计的使用实验内容：1、绘制标准曲线：配制不同浓度葡萄糖标准液2、还原糖的提取；3g食用面粉于50ml蒸储水中搅匀，50恒温水浴中保温20

28、min,使还原糖浸出。浸出 液于4000r/min离心5min,沉淀用20ml蒸镯水洗一次，再离心。两次离心的上清液收集 在100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液3、显色：干净试管中加入样品液，蒸馀水，进行显色反应4、比色：波长540nm5.定量：查标准曲线实验要求：要求掌握定量测定糖浓度的原理和操作方法：计算并分析实验结果。实验十七脂肪酸的B一氧化(3课时)实验类型：验证性实验目的：了解脂肪酸的B氧化作用，掌握从肝组织中测定丙胴的含量的滴定法。实验内容：1、肝糜制备：取5g猪肝研磨加NaCl配制10ml浆液2、B一氧化和酮体生成反应磷酸缓冲液正丁酸肝糜43保温13ml.2ml

29、2ml23ml2ml3、沉淀蛋白质43保温15%三氯乙酸正J酸静止15min过滤13ml23 ml2mlY4、酮体测定：记录滴定样品与滴定对照所用的硫代硫酸钠溶液的ml数。5、计算样品中丙酮的含量：肝脏中丙酮含量 6runol/g) = (A-B) x Nn. x 6实验要求：要求掌握测定丙酮的含量的滴定法，计算并分析实验结果。实验十八卵磷脂的提取、鉴定与定量测定实验类型：综合性实验目的：学习掌握以乙酸作为溶剂提取生蛋黄中的卵磷脂的原理与方法。实验内容：卵磷脂是甘油磷脂的一种，由磷酸、脂肪酸、甘油和胆碱组成。卵磷脂可溶于乙醛、乙醇 等溶剂，因而可以利用这些溶剂进行提取。卵磷脂的胆碱基在碱性条件

30、下可以分解为三甲胺， 三甲胺有特殊的鱼腥味，可以此鉴别。1、卵磷脂的提取：取15g生鸡蛋黄于150mL三角锥瓶中，加入40mL乙醛，放入磁搅拌器， 室温下搅拌提取15mina然后静置30min,上层液用带棉花塞的漏斗过滤，往残渣中再加入15mL 乙酷，搅拌提取min。第二次提取液通过过滤后，与第一次提取液合并，于60c热水浴中蒸去 乙健，将残留物质倒入烧杯中，再于真空干燥器中进行减压干燥30min,以除尽乙健，约可得 5g粗提取物。粗提取物进行离心lOmin后，下层为卵磷脂，约得-2.8g,卵磷脂可以通过冷冻干 燥得到无水的产物。2、卵磷脂的鉴定：取以上提取物约0.1g,于试管内加入10%Na

31、OH溶液2mL,水浴加热数分 钟，嗅之是否有鱼醒味，以确定是否卵磷脂。3.乳化作用：两支试管中各加入35mL水，一只加卵磷脂少许，溶解后滴加5滴花生油。 另一只也滴入5滴花生油，加塞极力振荡试管，使花生油分散。观察比较两只试管内的乳化状 态。4、定量测定：将干净的离心试管和玻棒置于100mL烧杯中，烘干、冷却后称量。5、称取在6570c时过滤的油样10g左右，注入离心管，放入烘箱中加热至40c取出。6、用移液管向离心管中加水，用玻棒猛烈搅拌Imin。然后取出玻棒，在离心管边上刮净玻 棒上的油，将离心管放入离心机中进行分离，直至吸水膨胀后析出的磷脂沉于离心管的底部。7、先倾出上层清油，再将磷脂离

32、心分离，再倾出上层清油。离心管中沉淀物用丙酮进行洗 涤，离心分离，倾出丙酮液。如此用丙酮反复洗涤分离34次，直到所得丙酮无油迹为止。8、把盛有沉淀物的离心管和玻棒放入盛有离心管的烧杯中，置105烘箱内烘至恒重。油脂的磷脂含量按下式计算：W,潴脂（箝二X 100W?式中：W1 一沉淀物重（g ）W2油样重（g）实验要求：要求在卵磷脂的提取与鉴定中仔细观察并记录实验现象，定量计算并分析实验结果。实验十九 大豆中粗脂肪含量测定和组分分析（5课时）实验类型：综合性实验目的：1 .掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法2 . 3 , 了解测定过程中误差的来源及修正方法实验内容：1、滤纸包样：将滤纸

33、切成8cmx8cm,叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺 序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入105烘箱中干燥2h,取出放入干燥器中，冷却 至室温。按顺序将各滤纸包放入同一称量瓶中称重（记作a）,称量时室内相对湿度必须低于70%2、包装和干燥：在上述己称重的滤纸包中装入3g左右研细的大豆粉，封好包口，放入105 的烘箱中干燥3h,移至干燥器中冷却至室温。按顺序号依次放入称量瓶中称重3、抽提：将装有大豆粉的滤纸包用长银子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的倍的无水乙健, 试样品包完全浸没在乙醛中。连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提， 调节水温在7080之间，使冷凝

34、而下滴的乙醛成连珠状（120150滴/min或回流7次/h以上）， 抽提至抽取筒内的乙醛用滤纸点滴检查无油迹为止（约需612h）0抽提完毕后，用长银子取出 滤纸包，在通风处使乙醛挥发（抽提室温以1225为宜）。提取瓶中的乙醛另行回收4、称重：待乙醛挥发后，将滤纸包置于105烘箱中干燥2h,放入干燥器冷却至恒重为止 （记作c）5、计算：b - c粗脂肪含量（）=xlOO b-a.上式中：a是称量瓶加滤纸包重（g）b是称量瓶加滤纸包和烘干样重（g）c是称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重（g）实验要求：要求掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法，计算并分析实验结果。实验二十 阳离子交换树脂摄取氯

35、化钠（3课时）.实验类型：验证性实验目的：学习并掌握离子交换层析法的原理和基本操作技术实验内容：1、树脂处理、转型：水浸过夜好盐酸浸泡-氢氧化钠溶液浸泡玲盐酸转型今水洗至中 性待用2、装柱：采用重力沉降法3、加样：加入6mliOg/L的氯化钠溶液4、洗脱：收集40ml洗脱液5、滴定：用L的标准氢氧化钠溶液滴定洗脱液6、计算实验要求：学习并掌握离子交换层析法的原理和装柱、洗脱及滴定等基本操作技术。实验二十一 离子交换柱层析法分离氨基酸（4课时）实验类型：综合性实验目的：1.-2学习掌握利用阳离子交换树脂柱层析法分离氨基酸的原理和操作方法3.掌握分光光度法测定皴基酸的原理与方法，以及洗脱曲线的绘制

36、实验内容：1、层析柱的准备：将强酸型阳离子交换树脂用氢氧化钠处理成钠型后洗至中性装柱2、平衡：用的柠檬酸缓冲液平衡交换柱3、加样：由柱上端加入缎基酸混合液4、洗脱：用柠椽酸缓冲液洗脱，共收集80ml左右的洗脱液5、显色及测定：各管洗脱液中加入1ml荀三酮，沸水浴15min,冷却后加入50%乙醇 溶液，放置lOmin后，以第二管为空白，测定A570,以光吸收值为纵坐标，洗脱体积为横 坐标绘制洗脱曲线。实验要求：要求掌握利用阳离子交换树脂柱层析法分离家基酸的原理和操作方法，以及洗脱曲线 的绘制。实验二十二发酵过程中无机磷的利用与ATP的生成（4课时）实验类型：综合性 实验目的：1、掌握定磷法测定无

37、机磷的原理和操作技术2、了解发酵过程中无机磷的利用与ATP生成情况实验内容：1、标准曲线制定2、酵母发酵：取酵母适量稀释后于37发酵，每隔15min取出悬浮液，立即加入三氯乙酸混匀，得无蛋白滤液，分别得到3份滤液。3、无机磷的测定管号发酵时间 (min)无蛋白 滤液 (ml)蒸馀水(ml)铝酸钺-硫 酸溶液(ml)a-l> 2, 4&基 茶酚磺酸溶液 (ml)37保温 lOmin 再 冷却至室1215温33044.ATP生成鉴定：参考实验十二 腺昔三磷酸的测定(电泳法)实验要求：要求掌握定量测定无机磷浓度的原理和操作方法；计算并分析实验结果,实验二十三乳酸脱氢酶活力测定(4课时)

38、实验类型：综合性实验目的：1. 学习从猪肉中制备肌肉匀浆的操作方法，2. 掌握测定猪肉提取液中LDH活力及比活力的方法及原理实验内容：1、制备肌肉匀浆：取瘦猪肉20g,按w/v=lA加入40预冷的10mol/L pH磷酸钾盐 缓冲液，用组织捣碎机捣碎，取匀浆液4冰箱过夜，过滤后的红色液体为组织提取液。2、LDH活力测定：预先将丙酮酸溶液及氢氧化钠溶液放在25水浴中预热。取2支 光径为1cm的石英比色杯，在1支比色杯中加入L磷酸盐缓冲液3ml,放在紫外分光光度 计中，在340nm处经光吸收调至零；另一支比色杯用于测定LDH活力，依次加入丙酮酸钠 溶液，氢氧化钠溶液，立即计时，摇匀后，每隔测A34°nm，连续测定3min,以A对时间作 图，取反应最初线性部分，计